骨髓可溶性B细胞成熟抗原表达在多发性骨髓瘤患者中作为BCMA CAR-T细胞疗效预测指标的研究

目的探索多发性骨髓瘤(MM)患者骨髓可溶性B细胞成熟抗原(sBCMA)表达对靶向B细胞成熟抗原(BCMA)的嵌合抗原受体T细胞(CAR-T细胞)治疗疗效及安全性的影响。方法以2018年1月至2021年12月接受人源化抗BCMA CAR-T细胞临床试验的29例复发/难治MM(RRMM)患者为研究对象。流式细胞术检测抗BCMA CAR-T细胞治疗前后骨髓sBCMA的表达并进行差异比较。结果①BCMA CAR-T细胞治疗2个月,20例(68.97%)患者获得总体反应(OR),9例患者仅为病情稳定(SD)或微小缓解(MR)。②20例OR组患者骨髓sBCMA表达治疗前高于治疗后[26926(18215,32488)ng/L对9968(6634,11459)ng/L,P<0.001];而MR+SD组患者骨髓sBCMA表达治疗前后差异无统计学意义[41187(33816,47046)ng/L对33954(31569,36256)ng/L,P=0.145];CAR-T细胞治疗前骨髓sBCMA表达OR组低于MR+SD组患者(P=0.005)。③全部29例RRMM患者CAR-T细胞峰值与骨髓sBCMA表达无明显线性相关性(R2=0.035,P=0.330)。④sBCMA表达水平与CAR-T细胞治疗不良事件严重程度的相关性:0~1级细胞因子释放综合征(CRS)组(13例)与2~4级CRS组(16例)比较骨髓sBCMA表达差异无统计学意义[32045(18742,40801)ng/L对29102(24679,38776)ng/L,P=0.879];0级免疫效应细胞相关神经毒性综合征(ICANS)组(22例)与1~3级ICANS组(7例)比较骨髓sBCMA表达差异无统计学意义[30073(19375,40065)ng/L对33816(22933,43459)ng/L,P=0.763]。结论骨髓sBCMA表达与RRMM患者接受BCMA CAR-T细胞治疗的疗效有关,但与不良事件严重程度无显著相关性。或可作为RRMM患者接受BCMA CAR-T细胞治疗的疗效预测标志物。

动脉灌注化疗联合细胞因子诱导杀伤细胞治疗晚期卵巢癌疗效及对患者血清癌胚抗原、糖类抗原125、可溶性B7-H4蛋白水平的影响

目的:探讨卵巢癌动脉灌注化疗联合细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)治疗晚期卵巢癌疗效及对患者血清癌胚抗原(CEA)、糖类抗原125(CA125)、可溶性B7-H4蛋白(sB7-H4)水平的影响。方法:选择103例晚期卵巢癌患者,随机分为两组,对照组(n=52)行动脉灌注化疗,观察组(n=51)行动脉灌注化疗联合CIK治疗。评价两组患者治疗效果,比较治疗前后卵巢血流参数指标搏动指数(PI)、阻力指数(RI)、收缩期峰值流速(PSV)变化及血清癌胚抗原CEA、CA125、sB7-H4水平变化,随访3年,记录两组患者3年生存率。结果:观察组总有效率88.23%高于对照组的61.54%(P<0.05)。治疗后观察组PI、RI值较对照组升高,RSV值较对照组降低(均P<0.05)。治疗后观察组血清CEA、CA125、sB7-H4水平低于对照组(均P<0.05)。观察组3年生存率为78.43%高于对照组3年生存率为57.69%(P<0.05)。结论:卵巢癌患者行髂内动脉灌注化疗联合CIK治疗是一种安全、有效的治疗手段,但对于化疗中药物的使用及剂量大小仍需进一步研究,以确定选择最优药物和制定最佳治疗方案。

多发性骨髓瘤单克隆抗体疗法、靶向B细胞成熟抗原疗法研究进展

多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)是一种以骨髓中单克隆浆细胞恶性增殖为特征的血液系统疾病。尽管多种新型药物的应用使患者生存及预后有所改善,但很大程度上仍复发难治。单克隆抗体靶抗原、B细胞成熟抗原均在骨髓瘤细胞上高表达,是理想的靶抗原,因此针对靶抗原的单克隆抗体疗法及靶向B细胞成熟抗原疗法在多发性骨髓瘤中显示出较好的临床疗效。现结合相关文献对上述两种疗法的研究进展进行综述。

