小鼠可溶性IL-5受体α胞外区基因的克隆及原核表达

目的克隆并原核表达小鼠可溶性IL-5受体α(sIL-5Rα)胞外区基因。方法采用RT-PCR从BALB/c小鼠脾脏组织中分别扩增sIL-5Rα胞外区前后段基因片段,酶切后将两段基因连接,插入原核表达载体pPROEX中,构建重组表达质粒pPROEX/sIL-5Rα,转化大肠杆菌DH5α,IPTG诱导表达。采用SDS-PAGE和Western blot检测目的蛋白的表达。结果重组表达质粒经双酶切和DNA测序,证实构建正确。表达的sIL-5Rα胞外区蛋白相对分子质量约36100,表达量约占菌体总蛋白的30%,且可与兔抗小鼠sIL-5Rα单抗发生特异性免疫反应。结论已成功克隆并原核表达了小鼠sIL-5Rα胞外区基因,为进一步探讨sIL-5Rα对哮喘的治疗作用及开发新的哮喘治疗药物奠定了基础。

联合应用重组可溶性IL-13受体α2及可溶性IL-5受体对支气管哮喘小鼠BALF嗜酸粒细胞凋亡及Eotaxin的影响

目的联合应用重组可溶性IL-13受体α2(sIL-13Rα2)及重组可溶性IL-5受体(sIL-5R)治疗支气管哮喘(简称哮喘)小鼠模型,观察对支气管肺泡灌洗液(BALF)嗜酸粒细胞(EOS)凋亡率以及嗜酸粒细胞趋化因子(Eotaxin)水平的影响并探讨其相关机制。方法将50只BALB/c小鼠随机分成5组:正常对照组、哮喘组、sIL-13Rα2治疗组、sIL-5R治疗组及联合治疗组。鸡卵白蛋白(OVA)建立哮喘小鼠模型。sIL-13Rα2治疗组、sIL-5R治疗组及联合治疗组每次激发前30min分别腹腔注射sIL-13Rα2100μg、sIL-5R100μg及sIL-13Rα2、sIL-5R各100μg干预,正常对照组及哮喘组生理盐水代替。应用流式细胞术(FCM)检测各组BALF中EOS凋亡率,酶联免疫吸附试验(ELISA)测定Eotaxin水平。结果①与正常对照组比较,哮喘组BALF中EOS数目百分比、Eotaxin水平均显著升高(P值均<0.01),EOS凋亡率明显下降(P<0.01)。②与哮喘组比较,sIL-13Rα2治疗组、sIL-5R治疗组及联合治疗组BALF中EOS数目百分比及Eotaxin水平均明显降低(P值均<0.01),EOS凋亡率明显增高(P<0.05)。③与单独治疗组比较,联合治疗组效果更佳(P<0.05)。结论联合应用sIL-13Rα2及sIL-5R能够明显增加哮喘小鼠EOS凋亡,明显降低Eotaxin水平,可明显减少EOS肺部浸润,改善气道炎症,较单用更具有临床应用价值。

联合应用重组可溶性IL-13受体α2及可溶性IL-5受体对支气管哮喘小鼠BALF嗜酸粒细胞凋亡及Eotaxin的影响

目的联合应用重组可溶性IL-13受体α2（sIL-13Rα2）及重组可溶性IL-5受体（sIL-5R）治疗支气管哮喘（简称哮喘）小鼠模型，观察对支气管肺泡灌洗液（BALF）嗜酸粒细胞（EOS）凋亡率以及嗜酸粒细胞趋化因子（Eotaxin）水平的影响并探讨其相关机制。方法将50只BALB／c小鼠随机分成5组：正常对照组、哮喘组、sIL-13Rα2治疗组、sIL-5R治疗组及联合治疗组。鸡卵白蛋白（OVA）建立哮喘小鼠模型。sIL-13Rα2治疗组、sIL-5R治疗组及联合治疗组每次激发前30min分别腹腔注射sIL-13Rα2100μg、sIL-5R100μg及sIL-13Rα2、sIL-5R各100μg干预，正常对照组及哮喘组生理盐水代替。应用流式细胞术（FCM）检测各组BALF中EOS凋亡率，酶联免疫吸附试验（ELISA）测定Eotaxin水平。结果①与正常对照组比较，哮喘组BALF中EOS数目百分比、Eotaxin水平均显著升高（P值均〈0．01），EOS凋亡率明显下降（P〈0．01）。②与哮喘组比较，sIL-13Rα2治疗组、sIL-5R治疗组及联合治疗组BALF中EOS数目百分比及Eotaxin水平均明显降低（P值均〈0．01），EOS凋亡率明显增高（P〈0．05）。③与单独治疗组比较，联合治疗组效果更佳（P〈0．05）。结论联合应用sIL-13Rα2及sIL-5R能够明显增加哮喘小鼠EOS凋亡，明显降低Eotaxin水平，可明显减少EOS肺部浸润，改善气道炎症，较单用更具有临床应用价值。

