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重组人骨形态发生蛋白-2原核表达及单克隆抗体制备
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作者 王婧 张杰 +2 位作者 张颖 马宁宁 谢良志 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期543-548,共6页
目的利用原核表达系统(E.coli)表达纯化重组人骨形态发生蛋白-2成熟肽(rhBMP-2m),并制备rh-BMP-2m的单克隆抗体。方法将工程菌株进行常规发酵,自诱导表达,裂菌离心分离包涵体,包涵体变性后经阳离子交换色谱分离纯化。纯化后的变性rhBMP... 目的利用原核表达系统(E.coli)表达纯化重组人骨形态发生蛋白-2成熟肽(rhBMP-2m),并制备rh-BMP-2m的单克隆抗体。方法将工程菌株进行常规发酵,自诱导表达,裂菌离心分离包涵体,包涵体变性后经阳离子交换色谱分离纯化。纯化后的变性rhBMP-2m经稀释复性,获得具有生物学活性的rhBMP-2m。并以此作为抗原,免疫Balb/c小鼠制备单克隆抗体。结果获得还原SDS-PAGE下95%以上纯度的rhBMP-2m。细胞活性结果分析显示,所获得的rhBMP-2m具有较强的生物学活性。免疫小鼠最终获得两株稳定分泌抗rhBMP-2m抗体的杂交瘤细胞株。结论成功制备了具有生物学活性的rhBMP-2m及其单克隆抗体,为rhBMP-2未来的研究和制备奠定良好的基础。 展开更多
关键词 重组人形态发生蛋白-2成熟 蛋白复性 单克隆抗体
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人骨形态发生蛋白2(BMP-2)在巴斯德毕赤酵母中的表达 被引量:4
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作者 梁东春 左爱军 +2 位作者 王宝利 郭刚 张镜宇 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第7期61-65,共5页
以重组质粒pUC-BMP2为模板PCR扩增人BMP-2成熟肽编码序列,将该序列克隆入pGEM-T载体进行DNA序列分析后亚克隆入分泌型毕赤酵母表达载体pPIC9K中。重组质粒oPIC9K-BMP2经BelⅡ酶切后回收线性化片段,聚乙二醇法转染毕赤酵母茵株GS115。PC... 以重组质粒pUC-BMP2为模板PCR扩增人BMP-2成熟肽编码序列,将该序列克隆入pGEM-T载体进行DNA序列分析后亚克隆入分泌型毕赤酵母表达载体pPIC9K中。重组质粒oPIC9K-BMP2经BelⅡ酶切后回收线性化片段,聚乙二醇法转染毕赤酵母茵株GS115。PCR筛选整合有人BMP-2基因的酵母细胞重组子,以甲醇进行诱导表达,于酵母细胞培养基中可检测到rhBMP-2。体外培养条件下,所得rhBMP-2可增加2T3小鼠成骨细胞内碱性磷酸酶活性;体内实验.rhBMP-2冻干粉可于小鼠骨四头肌肌袋中诱导软骨细胞群产生。 展开更多
关键词 巴斯德毕赤酵母 形态发生蛋白 rhBMP-2 DNA序列分析 碱性磷酸酶活性 酵母表达载体 体外培养条件 重组质粒 PCR扩增 聚乙二醇法 细胞培养基 编码序列 酵母菌株 酵母细胞 诱导表达 体内实验 成熟 PUC 分泌型 亚克隆 T载体
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骨形态发生蛋白2活性多肽/重组胶原矿化骨复合材料修复大鼠颅骨缺损
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作者 吴斌 郑启新 +5 位作者 郭晓东 吴永超 赵晶晶 王玉 冯庆玲 崔福斋 《中华创伤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期1010-1012,共3页
胶原矿化骨是一种对天然骨进行结构仿生的骨修复材料,具有良好的生物相容性、生物降解性、骨传导性,但是缺乏良好的骨诱导性。为改善其骨诱导性,笔者以骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein 2,BMP2)的核心功能区为模板,... 胶原矿化骨是一种对天然骨进行结构仿生的骨修复材料,具有良好的生物相容性、生物降解性、骨传导性,但是缺乏良好的骨诱导性。为改善其骨诱导性,笔者以骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein 2,BMP2)的核心功能区为模板,设计合成含24个氨基酸的具有骨诱导活性的多肽,将其与重组胶原矿化骨复合,构建新型仿生骨修复材料,植入大鼠颅骨缺损处,评价其修复骨缺损的能力,为下一步临床应用提供实验依据。 展开更多
关键词 形态发生蛋白2 修复材料 缺损 胶原矿化 复合材料 活性多 大鼠 重组
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大鼠股骨缺损模型中BBP增强BMP-2的骨诱导作用 被引量:3
