结核分枝杆菌可视化抗体检测蛋白芯片的制备

目的:利用克隆表达的7种结核分枝杆菌优势表位抗原,建立可视化抗体检测蛋白芯片,用于结核病辅助诊断。方法:将7种结核分枝杆菌优势表位抗原,即38kD、ESAT-6、CFP10、MPT64、Mtb8、Mtb8.4和Mtb16.3点于修饰的基片上,制备可检测7种结核抗体的多靶点蛋白微阵列,建立免疫金银染色检测系统;使用该芯片对48例临床结核病患者血液样品进行检测,并与"金标准"痰涂片(48例)和痰培养(其中的29例)检测结果进行比较,分析其敏感性;对30名献血员血液样品进行检测,分析其特异性。结果:可视化抗体检测蛋白芯片的敏感性分别为98.5%和96.6%,而痰涂片和痰培养检测方法的敏感性分别为35.4%和48.3%;可视化抗体检测蛋白芯片的特异性为93.3%。结论:建立的结核分枝杆菌可视化抗体检测蛋白芯片检测敏感性显著高于痰涂片和痰培养方法,可用于结核病的临床辅助诊断,提高痰涂片和痰培养假阴性的检出率。

可视化蛋白芯片检测牛奶中庆大霉素的方法研究

本文采用间接竞争免疫法,研究了可视化蛋白芯片快速检测牛奶中庆大霉素的方法。在固定有庆大霉素人工抗原的醛基修饰芯片的反应区内,加入庆大霉素单克隆抗体和游离的庆大霉素或牛奶样品混合物,待抗原抗体反应完全后依次加入纳米银标记的二抗（羊抗鼠）及银增强显色剂进行可视化检测,结果采用可视化生物芯片检测系统进行定量分析。通过设计制备内标点及建立的内标曲线,可在同一孔内定量检测游离的庆大霉素。该法庆大霉素的线性检测范围为0.1∽200ng/mL,检测限为0.1ng/mL,样品的加标回收率为95%∽112%。

利用可视化蛋白芯片快速检测黄瓜绿斑驳花叶病毒

黄瓜绿斑驳花叶病毒(CGMMV)是瓜类作物上重要的病原病,需建立快捷、准确的检测方法.以硝酸纤维素膜为固相载体,采用ELISA双抗夹心法建立了对CGMMV的可视化蛋白芯片检测方法,并对捕获抗体稀释倍数、样品孵育时间、酶标抗体孵育时间、显色温度等进行优化.结果表明,最佳检测条件为:捕获抗体稀释倍数1∶5,样品20℃孵育1h,酶标抗体20℃孵育1h,20℃15min显色.以50批葫芦科种子为样品,对可视化蛋白芯片检测与DAS-ELISA检测进行了比较,其检测结果吻合率达98.0%;经PCR检验,检测结果一致性良好.说明该方法能对植物病毒做出快速、准确的检测.

基于可视化抗体宏阵列技术的出血性大肠杆菌O157∶H7定量检测

目的:探索建立一种新的出血性大肠杆菌O157∶H7(Escherichia coli O157∶H7)的快速定量检测技术。方法:以硝酸纤维素膜为基片,用生物芯片点样仪制作抗体宏阵列,采用'双抗夹心'原理,对出血性大肠杆菌O157∶H7进行定量检测研究。结果:本方法对出血性大肠杆菌O157∶H7的检出限为3.4×105 CFU/mL,在105~107CFU/mL细菌浓度范围内,宏阵列的灰度值与细菌浓度之间有较好的线性关系。该方法可在2.5 h内同步检测多个样品中出血性大肠杆菌O157∶H7的浓度。结论:通过用标准菌株、模拟带菌等研究显示,用宏阵列技术快速定量检测出血性大肠杆菌O157∶H7,结果肉眼可见,稳定准确,同时操作简便、成本低廉、无需大型设备,制作好的抗体宏阵列可用于快速评估食品中出血性大肠杆菌O157∶H7的污染状况,尤其适合于基层实验室进行快速高通量样品筛查。

可视化蛋白芯片法同时检测牛奶中喹诺酮类抗生素残留的含量

目的:利用可视化蛋白芯片分析技术实现对牛奶中9个喹诺酮类抗生素残留含量的同时检测。方法:采用直接竞争法反应原理,将9个喹诺酮类药物的单克隆抗体以微阵列形式固定于微孔板底部,制备成微孔板生物芯片,并依次与纳米材料标记的喹诺酮类人工抗原、喹诺酮类药物反应,最后用银增强显色产生肉眼可见的阵列点。显色结果用可视化芯片分析仪快速扫描成像,图像采用芯片分析软件处理并提取信号,实现定量检测。结果:本法测定牛奶中9个喹诺酮类药物的加标回收率分别在70%~130%之间,且RSD均在15%以内。同时对超市购得的16个品牌牛奶样品中喹诺酮类抗生素的含量进行了检测,含量均小于1 ng·mL-1,符合国家规定的最大允许残留量。结论:本法能够用于牛奶样本中9个喹诺酮类药物的残留的同时快速初筛。