联合IL-5可溶性受体与IL-4突变体对支气管哮喘小鼠气道高反应性及IgE、IFN-γ水平的影响

目的通过观察IL-5可溶性受体（sIL-5Ra）及IL-4突变体（IL-4mutant，IL-4MT）对哮喘小鼠气道高反应性（airwayhyperresponsiveness，AHR）及IgE、γ干扰素（IFN-γ）水平的影响，探讨其潜在的临床应用价值。方法随机将50只BALB／c雌性小鼠分成5组，分别为正常对照组、哮喘组、IL-4MT治疗组、sIL-5Ra治疗组和IL-4MT联合sIL-5Ra治疗组（简称联合治疗组）。采用腹腔注射卵蛋白（ovalbumin，OVA）与氢氧化铝混悬液对小鼠进行致敏，卵蛋白雾化，建立小鼠哮喘模型，其中正常对照组用生理盐水替代。雾化前30rain，IL-4MT治疗组、sIL-5Ra治疗组及联合治疗组分别腹腔注射IL-4MT100μg、sIL-5Ra100μg、IL-4MT和sIL～5Ra各100μg，正常对照组与哮喘组用生理盐水替代。末次激发24h后，用不同浓度的氯化乙酰胆碱激发各组小鼠，测定其肺阻力，ELISA法观察比较各组血清及BALFIgE、IFN-γ水平变化，肺组织行HE染色，观察病理变化。结果与正常对照组相比，哮喘组肺阻力显著增加（P〈0．01）；与哮喘组相比，IL-4MT组和联合治疗组肺阻力显著降低（P〈O．05），联合治疗组下降更明显；与sIL-5Ra治疗组相比，联合治疗组肺阻力显著降低（P〈O．05）。与正常对照组相比，哮喘组血清及BALF中IgE含量显著升高，IFN-γ含量显著下降（P〈O．01）；与哮喘组相比，联合治疗组血清及BALF中IgE含量显著下降，IFN-γ含量显著升高（P〈O．01）；与单独治疗组相比，联合治疗组血清及BALF中IgE含量显著下降，IFN-γ含量显著升高（Pd0．05）。与哮喘组比，单独治疗组与联合治疗组肺组织炎症细胞渗出、浸润及对气道上皮的炎性损伤明显减轻，联合治疗组减轻更明显。结论联合应用sIL-5Ra与IL-4MT可以明显减轻哮喘小鼠AHR，降低血清及BALF中IgE含量，同时升高IFN-γ含量，减轻气道炎症。