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作者 费志强 熊建义 +6 位作者 刘志勇 黄江鸿 沈慧勇 刘照华 王大平 黄德民 梁加利 《生物骨科材料与临床研究》 CAS 2013年第4期1-7,65,66,共9页
目的验证在大鼠节段性骨缺损模型中骨形态发生蛋白结合肽(BMP Binding Peptide,BBP)对于重组人骨形态发生蛋白-2(recombinent human bone morphogenetic protein-2,rhBMP-2)骨诱导作用的影响。方法 70只缺损大鼠分别分成7组,每组不... 目的验证在大鼠节段性骨缺损模型中骨形态发生蛋白结合肽(BMP Binding Peptide,BBP)对于重组人骨形态发生蛋白-2(recombinent human bone morphogenetic protein-2,rhBMP-2)骨诱导作用的影响。方法 70只缺损大鼠分别分成7组,每组不同剂量的rhBMP-2+/-1000 gBBP,4w和8w后分别摄片,动物8w后处死,股骨样本分别手工评估,采用uCT测量骨容积,随后分别采用组织学和生物力学分析。结果高剂量(10 g)rhBMP-2组术后8w可见骨愈合,骨缺损处骨完全覆盖和桥接,但低剂量(5 g和2 g)rhBMP-2组术后8w骨愈合欠佳。与单独应用rhBMP-2相比,使用低剂量的rhBMP-2复合一定量的BBP可以取得更满意的骨形成量。BBP增强rhBMP-2的骨形成活性发生于4~8w时,而在术后早期并无明显作用。单纯应用BBP仅可见骨缺损处局部的钙化,未见骨愈合。结论 BBP能显著增强rhBMP-2的骨形成活性,这种增强作用需要一定时间来产生效果;其活性发生于术后4~8w时,在术后早期并无明显作用。而且BBP本身并没有骨诱导潜力,仅仅能增强rhBMP-2的骨形成活性。BBP起到缓释作用,与rhBMP-2紧密结合后,让rhBMP-2缓慢而持久的释放。 展开更多
关键词 重组人形态发生蛋白-2 形态发生蛋白结合 缺损 愈合
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srhBMP2m、Dex对体外状态下新西兰白兔MSC增殖的影响
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作者 刘丹平 栗刚 +4 位作者 蒲勤 郑振家 胡蕴玉 张男 郭韬 《中华国际医学杂志》 2003年第4期283-286,共4页
目的 观察可溶性重组人骨形态发生蛋白2成熟肽(srhBMP2m)和地塞米松(Dex)对体外状态下新西兰白兔骨髓基质细胞(MSC)增殖的影响。方法 经过12d原代培养后将MSC传代再培养5d,用胰蛋白酶消化后将其定量(2×10^3个/孔)接种于96孔板中... 目的 观察可溶性重组人骨形态发生蛋白2成熟肽(srhBMP2m)和地塞米松(Dex)对体外状态下新西兰白兔骨髓基质细胞(MSC)增殖的影响。方法 经过12d原代培养后将MSC传代再培养5d,用胰蛋白酶消化后将其定量(2×10^3个/孔)接种于96孔板中,按实验要求分别加入不同浓度的上述两种因子,分别在第7天和第3天用MTT法和^3H—TdR掺入法检测细胞的增殖情况。结果 MTT法检测当srhBMP2m浓度≥1200ng/ml时抑制MSC增殖(P<0.05或P<0.01);^3H—TdR掺入法检测当srhBMP2m的浓度超过1600ng/ml时方才显示对MSC增殖的抑制作用(P<0.05);两种检测方法均显示当Dex浓度≥10^-7M时明显抑制MSC增殖(P<0.05或P<0.01)。结论 体外状态下高浓度的srhBMP2m和Dex明显抑制MSC增殖,本研究为应用两种因子刺激MSC成骨提供了实验资料。 展开更多
关键词 srhBMP2m DEX 新西兰白兔 MSC 地塞米松 可溶性重组人骨形态发生蛋白2成熟肽 髓基质细胞 细胞增殖
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徐放:探索无止境
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作者 石晓萍 《科学中国人》 2004年第11期59-59,共1页
徐放,浙江华东医药集团公司医学分子生物学教授级高级工程师。从1978年开始,徐放先后在温州医学院、金华市人民医院、金华市中心医院、美国华盛顿大学医学院、华东医药集团公司工作。在治病救人,救死扶伤的同时,徐放还担任了中国生物工... 徐放,浙江华东医药集团公司医学分子生物学教授级高级工程师。从1978年开始,徐放先后在温州医学院、金华市人民医院、金华市中心医院、美国华盛顿大学医学院、华东医药集团公司工作。在治病救人,救死扶伤的同时,徐放还担任了中国生物工程杂志理事会理事、浙江省科技厅生物工程专家组组员、国外医学《骨科分册》编委、生物技术通讯理事及浙江大学药学院兼职教授。收获了累累的学术成果:1998底徐放获得了杭州市医药系统十佳科技工作者光荣称号;1999年,他又获得了医药管理局科学技术进步优秀个人奖;2001年徐放发明的一种制备骨修复材料的方法获英国国际专利开发金奖;2002徐放骨优导的研发——一种新的生物活性材料又获得了杭州市科技进步一等奖。 展开更多
关键词 成熟 形态蛋白 修复材料 截短型 注射 重组人形态发生蛋白-7 生物活性材料 凝胶型 制备 专利
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