肺癌化疗后肺部感染病原菌的分布及血清细胞角蛋白19片段抗原、高迁移率族蛋白B1及可溶性血红蛋白清道夫受体的诊断价值

目的探讨肺癌化疗后肺部感染病原菌分布及血清细胞角蛋白19片段抗原(CYFRA21-1)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、可溶性血红蛋白清道夫受体(sCD163)水平变化和诊断价值。方法将2022年7月—2023年11月收治的83例肺癌化疗患者根据肺部感染情况分为未感染组(n=43)和感染组(n=40)。收集肺癌化疗患者痰液标本,记录标本来源并进行菌种鉴定。比较2组血清CYFRA21-1、HMGB1、sCD163水平变化;采用多因素Logistic回归模型分析肺癌化疗后肺部感染的影响因素;分析血清CYFRA21-1、HMGB1、sCD163水平对肺癌化疗后肺部感染的诊断价值。结果80例肺癌化疗患者中,发生肺部感染者40例;病原菌检测出55株,其中革兰阴性菌、革兰阳性菌分别为34、18株,占比61.82%、32.73%,真菌仅3株,占比5.45%。感染组血清CYFRA21-1、HMGB1、sCD163水平均高于未感染组,差异有统计学意义(P<0.05)。年龄、肺部疾病史、CYFRA21-1、HMGB1、sCD163为肺癌化疗患者发生肺部感染的影响因素(P<0.05)。血清CYFRA21-1、sCD163、HMGB1水平诊断肺癌化疗后肺部感染的曲线下面积依次为0.677、0.763、0.819(P<0.05)。结论肺癌化疗后,肺部感染患者病原菌以革兰阴性菌为主,血清CYFRA21-1、HMGB1、sCD163水平显著升高,其可作为早期诊断和评估感染的生物学指标。

靶向B细胞成熟抗原嵌合抗原受体T细胞治疗浆细胞白血病1例并文献复习

目的:探讨浆细胞白血病(PCL)临床特点及治疗方案,提高对该疾病的认识。方法:回顾性分析安徽医科大学第二附属医院收治的1例PCL患者临床资料。结果:患者经4线药物治疗,在第三次复发后病情快速进展,接受靶向B细胞成熟抗原嵌合抗原受体T细胞治疗后获得持续14月的无进展生存,未发生细胞因子释放综合征。结论:抗B细胞成熟抗原嵌合抗原受体T细胞可能为潜在的PCL患者治疗方法。

BCMA CAR-T细胞治疗复发/难治性浆母细胞淋巴瘤:个案研究与临床启示

浆母细胞淋巴瘤(plasmablastic lymphoma,PBL)是一种罕见的侵袭性大B细胞淋巴瘤亚型,预后较差且目前缺乏标准治疗方案。常用的治疗策略包括化疗、蛋白酶体抑制剂、免疫调节剂、CD30和CD38单克隆抗体以及自体造血干细胞移植等均未获得理想的治疗结果。嵌合抗原受体T(chimeric antigen receptor T,CAR-T)细胞疗法已为弥漫性大B细胞淋巴瘤和多发性骨髓瘤的管理带来了变革,这也为PBL患者带来了希望。然而,目前尚缺乏CAR-T细胞在PBL治疗中应用的经验及数据支持。本文报告1例老年PBL患者在接受B细胞成熟抗原CAR-T细胞治疗后获得完全缓解的经验。

B细胞成熟抗原BCMA在细胞内诱导NF-κB的活化

目的 :研究细胞表面B细胞成熟抗原 (B cellmatu rationantigen ,BCMA)在B细胞激活因子刺激下 ,对转录因子NF κB是否具有激活作用 .方法 :采用电转移基因转染和卤化钙基因转染方法 ,将BCMA和C末端缺失 80个氨基酸残基的BCMA基因 (BCMAΔC80 )分别转染 3T8细胞及kbgfp细胞 ,观察与NF κB启动子下游的报告基因表达水平的变化 .结果 :BCMA在 3T8细胞中经BAFF激活后可上调报告质粒中CD14基因的表达 ,而C末端缺失 80个氨基酸残基的突变BCMA(BCMAΔC80 )则不具备此功能 .同时在另一报告细胞系kbgfp中亦观察到类似作用 .结论 :细胞表面的BCMA在被B细胞激活因子刺激后 ,可引起NF κB的活化 ,这一作用依赖于BCMA的C末端的 80个氨基酸残基 .

