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可溶性Tie2融合蛋白对尿毒症腹膜透析大鼠血管新生的影响 被引量:1
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作者 赵占正 刘鑫鑫 +6 位作者 李真珍 申万琴 肖静 吴歌 唐琳 邢国兰 刘章锁 《中华肾脏病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期662-666,共5页
目的观察可溶性Tie2融合蛋白(sTie2/Fc)对尿毒症腹膜透析大鼠腹膜血管新生的影响。方法48只雄性SD大鼠,按随机数字表法分为以下6组:正常对照组、假手术组、尿毒症非腹透组、4.25%腹透组、sTie2/Fc2.5μg/kg干预组、sTie2/Fc5... 目的观察可溶性Tie2融合蛋白(sTie2/Fc)对尿毒症腹膜透析大鼠腹膜血管新生的影响。方法48只雄性SD大鼠,按随机数字表法分为以下6组:正常对照组、假手术组、尿毒症非腹透组、4.25%腹透组、sTie2/Fc2.5μg/kg干预组、sTie2/Fc5.0pog/kg干预组。腹透组按照4.25%腹透液30ml/kg大鼠体质量规律腹透28d。规律腹透期间,干预组给予sTie2/Fc隔天1次皮下注射,共计14次。28d后留取各组大鼠腹膜组织,分别用RT—PCR和免疫组织化学染色法检测腹膜组织血管生成素2(Angpt-2)mRNA和蛋白的表达。CD34染色观察腹膜组织毛细血管密度(MVD)。结果各组大鼠腹膜组织均表达Angpt-2;尿毒症非腹透组、4.25%腹透组Angpt-2mRNA、蛋白表达均显著高于正常对照组(均P〈0.05);4.25%腹透组Angpt-2mRNA、蛋白表达显著高于尿毒症非腹透组(均P〈0.05);sTie2/Fc2.5μg/kg干预组、sne2/n5.0μg/kg干预组Angpt-2mRNA、蛋白表达均显著低于4.25%腹透组(均P〈0.05)。尿毒症非腹透组、4.25%腹透组腹膜组织MVD均显著高于正常对照组(均P〈0.05);sTie2/Fc2.5μg/kg干预组、sTie2/Fc5.0μg/kg干预组腹膜组织MVD均显著低于4.25%腹透组(均P〈0.05)。结论sTie2/Fc可以抑制尿毒症腹膜透析大鼠腹膜新生血管的形成,阻断配体介导的信号传导通路可能是其抑制腹膜血管形成的机制之一。 展开更多
关键词 尿毒症 腹膜透析 血管生成素2 可溶性tie2融合蛋白 血管新生
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猪圆环病毒2型衣壳蛋白的可溶性表达 被引量:1
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作者 熊文丽 巫水根 +3 位作者 蔡振 蒋烨 严芬 吴元子 《西南民族大学学报(自然科学版)》 CAS 2018年第2期133-137,共5页
利用原核表达系统构建猪圆环病毒2型病毒(PCV2)衣壳蛋白.首先构建具有谷胱甘肽转移酶标签的重组质粒p GEX4T1-ORF2,并将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,表达并纯化得到可溶性的融合蛋白.进一步通过纳米粒度仪及免疫印迹等技术,分别研究了P... 利用原核表达系统构建猪圆环病毒2型病毒(PCV2)衣壳蛋白.首先构建具有谷胱甘肽转移酶标签的重组质粒p GEX4T1-ORF2,并将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,表达并纯化得到可溶性的融合蛋白.进一步通过纳米粒度仪及免疫印迹等技术,分别研究了PCV2蛋白的粒径分布以及免疫原性.实验结果表明,BL21-p GEX4T1-ORF2菌株构建成功,能够可溶性地表达猪圆环病毒2型病毒衣壳蛋白,且蛋白具有免疫原性. 展开更多
关键词 猪圆环病毒2 衣壳蛋白 融合蛋白 可溶性表达
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MBP-hmcm6融合蛋白的构建与表达 被引量:1
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作者 王蕾 余波光 吴文言 《实用肿瘤学杂志》 CAS 2005年第5期321-324,共4页
目的构建含微小染色体维持蛋白MBP-hmcm6的原核表达重组质粒,并进行可溶性表达与初步纯化。方法以常规克隆方法将目的片段连接至pMAL-p2x载体,获得的阳性克隆转化大肠杆菌Rosetta(DE3)进行表达。结果经Western blot鉴定,获得了分子量大... 目的构建含微小染色体维持蛋白MBP-hmcm6的原核表达重组质粒,并进行可溶性表达与初步纯化。方法以常规克隆方法将目的片段连接至pMAL-p2x载体,获得的阳性克隆转化大肠杆菌Rosetta(DE3)进行表达。结果经Western blot鉴定,获得了分子量大小为139 KD的MBP-hMCM6p蛋白。结论成功构建了pMAL-p2x-hmcm6重组质粒和工程菌,实现了重组蛋白可溶性表达,有助于进一步研究MCM蛋白的结构与功能。 展开更多
