匹莫齐特对脂多糖诱导RAW264.7细胞诱导型一氧化氮合成酶表达的调控及其作用机制

目的运用脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞株,探究匹莫齐特(Pimozide)对一氧化氮和诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)合成的影响和作用机制。方法用含10%胎牛血清、100 U·mL^(-1)的青链霉素DMEM培养液将RAW264.7细胞稀释为每孔2×105个接种于24孔板中进行培养,分为空白对照组(仅含DMEM培养液+RAW264.7细胞)、Pimozide组(仅含RAW264.7细胞和10μmol·L^(-1)Pimozide培养液)、LPS诱导(LPS 1 mg·L^(-1))组(LPS+RAW264.7细胞)、药物处理组[含细胞和不同浓度药物,包括Pimozide低(LPS+2.5μmol·L^(-1))、中(LPS+5μmol·L^(-1))、高(LPS+10μmol·L^(-1))组]。各组培养上清液中一氧化氮水平测定采用Griess法进行检测。采用实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)法和免疫蛋白印迹法分别检测iNOS mRNA表达水平和iNOS和磷酸化的信号传导及转录激活因子通路-5的蛋白表达相对水平。结果用含10%胎牛血清、100 U·mL^(-1)的青链霉素DMEM培养液培养RAW264.7细胞24 h后,各组培养上清液一氧化氮表达水平差异有统计学意义(F=25.69,P<0.05);Pimozide低(LPS+2.5μmol·L^(-1))、中(LPS+5μmol·L^(-1))、高(LPS+10μmol·L^(-1))组一氧化氮释放的抑制率差异有统计学意义(F=132.49,P<0.05)。各组iNOS mRNA和蛋白水平表达差异有统计学意义(F=118.59和23.37,P<0.05),同时发现各组磷酸化的信号传导及转录激活因子通路-5/信号传导及转录激活因子通路-5比值差异有统计学意义(F=12.07,P<0.05)。结论Pimozide可抑制RAW264.7细胞中iNOS表达和一氧化氮的生成,其作用机制可能与抑制磷酸化的信号传导及转录激活因子通路-5的生成相关。

黄芪多糖对肉仔鸡血清免疫细胞因子含量及小肠诱导型一氧化氮合成酶mRNA表达的影响

本试验旨在研究黄芪多糖(APS)对肉仔鸡血清免疫细胞因子含量及小肠诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)mRNA表达的影响。试验选择1日龄健康艾维茵肉仔鸡300只,随机分为5个组,每组6个重复,每个重复10只鸡。对照组饲喂基础饲粮,试验组分别在基础饲粮中添加0.1%、0.5%、1.0%和2.0%的APS。试验期42 d。结果表明:1)饲粮中添加APS可提高肉仔鸡的平均体重和平均日增重,降低料重比,其中以1.0%APS组效果最佳。2)饲粮中添加APS可提高肉仔鸡血清白细胞介素-1、白细胞介素-2和肿瘤坏死因子-α含量,42日龄血清白细胞介素-1和肿瘤坏死因子-α含量呈显著二次曲线增加(P<0.05),二者分别以1.0%和0.5%APS组最高。3)饲粮中添加APS可提高肉仔鸡血清一氧化氮含量,增加iNOS活性,促进小肠iNOS mRNA的表达,42日龄时小肠iNOS mRNA的表达呈显著二次曲线增加(P<0.05),其中以1.0%APS组效果最佳。由此可见,APS对肉仔鸡免疫功能的调节作用可能与iNOS mRNA的表达和活性以及免疫细胞因子的分泌有关。

神经节苷脂GM．1对脑缺血再灌注大鼠诱导型．氧化氮合成酶的影响

目的:研究单唾液酸四已糖神经节苷脂(GM-1)对脑缺血再灌注后诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)的影响并探讨其可能机制。方法:采用线栓法制作大鼠大脑中动脉闭塞模型,缺血2h再灌注22h。将雄性SD大鼠随机分成假手术组,模型对照组和GM-1处理组(15、30、60mg/kg3个给药剂量组)。通过红四氮唑(TTC)染色和图像分析计算各组脑梗死体积,采用生物化学法测量各组伤侧脑中NO含量和iNOS活性。结果:与模型对照组相比,GM-1中、高剂量处理组脑梗死体积缩小,iNOS活性和NO量下降,低剂量组变化不明显。结论:脑缺血后iNOS升高与脑损伤关系密切,而GM-1可以对抗iNOS和NO上升,并减轻脑缺血损伤。