靶向BCMA的嵌合抗原受体T细胞治疗三重难治性多发性骨髓瘤的研究进展

目前,尽管在以蛋白酶体抑制剂(PIs)、免疫调节剂(IMiDs)和抗CD38单克隆抗体(MoAbs)等为主的新药时代下,多发性骨髓瘤(MM)患者的生存期得到了显著的提高,但复发与进展仍不可避免,复发后对后续治疗的反应持续时间越来越短,最终出现顽固性耐药。三重难治性多发性骨髓瘤(TCR MM)是目前治疗的难点。B细胞成熟抗原(BCMA)是MM理想的靶抗原,靶向BCMA的嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)疗法产生了持久而深度的缓解,显著改善了TCR MM患者的预后。现结合相关文献对上述疗法在临床方面的最新进展进行综述,旨在为临床治疗提供更多理论参考。

日本血吸虫可溶性虫卵抗原对B细胞的活化作用及其机制的初步研究

目的:观察日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)是否能够诱导小鼠B细胞活化及其机制。方法:SEA和脂多糖(LPS)分别体外刺激小鼠脾脏CD19+B细胞,72 h后用流式细胞术分别检测B细胞表面CD80、CD86及CD40的表达和B细胞细胞周期的改变;用荧光染料CFSE分裂法检测B细胞增殖;用ELISA法检测培养上清中白介素(IL-)10、IL-6、γ干扰素(IFN-γ)和转化生长因子β(TGF-β)的水平。同时利用ERK、JNK、p38MAPK和NF-κB信号转导抑制剂检测B细胞分泌细胞因子水平的变化。结果:SEA与LPS组可以活化小鼠脾脏CD19+B细胞,使其表面高表达CD80、CD86和CD40;同时诱导S/G2期的B细胞比例显著增加,SEA可以诱导B细胞增殖。SEA与LPS能刺激脾脏CD19+B细胞分泌高水平的IL-10、IL-6。分别阻断NF-κB、ERK、JNK和p38MAPK信号转导通路后可以抑制B细胞IL-10和IL-6的分泌。结论:SEA可以上调小鼠脾脏B细胞表面共刺激分子表达、促进其增殖。同时,SEA可以通过NF-κB、ERK、JNK和p38MAPK信号转导通路刺激小鼠B细胞分泌细胞因子。