关键词 微小染色体维持蛋白 pMAL-p2x 可溶性表达 融合蛋白 Western 可溶性表达 重组质粒 克隆转化 原核表达 初步纯化 大肠杆菌 BLOT
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新型抗HER2/neu细胞因子融合蛋白与可溶性蛋白抗原联合物接种诱导的抗表达HER2/neu肿瘤的保护性免疫应答
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作者 Helguera G Dela Cruz JS +1 位作者 Lowe C 郭鑫(摘) 赵兰娟(校) 《国际生物制品学杂志》 CAS 2006年第6期279-279,共1页
关键词 抗HER2/neu 肿瘤相关抗原 细胞因子 保护性免疫应答 可溶性蛋白抗原 融合蛋白 接种 细胞集落刺激因子
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鸡传染性法氏囊病病毒VP2蛋白可溶性原核表达及免疫原性分析 被引量:7
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作者 李赛赛 郭玉堃 +3 位作者 舒静超 曾磊 郭婉莹 郭豫杰 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期2281-2287,共7页
为在大肠杆菌中表达出高可溶性的VP2-LS3蛋白笼纳米颗粒并检测其免疫原性,将扩增的7种融合标签(GST、NusA、MBP、PpiB、γ-crystallin、ArsC和Grifin)片段连在VP2-LS3基因的N端,构建7个带有不同标签的重组原核表达载体。再将其分别转化... 为在大肠杆菌中表达出高可溶性的VP2-LS3蛋白笼纳米颗粒并检测其免疫原性,将扩增的7种融合标签(GST、NusA、MBP、PpiB、γ-crystallin、ArsC和Grifin)片段连在VP2-LS3基因的N端,构建7个带有不同标签的重组原核表达载体。再将其分别转化至大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE电泳分析,筛选出显著促进VP2-LS3蛋白可溶性表达的融合标签,并进行大量诱导表达、纯化。纯化得到的VP2-LS3重组蛋白分别进行TEV酶酶切、电镜观察分析及免疫家兔,并对获得的兔抗VP2血清进行Western blot和间接ELISA分析。结果显示,与其他6个标签相比,MBP标签促进VP2-LS3蛋白的可溶性表达具有显著性,可溶性表达水平达到69.5%;TEV酶可以把His6-MBP标签蛋白与VP2-LS3蛋白分开,获得高纯度的VP2-LS3蛋白;镜检显示形成了LS3蛋白笼纳米颗粒;Western blot结果表明,表达的VP2-LS3重组蛋白可与兔抗血清发生特异性反应,而不与阴性对照血清发生反应;间接ELISA检测制备的兔抗VP2血清效价达到1∶12 800。本研究获得了高可溶性的VP2-LS3蛋白笼纳米颗粒,为传染性法氏囊病病毒(IBDV)基因工程疫苗的研发奠定基础。 展开更多
关键词 传染性法氏囊病病毒 VP2蛋白 融合标签 可溶性表达 LS3蛋白笼纳米颗粒 免疫原性
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抗风湿新药的概述 被引量:18
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作者 董怡 赵岩 《中国新药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期10-14,共5页
综述了 2 0世纪 90年代涌现的新的抗风湿药。最新一类的选择性COX 2抑制剂 ,包括塞来昔布和罗非昔布 ,它们具有与现有NSAID相似的镇痛抗炎效果 ,但其胃肠道不良反应发生率明显较低 ,尤其在胃肠道溃疡、出血、穿孔方面。属改变病情药的... 综述了 2 0世纪 90年代涌现的新的抗风湿药。最新一类的选择性COX 2抑制剂 ,包括塞来昔布和罗非昔布 ,它们具有与现有NSAID相似的镇痛抗炎效果 ,但其胃肠道不良反应发生率明显较低 ,尤其在胃肠道溃疡、出血、穿孔方面。属改变病情药的来氟米特 ,对RA患者具有与MTX相似的疗效。生物制剂包括TNF阻断剂及IL 1受体拮抗剂。前者有重组可溶性TNF受体融合蛋白和TNFα单克隆抗体。临床试验显示 。 展开更多
关键词 选择性COX-2抑制剂 塞来昔布 罗非昔布 来氟米特 重组可溶性TNF-α受体融合蛋白
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外源性一氧化碳对脓毒症时血小板异常释放的抑制作用及其分子机制 被引量:3