联合IL-4突变体及IL-5可溶性受体α对支气管哮喘小鼠气道炎症的影响

目的观察联合应用IL4突变体（IL-4MT）及IL-5可溶性受体d（sIL-5Rα）对支气管哮喘（简称哮喘）小鼠气道炎症水平的干预。方法50只雌性BALB／c小鼠随机分为正常对照组、哮喘组、IL-4MT治疗组、sIL-5Rα治疗组、联合IL-4MT及sIL-5Rd治疗组（简称联合治疗组）。哮喘组和治疗组分别给予卵蛋白（OVA）致敏和激发。其中，IL-4MT治疗组、sIL-5Rα治疗组、联合治疗组分别于激发前30min腹腔注射IL-4MT100μg、sIL-5Rα100μg及IL-4MT、sIL-5Rα各100μg进行干预，正常对照组和哮喘组给予生理盐水代替。末次激发后收集BALF计数白细胞和嗜酸粒细胞（EOS）比例；HE染色观察肺组织病理变化；ELISA法测定各组BALF中IL4、IL5、嗜酸粒细胞趋化因子（Eotaxin）水平变化；末端脱氧核苷酸转移酶介导的d-UTP切口末端标记（TUNEL）法检测肺组织EOS凋亡情况。结果与正常对照组比较，哮喘组小鼠肺组织出现典型病理损害，EOS比例（t=-50．48，P〈0．001）、IL-4（t=-12．98，P〈0．001）、IL-5（t=-20．51，P〈0．001）、Eotaxin（t=-17．56，P〈0．001）水平均显著升高，EOS凋亡率（t=5．35，P〈0．001）显著下降；与哮喘组比较，各治疗组小鼠肺组织病理损害明显减轻，EOS比例（II，4MT治疗组t=27．4，P〈0．001；sIL-5Rα治疗组t=29．41，P〈0．001；联合治疗组t=37．25，P〈0．001）明显下降；Eotaxin（IL-4MT治疗组t=6．92，P〈0．001；sIL-5Rα治疗组t-4．96，P〈0．001；联合治疗组t=9．95，P〈0．001）水平明显下降；EOS凋亡率（IL-4MT治疗组t=-4．26，P〈0．001；sIL-5Rα治疗组t=-5．81，P〈O．001；联合治疗组t=-7．28，P〈0．001）明显增高；与单独治疗组相比，联合治疗组对炎症的缓解效果更为明显。结论联合IL-4MT及sIL-5Rα可明显降低哮喘小鼠IL-5、Eotaxin水平，减少肺部EOS的浸润和增加其凋亡，可以明显缓解哮喘气道炎症。

重组鼠IL-5可溶性受体α蛋白对哮喘小鼠肺组织嗜酸性粒细胞凋亡及Bax蛋白表达的影响

目的探讨应用IL-5可溶性受体α对哮喘小鼠气道炎症、嗜酸性粒细胞凋亡以及Bax蛋白表达的干预。方法 36只雌性BALB/c小鼠随机分为正常对照组、哮喘组、sIL-5Rα治疗组。哮喘组和sIL-5Rα治疗组分别给予卵蛋白(OVA)致敏和激发。其中,sIL-5Rα治疗组于激发前30 min腹腔注射sIL-5Rα100μg进行干预,每日一次,连续7 d;正常对照组和哮喘组给予生理盐水代替。末次激发后收集支气管肺泡灌洗液(BALF)计数白细胞和嗜酸性粒细胞(EOS)比例;HE染色观察肺组织病理变化;ELISA法测定各组BALF中IL-5、嗜酸性粒细胞趋化因子(Eotaxin)水平变化;末端脱氧核苷酸转移酶介导的d-UTP切口末端标记(TUNEL)法检测肺组织EOS凋亡情况;免疫组化法检测肺组织Bax蛋白的表达。结果与正常对照组比较,哮喘组EOS比例、IL-5、Eotaxin水平显著升高(P<0.01),EOS凋亡率及Bax蛋白表达量显著下降(P<0.01);与哮喘组比较,sIL-5R治疗组EOS比例、Eotaxin水平明显下降(P<0.01),EOS凋亡率及Bax蛋白表达量明显增高(P<0.01)。结论 IL-5可溶性受体α可明显降低哮喘小鼠IL-5、Eotaxin水平,上调肺组织Bax蛋白表达,减少肺部EOS的浸润和增加其凋亡,可以明显缓解哮喘气道炎症。

可溶性IL一5Rα对支气管哮喘小鼠气道炎症的影响

目的通过观察可溶性IL-5受体α（sIL-5Rα）对支气管哮喘（简称哮喘）小鼠气道炎症的影响，为哮喘疾病的治疗提供新的方法。方法24只BALB／c小鼠随机分成正常组、哮喘组及sIL-5Rα治疗组，哮喘组和sIL-5Rα治疗组以鸡卵白蛋白（OVA）致敏和激发，建立哮喘模型，对照组用生理盐水代替0VA。sIL-5Rα治疗组每次激发前30min腹腔注射sIL-5Rα100μg，正常对照组及哮喘组则用生理盐水替代。比较各组BALF细胞计数，IL-5、IL-4及嗜酸粒细胞趋化因子（Eotaxin）水平，肺组织学检查。结果与正常对照组相比，哮喘组BALF中嗜酸粒细胞百分比增加（P〈0．05），BALF中IL-4、IL-5、Eotaxin水平增加（P〈0．05），病理示肺组织损害明显。与哮喘组相比，sIL-5Rα治疗组BALF中嗜酸粒细胞百分比降低（P〈0．05），BALF中IL-5、Eotaxin水平增加（P值均〈O．05），病理示肺组织损害明显减轻。结论sIL-5Rα可明显减轻哮喘小鼠气道炎症。