基于BCMA突变体构建BCMA CAR-T细胞体外杀伤功能评价模型

目的:为解决野生型B细胞成熟抗原(BCMA)被γ分泌酶切割导致表达不稳定的问题,构建抵抗γ分泌酶切割的BCMA突变体并构建靶细胞,用于评价BCMA CAR-T细胞的杀伤功能。方法:将野生型BCMA的穿膜域替换为人CD8α穿膜域,构建抵抗γ分泌酶切割的BCMA突变体(BCMA-CD8αTM),构建过表达该突变体的U266(U266^(BCMA Mut))、K562(K562^(BCMA Mut))、SKOV3(SKOV3^(BCMA Mut))和CHO(CHO^(BCMA Mut))细胞;构建装载NFAT-EGFP报告基因的BCMA CAR Jurkat细胞(BCMA-CAR-Jurkat-Reporter)与U266^(BCMA Mut)细胞共培养,采用FCM检测该细胞中EGFP表达水平以指示NFAT激活水平,荧光素酶法检测BCMA CAR-T细胞对Luciferase标记的K562^(BCMA Mut)细胞的杀伤作用,实时无标记动态细胞分析技术(RTCA)检测BCMA CAR-T细胞对SKOV3^(BCMA Mut)和CHO^(BCMA Mut)细胞的杀伤作用。结果:应用γ分泌酶抑制剂LY411575抑制γ分泌酶活性,显著增强野生型U266细胞表面BCMA表达水平,平均荧光强度上调10倍以上;但撤除抑制剂后BCMA表达水平逐渐降低(P<0.01);BCMA-CD8αTM突变体可抵抗γ分泌酶的切割作用,在U266细胞表面稳定表达(P>0.05);U266细胞及过表达BCMA-CD8αTM的U266细胞与BCMA-CAR-Jurkat-Reporter细胞共培养后都可激活Reporter系统、增强EGFP表达,但该效应在BCMA-CD8αTM过表达的U266细胞中更显著(P<0.01);BCMA-CD8αTM在BCMA表达阴性的K562、SKOV3和CHO 3种靶细胞中成功过表达,且在LY411575处理下该突变体的表达水平仅有小幅度升高;荧光素酶法检测结果显示,不同效靶比下,BCMA CAR-T细胞均可特异、高效杀伤过表达BCMA-CD8αTM的K562细胞;RTCA结果显示,不同效靶比下,BCMA CAR-T细胞均可有效识别、杀伤过表达BCMACD8αTM的SKOV3和CHO细胞,但同等效靶比下的Mock-T细胞无此效应。结论:本实验构建的BCMA-CD8αTM突变体能够抵抗γ分泌酶的切割,在多种靶细胞表面稳定表达,为评价BCMA CAR-T细胞体外杀伤的有效性和特异性提供多种检测手段。

靶向BCMA的CAR-γδT细胞抗多发性骨髓瘤的疗效

目的构建靶向B细胞成熟抗原(BCMA)的嵌合抗原受体γδT细胞(BCMA CAR-γδT),在体外初步评价其抗多发性骨髓瘤的疗效。方法构建包含BCMA单链抗体序列的三代CAR分子的慢病毒载体,瞬时转染293T细胞,荧光显微镜和Western blot验证外源基因的表达情况;包装慢病毒,用流式细胞术测定病毒滴度;分别感染人外周血αβT细胞和γδT细胞,检测感染效率;LDH法检测BCMA CAR-γδT细胞对人多发性骨髓瘤细胞系的体外细胞毒活性,并用Incucyte实时细胞分析系统比较BCMA CAR-γδT细胞与BCMA CAR-T细胞的细胞毒活性差异。结果将BCMA-CAR慢病毒载体转入293T细胞24 h后,荧光显微镜观察到外源ZsGreen的表达;Western blot检测CD3ζ证明BCMA-CAR能顺利表达。慢病毒包装后,收集感染上清浓缩,测得病毒滴度为2.23×10^(8)Tu/mL。用MOI=5感染人外周血αβT细胞与γδT细胞,流式检测结果显示αβT细胞感染效率为59.18%±2.56%,γδT细胞感染效率为48.15%±9.86%。LDH杀伤实验结果显示,CAR-γδT细胞对BCMA高表达的人骨髓瘤细胞系MM1.S、H929和过表达BCMA的K562细胞的细胞毒活性较空载体对照γδT细胞显著增强(P<0.001),而对BCMA表达阴性的细胞系无差异;活细胞时程分析系统结果显示,BCMA CAR-γδT细胞与BCMA CAR-αβT细胞在体外对H929的细胞毒活性均显著优于其空载体对照细胞,且均对BCMA表达阴性的细胞系的细胞毒活性无差异。结论BCMA CAR-γδT细胞在体外显示出明显增强的靶向BCMA的细胞毒活性,有望作为新型同种异体γδT细胞产品,用于多发性骨髓瘤的细胞过继免疫治疗。

靶向BCMA的CAR-NK细胞构建及治疗多发性骨髓瘤的实验研究

探讨靶向B细胞成熟抗原(BCMA)的CAR-NK细胞构建及其在治疗多发性骨髓瘤中的疗效和安全性。方法 多发性骨髓瘤(MM)是一种恶性肿瘤,其发病率日益增加,治疗效果有限。基于靶向细胞免疫疗法的最新进展,我们构建了一种靶向BCMA的CAR-NK细胞,以评估其在治疗多发性骨髓瘤中的潜在效果。通过密度梯度离心法从健康供者外周血中分离出淋巴细胞,再用流式细胞分选法,通过染色标记NK细胞表面分子如CD56、CD16等,在流式仪上直接分选富集NK细胞。通过离体慢病毒转移系统将BCMA特异性嵌合抗原受体(CAR)基因导入NK细胞。体外检测CAR-NK细胞的特异性细胞毒性。结果 体外实验显示,CAR-NK细胞对BCMA阳性的肿瘤细胞系具有显著的特异性杀伤作用。结论 BCMA特异性CAR-NK细胞具有显著的抗多发性骨髓瘤活性,并表现出良好的安全性,为临床治疗奠定了基础。