艾蒿水提物对肉仔鸡血清细胞因子含量及小肠诱导型一氧化氮合成酶mRNA表达量的影响

本试验旨在研究饲粮中添加不同水平的艾蒿水提物对肉仔鸡血清细胞因子含量及小肠诱导型一氧化氮合成酶(i NOS)mRNA表达量的影响。选取192只健康的1日龄爱拔益加(AA)肉仔鸡,随机分为4个组,每组6个重复,每个重复8只鸡。对照组饲喂基础饲粮,试验组分别饲喂在基础饲粮中添加500、1 000、2 000 mg/kg艾蒿水提物的试验饲粮。试验期42 d。结果表明:1)与对照组相比,21日龄时,2 000 mg/kg添加组的血清白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-2(IL-2)和白细胞介素-4(IL-4)的含量显著升高(P<0.05),500 mg/kg添加组的血清IL-4含量和1 000 mg/kg添加组的血清IL-2含量极显著升高(P<0.01);42日龄时,500 mg/kg添加组的血清IL-2含量显著升高(P<0.05)。2)与对照组相比,21日龄时,500 mg/kg添加组的血清一氧化氮(NO)含量和i NOS活性及十二指肠、空肠和回肠的i NOS mRNA表达量差异不显著(P>0.05),1 000 mg/kg添加组的血清NO含量和回肠i NOS mRNA表达量显著升高(P<0.05),2 000 mg/kg添加组的回肠i NOS mRNA表达量极显著升高(P<0.01);42日龄时,500、1 000和2 000 mg/kg添加组血清NO含量和i NOS活性及空肠i NOS mRNA表达量显著或极显著升高(P<0.05或P<0.01)。由此可见,饲粮中添加艾蒿水提物可以促进肉仔鸡免疫细胞因子的分泌和NO的生成,且与i NOS mRNA的表达增强有关。

诱导型一氧化氮合成酶在大鼠角膜新生血管模型的表达及意义

目的:研究诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)在大鼠角膜新生血管模型的表达和意义。方法:将SD大鼠随机分为正常组,角膜新生血管对照组,地塞米松球结膜下注射组,采用缝线诱导角膜新生血管模型。用裂隙灯数字图像处理系统观察第8d模型组新生血管生长情况,RT-PCR检测3组iNOSmRNA的表达,免疫组织化学方法检测iNOS蛋白质水平的表达。结果:在正常大鼠角膜上皮基底膜和基质层即表达iNOS,新生血管对照组其表达明显增强,球结膜下注射地塞米松组iNOS在新生血管角膜组织中则受到显著抑制,iNOSmRNA水平和蛋白质水平表达有一致性。结论:iNOS表达水平与炎症性角膜新生血管明显相关,地塞米松球结膜下注射抑制iNOS表达与其抑制炎症性角膜新生血管可能有关。

丹参对重症急性胰腺炎大鼠诱导型一氧化氮合成酶mRNA的表达与器官损伤的影响

目的探讨重症急性胰腺炎(SAP)大鼠诱导型一氧化氮合成酶(i NOS)mRNA的表达与器官损伤的关系和丹参对其影响。方法Wistar大鼠随机分为3组,模型组和丹参组均以5%牛磺胆酸钠经胰管内逆行注射复制SAP模型,丹参组则在制模后立即肌肉注射丹参注射液(每天2ml/kg),每6h1次,共给药4次;对照组仅行假手术,模型组和对照组同期给予等体积生理盐水。各组大鼠在术后24h测定血淀粉酶(AMY)、一氧化氮(NO)和腹水量,用原位杂交法和图像分析检测胰、肺、肾i NOS mRNA的表达强度,并观察其病理变化。结果血浆中AMY、NO和腹水量,模型组显著高于丹参组及对照组(P<0.05或P<0.01)。i NOS mRNA在胰、肺、肾中的表达模型组、丹参组均增高,模型组显著高于丹参组(P<0.01)。胰、肺、肾病理改变丹参组较模型组减轻。结论SAP时胰、肺、肾组织的i NOS mRNA高表达导致NO过度生成并参与胰腺及胰外器官损伤。丹参早期治疗能抑制胰、肺、肾组织的i NOS mRNA的过度表达,对胰腺、肺及肾起保护作用。

兔放射性肺纤维化形成过程中一氧化氮含量变化及诱导型一氧化氮合成酶的表达

目的:观察兔放射性肺纤维化形成过程中一氧化氮(NO)含量变化及诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)的表达。方法:实验兔20只,采用6mVX线对左全肺进行照射,25Gy,1次。分别于照射前、照射后1,3,6个月各处死5只动物,处死前进行左肺肺泡灌洗。采用铜-镉还原法检测灌洗液中的NO含量,免疫组化法检测肺组织中iNOS的表达。结果:NO含量在照射后1个月明显升高,照射后3～6个月显著降低;在照射前及照射后3～6个月,肺间质细胞内几乎未见iNOS阳性表达;在照射后1个月,肺间质中iNOS表达阳性细胞明显增多。结论:NO可能是放射性肺纤维化形成过程中的一个独立影响因素,其含量的变化可能与iNOS蛋白活性改变有关。

糖尿病视网膜病变黄斑囊样水肿与诱导型一氧化氮合成酶G-954C基因多态性(英文)

目的:分析中国人诱导型一氧化氮合成酶G-954C等位基因位点的基因表型在糖尿病视网膜病变黄斑囊样水肿患者与正常对照的差异。方法:病例对照,89例糖尿病视网膜病变黄斑囊样水肿的患者与年龄及性别匹配的90例健康对照纳入该项研究。研究采用了巢式聚合酶链式反应、限制性核酸内切酶技术、基因片段的序列测定。主要检测指标为诱导型一氧化氮合成酶G-954C位点的基因表型。结果:89例患者和90例健康对照的诱导型一氧化氮合成酶G-954C位点的基因表型全部检测结果为GG型。结论:诱导型一氧化氮合成酶G-954C位点的基因多态性可能在中国人为较低的变异频率,而且可能与糖尿病视网膜病变黄斑囊样水肿的易感性关系不大。