小分子阿特拉津和罂粟碱检测的免疫芯片技术研究

采用蛋白芯片竞争法对小分子半抗原的污染物进行检测。在获得特异性抗体的前提下,首先将阿特拉津半抗原进行了衍生化,然后将该衍生物和氨基罂粟碱分别与载体蛋白质卵清蛋白(OVA)进行偶联。实验证明新合成的完全抗原能够与其相应抗体发生特异性的结合。实验还对蛋白芯片检测阿特拉津进行了条件优化,其抗体固定化时间为2h,用卵清蛋白为封闭液的封闭时间为1h,样品稀释液pH值为8. 0。并对阿特拉津及罂粟碱进行了定性、定量实验,结果表明:荧光信号强度随待测物浓度的降低而增强,有一定的线性趋势,阿特拉津检出限为0. 001mg/L,罂粟碱检出限为0. 01mg/L。

可视化蛋白芯片法检测蜂蜜样本中氯霉素残留量

目的:采用蛋白芯片法快速定量检测蜂蜜中残留氯霉素的含量。方法:采用间接竞争免疫法,首先在96微孔板芯片上固定氯霉素的抗原,然后在芯片反应孔内加入氯霉素抗体和其标准品或者待测样品的混合物。游离的标准品或待测样品会与固定的氯霉素抗原竞争结合抗体,待抗原抗体完全反应后再加入纳米材料标记的二抗,最后加入显色剂进行可视化检测。待显色完毕,用芯片分析仪获取信号,并进行定量分析。根据不同浓度的标准品与检测的信号强度作标准曲线,然后通过标准曲线对待测试样中氯霉素残留量进行定量分析。结果:实验结果表明标准曲线相关系数R^2>0.99,样品的加标回收率为90%~120%,RSD<10%,检出限低于0.1ng/mL。结论:利用蛋白芯片法可以快速准确测定蜂蜜中的氯霉素残留量,具有快速、并行性、高通量的特点,适用于现场大规模样品的初筛。在动物源性食品残留抗生素的含量检测方面有广阔的发展前景。

可视化蛋白芯片在食品安全检测中的应用

随着生物技术的蓬勃发展和食品安全意识的提升,食品安全检测的技术和手段也逐渐朝着简便化、快速化、全面化、智能化和商业化等方向发展。相对于传统的生物芯片,可视化蛋白芯片具有操作简单、检测结果准确高效、灵敏度高、检测结果无需昂贵的特殊设备或仅用肉眼便可直接判定等优点。该文就可视化蛋白芯片技术在食品安全检测中的应用,包括食源性致病微生物、兽药残留、农药残留、动物疫病等方面进行综述。

3种猪冠状病毒抗体可视化检测芯片的研制与初步应用

猪的冠状病毒感染对于生猪养殖的危害性受到高度关注,其发病原因复杂多样,使得该类疫病的临床鉴别诊断成为一大难点。猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪血凝性脑脊髓炎病毒(PHEV)为3种常见的仔猪易感冠状病毒,对幼龄仔猪的致死率较高。本研究选取上述3种病毒核(N)蛋白进行原核表达与纯化,并将其固定至芯片载体上,经反应体系优化,制备了一种可同时检测上述3种病原特异性抗体的可视化蛋白芯片。将其初步应用于临床检测,结果表明,该标准化蛋白质芯片特异性、敏感性良好,最低检测限为稀释12 800倍,与ELISA的符合率在90%之上。本研究制备的可视化抗体芯片,能够迅速、高效、大量地对猪流行性腹泻、猪传染性胃肠炎、猪血凝性脑脊髓炎进行类症鉴别诊断,并有望应用于临床门诊及基层养殖场中PEDV、TGEV、PHEV 3种病原特异性抗体水平监测。

食品中残留氯霉素的检测方法研究

课题的主要内容是研究食品中残留抗生素的检测方法,选取目前限量要求最为严格,且最关心的检测指标氯霉素进行研究。本文采用蛋白芯片方法快速定量检测蜂蜜中残留氯霉素的含量。本实验的原理是采用间接竞争免疫法,首先在96微孔板芯片上固定了氯霉素的抗原,然后在芯片反应孔内加入氯霉素抗体和其标准品或者待测样品的混合物。游离的标准品或待测样品会与固定的氯霉素抗原竞争结合抗体,待抗原抗体完全反应后再加入纳米材料标记的二抗（羊抗鼠Ig G）,最后加入显色剂进行可视化检测。待显色完毕,用芯片分析仪获取信号,并进行定量分析。根据不同浓度的标准品与检测的信号强度作标准曲线,然后通过标准曲线对待测试样中氯霉素残留量进行定量分析。实验结果表明标准曲线相关系数R2〉0.98,样品的加样回收率80%~120%之间,检测限低于0.1ng/m L。