以B细胞成熟抗原为靶点的免疫疗法在多发性骨髓瘤中的研究进展

B细胞成熟抗原(BCMA)是一种表达于晚阶段B淋巴细胞及浆细胞表面的跨膜蛋白,特异地高表达于多发性骨髓瘤(MM)细胞。从MM癌变前期、潜伏期到活跃期,其表达水平逐渐升高,是MM免疫治疗的理想靶点。近年来,针对BCMA的免疫疗法包括抗体药物偶联物(ADC)、双特异性抗体(BsAb)和嵌合抗原受体T细胞免疫(CAR-T)疗法等在复发/难治MM治疗中获得显著疗效,BCMA作为MM的免疫治疗靶点显示出极大的发展潜力。

靶向B细胞成熟抗原的嵌合抗原受体T细胞的构建及其对肿瘤细胞的杀伤

目的:探索通过嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor,CAR)-T细胞靶向B细胞成熟抗原(B cell maturation antigen,BCMA)以治疗多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)的方法。方法:构建基于鼠源BCMA scFv的CAR-BCMA分子,包装为慢病毒载体并感染健康人T细胞构建CAR-BCMA-T细胞;构建BCMA阳性细胞系A549-BCMA、A549-BCMAOFP和K562-BCMA作为靶细胞。将CAR-BCMA-T细胞与构建的靶细胞和人骨髓瘤细胞U266共孵育,CCK-8法和流式细胞术检测其对BCMA阳性肿瘤细胞的杀伤能力。构建MM患者来源CAR-BCMA-T细胞并检测其杀伤靶细胞A549-BCMA的能力,并采用ELISA和流式细胞术检测CAR-BCMA-T细胞IFN-γ的释放水平。结果:健康人来源的CAR-BCMA-T经过11 d培养扩增300倍,阳性率达到43%;成功构建BCMA阳性靶细胞。在5:1效靶比下,CAR-BCMA-T对A549-BCMA、K562-BCMA和U266细胞的杀伤率分别在80%、60%和80%左右,显著高于对BCMA阴性细胞的杀伤率,且杀伤力与靶细胞的BCMA表达强度相关。在效靶比20:1时,MM患者来源CAR-BCMA-T细胞对靶细胞A549-BCMA的杀伤率达到95%以上,并且大量分泌IFN-γ。结论:本研究成功构建了健康人及MM患者来源的靶向BCMA的CAR-T细胞,其能够有效特异杀伤BCMA阳性的肿瘤细胞。

B细胞成熟抗原（BCMA）靶向免疫治疗多发性骨髓瘤的研究进展

B细胞成熟抗原(B cell maturation antigen,BCMA)因其在恶性骨髓瘤细胞上高度选择性表达,故是理想的精准治疗靶点。本文就BCMA的生物学活性、作为生物标志物的意义以及针对抗B细胞成熟抗原开发的免疫疗法(双特异性抗体,抗体药物偶联物,嵌合抗原受体T细胞疗法)的最新研究进展作一综述。