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作者 刘大东 徐晓涵 +4 位作者 庄明峰 宋明明 秦魏婷 王旭 孙炳伟 《中华危重病急救医学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期110-116,共7页
目的探讨外源性一氧化碳(CO)对脓毒症时血小板异常释放的抑制作用及其可能分子机制。方法采集健康成年志愿者空腹肘静脉血,采用差速离心法获得富含血小板血浆(PRP),按随机数字表法分为正常对照组、脂多糖(LPS)组(10mg/LLPS刺... 目的探讨外源性一氧化碳(CO)对脓毒症时血小板异常释放的抑制作用及其可能分子机制。方法采集健康成年志愿者空腹肘静脉血,采用差速离心法获得富含血小板血浆(PRP),按随机数字表法分为正常对照组、脂多糖(LPS)组(10mg/LLPS刺激)、无活性外源性一氧化碳释放分子2(iCORM-2)组(10mg/L LPS±50μmol/LiCORM-2干预)、外源性一氧化碳释放分子2(CORM-2)10μmlol/L和50μmol/L组(10mg/L LPS±CORM-2 10μmol/L或50μmol/L干预)。30rain后用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测上清液中血小板源性生长因子BB(PDGF—BB)和基质金属蛋白酶2(MMP-2)水平;化学荧光素法检测血小板三磷酸腺苷(ATP)水平;流式细胞仪检测血小板膜糖蛋白P-选择素水平;蛋白质免疫印迹试验(WesternBlot)检测血小板表面信号分子Toll样受体4(TLR4)表达及关键信号分子蛋白激酶c0亚型(PKC0)和突触融合蛋白结合蛋白1(STXBP-1)磷酸化;免疫共沉淀法检测STXBP-1介导的可溶性N-乙基马来酰亚胺敏感因子黏附受体(SNAREs)复合体突触融合蛋白2-突触相关蛋白23-囊泡相关膜蛋白8(STχ2-SNAP23-VAMP8)的形成。结果①与正常对照组相比,LPS刺激后血小板释放PDGF-BB、MMP-2和ATP均显著增加,血小板表面P-选择素表达明显上调[PDGF—BB(μg/L):127.53±1.78比94.35±5.84,MMP-2(ng/L):51.87±9.20比35.83±3.17,ATP(μmol/L):1.288±0.056比0.975±0.010,P-选择素:(3.93±0.19)%比(0.44±0.10)%,均P〈0.05];10μmol/L和50μmol/LCORM-2干预均能有效抑制LPS诱导血小板释放PDCF—BB、MMP-2、ATP和P-选择素的高表达,并呈剂量依赖性[PDGF—BB(μg,L):114.68±1.35、97.08±6.14比127.53±1.78,MMP-2(ng/L):32.67±8.00、24.63±1.63比51.87±9.20,ATP(μmol/L):0.999±0.015、0.965±0.008比1.288±0.056,P-选择素:(1.95±0.27)%、(0.94±0.11)%比(3.93±0.19)%,均P〈0.05]。②与正常对照组相比,LPS刺激后血小板TLR4表达以及PKC0和STXBP-1的磷酸化水平均显著增加[TLR4(灰度值):1.21±0.38比0.67±0.06,P-PKC0(灰度值):1.36±0.20比0.44±0.03,p-STXBP-1(灰度值):1.13±0.06比0.59±0.04,均P〈0.05];10μmol/L和50μmol/LCORM-2干预均能有效抑制血小板各指标,并呈剂量依赖性[TLR4(灰度值):0.76±0.05、0.65±0.04比1.21±0.38,P-PKC0(灰度值):0.71±0.07、0.47±0.10比1.36±0.20,P-STXBP-1(灰度值):0.56±0.02、0.48±0.01比1.13±0.06,均P〈O.05]。③与正常对照组相比,LPS刺激后血小板中与STXBP-1耦联的STχ2、SNAP23和VAMP8均显著增加[STχ2(灰度值):1.35±0.06比0.57±0.04,SNAP23(灰度值):0.97±0.04比0.30±0.12,VAMP8(灰度值):1.37±0.12比0.77±0.10,均P〈0.05];10μmo]/L和50μmol/LCORM-2干预均能够有效抑制血小板SNAREs复合体的形成,并呈剂量依赖性[STχ2(灰度值):0.77±0.02、0.39±0.03比1.35±0.06),SNAP23(灰度值):0.41±0.03、0.22±0.08比0.97±0.04,VAMP8(灰度值):0.85±0.07、0.66±0.07比1.37±0.12,均P〈O.05]。iCORM-2组与LPS组上述各指标比较差异均无统计学意义。结论脓毒症时血小板释放功能异常活跃,CORM-2干预能有效抑制血小板的过度释放,其机制可能与TLR4/PKC0/STXBP-1信号途径介导的SNAREs复合体形成有关。 展开更多
关键词 脓毒症 血小板 突触融合蛋白结合蛋白1 可溶性N-乙基马来酰亚胺敏感因子黏附受体复合体 外源性-氧化碳释放分子2
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