人B细胞成熟抗原的克隆、表达及纯化

目的构建人B细胞成熟抗原(BCMA)原核表达质粒,表达BCMA融合蛋白。方法通过RT-PCR方法从人B淋巴瘤Raji总RNA中扩增BCMA的全长cDNA,并插入原核表达载体PGEX4T-1的BamHI和NotI酶切位点,构建原核表达载体PGEX4T-1-BCMA,利用酶切和序列分析方法验证所构建质粒的正确性。在大肠杆菌中表达BCMA融合蛋白,并经谷胱甘肽-S-转移酶(GST)亲和柱纯化。纯化后的产物经过SDS-PAGE、Western blot检测目的蛋白的表达情况。结果 BamHI/NotI双酶切证明重组质粒中含有目的大小的BCMA基因片段,序列分析证明重组质粒中插入片段的碱基序列均完全正确。将所构建的PGEX4T-1-BCMA质粒转染感受态DH5α,IPTG诱导表达后超声裂解菌体,上清经GST亲和纯化,经SDS-PAGE、抗GST和BCMA抗体Western blot分析,证实融合表达蛋白为GST-BCMA融合蛋白。结论成功构建了BCMA原核表达载体,重组质粒能够在原核表达系统中可溶性表达GSTBCMA融合蛋白,为进一步研究BCMA的生物学功能奠定了基础。

检测B细胞成熟抗原的噬菌体展示单链抗体实时荧光定量免疫PCR方法建立

目的建立检测B细胞成熟抗原(BCMA)的噬菌体展示单链抗体实时荧光定量免疫PCR(PDRT-IPCR)方法。方法采用无缝克隆技术将抗体ANTI-BCMA片段连接入噬菌体M13KO7中,构建重组噬菌体质粒M13KO7-ANTI-BCMA,保存于E.coli DH5α感受态细胞中,通过PEG/NaCl溶液低温沉降后获得重组噬菌体M13KO7-ANTI-BCMA。采用Western Blotting法鉴定重组噬菌体M13KO7-ANTI-BCMA是否展示抗BCMA单链抗体。以不同浓度的BCMA包被96孔高吸附酶标板,加入重组噬菌体M13KO7-ANTI-BCMA,热裂解后,以裂解噬菌体的DNA作为扩增模板,进行实时荧光定量PCR,观察不同浓度BCMA的实时荧光定量PCR扩增曲线。运用OriginPro2021软件进行四参数Logistic拟合曲线,根据相关系数R^(2)确定线性范围,计算最低检测限。以重组噬菌体M13KO7-ANTI-CD19和噬菌体M13KO7为对照,验证PDRT-IPCR方法检测BCMA的特异性。结果抗BCMA单链抗体成功展示在重组噬菌体M13KO7-ANTI-BCMA表面。随着BCMA包被浓度的降低,对应扩增曲线的CT值逐渐变大,PDRT-IPCR检测BCMA的线性范围为0.1 ng/mL~1000 ng/mL,R^(2)为0.9993,最低检测限为0.077 ng/mL。重组噬菌体M13KO7-ANTI-BCMA与BCMA的结合是特异性的。结论本研究建立了检测BCMA的PDRT-IPCR方法,该检测方法具有检测限灵敏、线性范围宽、特异性高等特点。

《中国肿瘤临床》文章推荐:靶向B细胞成熟抗原在多发性骨髓瘤中的治疗进展

过去20年,多发性骨髓瘤(MM)的治疗取得了较大的进展,患者的生存时间获得显著延长,但多数患者最终仍会复发或变为难治性,MM仍然无法治愈。B细胞成熟抗原(BCMA)的表达仅限于一些B细胞谱系,在MM细胞上广泛表达,是MM的一个理想靶抗原。

《中国肿瘤临床》文章推荐:靶向B细胞成熟抗原在多发性骨髓瘤中的治疗进展

过去20年,多发性骨髓瘤(MM)的治疗取得了较大的进展,患者的生存时间获得显著延长,但多数患者最终仍会复发或变为难治性,MM仍然无法治愈。B细胞成熟抗原(BCMA)的表达仅限于一些B细胞谱系,在MM细胞上广泛表达,是MM的一个理想靶抗原。多种靶向BCMA的治疗,包括嵌合抗原受体(CAR)T细胞、双特异性抗体(BsAbs)和抗体-药物偶联物(ADC),在复发/难治性MM患得显著的临床效果。2022年第49卷第20期《中国肿瘤临床》血液肿瘤专栏专家论坛栏目刊发了中国医学科学院血液病医院(中国医学科学院血液学研究所)安刚教授撰写的《靶向B细胞成熟抗原在多发性骨髓瘤中的治疗进展》一文,综述了近年来MM靶向BCMA治疗的研究进展,希望为同道提供临床与研究的参考价值。