银杏叶提取物对实验性脊髓损伤后诱导型一氧化氮合成酶表达的影响

[目的]观察提取物（EGb）对脊髓损伤后诱导型一氧化氮合酶（iNOS）的影响。[方法]SD雄性大鼠（SPF级）30只，体重250～300g，随机分成2组，对照组（生理盐水组）和EGb组，各分为5个时相点，每个时想点3只大鼠，均采用改良的Allen打击法制成中度急性脊髓损伤模型，术后EGb组给予舒血宁0．75ml／（kg·d），对照组给予等量生理盐水。分别于术后1、3、5、7、14d处死动物取材。[结果]显微镜下观察，阳性细胞胞浆棕黄色染色，对照组和治疗组均发现iNOS阳性细胞的表达，均在5d达到高峰，但EGb治疗组细胞阳性率显著低于对照组（P〈0．05）[结论]EGb能够抑制iNOS的表达；抑制iNOS的表达可能是银杏叶缓解急性脊髓损伤的诸多机制之一。

缺氧诱导因子-1α、诱导型一氧化氮合成酶及环氧合酶-2在慢性高眼压大鼠视网膜中的表达

目的探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)、环氧合酶-2(COX-2)的表达与高眼压视网膜损伤的关系,为青光眼视网膜缺氧提供证据。方法用巩膜静脉烧烙法在50只SPF级Wistar大鼠的双眼制作慢性高眼压模型,眼压高于造模前40%以上者为造模成功。按照视网膜取材时间的不同将动物模型眼随机分为高眼压3、7、14、21、28 d组,每组10只大鼠20只眼。另选取10只匹配大鼠作为假手术对照组,仅作球结膜切开。应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法及Western blot法检测各组视网膜组织中HIF-1α、iNOS、COX-2 mRNA及其蛋白在大鼠视网膜中的表达。结果 HIF-1α、iNOS、COX-2 mRNA及蛋白在假手术组大鼠视网膜中呈微弱表达,造模眼HIF-1α、iNOS、COX-2 mRNA及其蛋白在视网膜中的表达水平明显升高,于7 d时达到高峰,随后有所下降,但仍明显高于正常组的表达水平。造模后3、7、14、21、28 d组大鼠视网膜中HIF-1α、iNOS、COX-2 mRNA及其蛋白的表达与假手术组相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 HIF-1α、iNOS、COX-2的低氧信号途径是青光眼神经变性发生发展中重要的病理生理机制。

肿瘤抑制因子WT1对人的诱导型一氧化氮合成酶基因的转录调节作用

将人的诱导型一氧化氮合成酶(hiNOS)启动子构建在带荧光素酶基因的载体pGL3-basic上,构建成用荧光素酶为系统的启动子,以研究载体p8.3iNOS.结果显示,肾母细胞肿瘤抑制因子(WT1)能够有效地抑制hiNOS启动子的转录;且WT1的4个选择性剪接本的抑制效果有所不同,其中WT1(-/-)在两种肝癌细胞(HepG2和Hep3B)中对hiNOS的表达均具有最强的抑制作用,并且抑制效果具有剂量依赖性,用Western blot检测结果进一步证实HepG2细胞中WT1(-/-)过量表达能下调hiNOS表达.以上结果说明WT1在肝癌细胞中对人的hiNOS具有转录调节作用.

银杏叶提取物对重症急性胰腺炎大鼠一氧化氮及诱导型一氧化氮合成酶的影响

目的探讨银杏叶提取物(GBE)对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠模型一氧化氮(NO)及诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)表达的影响。方法 72只SD大鼠随机分为3组:假手术组(SO)、SAP组、GBE干预组。采用5%牛磺胆酸钠胰胆管注射方法建立SAP动物模型。GBE治疗组于建模后5 min将GBE溶液通过股静脉给药。SO组和SAP组注入同样量的生理盐水。检测3组6、12、24 h血清淀粉酶、胰腺组织病理评分、血清及胰腺组织NO水平、实时荧光定量PCR检测胰腺组织iNOS mRNA表达情况。结果 GBE组胰腺组织病理评分6、12 h均显著低于SAP组,但在24 h胰腺组织病理评分与SAP组无显著差异;GBE组在6 h时血清及胰腺组织NO水平、12 h时胰腺NO水平较SAP组低,但随着时间延长,两组无显著差异;6 h时GBE组iNOS mRNA表达较SAP组低(P<0.05);12、24 h时SAP组与GBE组iNOS mRNA表达无统计学意义。结论 GBE在SAP早期可能通过抑制iNOS mRNA表达而降低NO水平,对胰腺组织起保护作用;但随着病程进展,这种作用不明显。

股骨头骨骺缺血再灌流关节软骨诱导型一氧化氮合成酶及热休克蛋白70表达的免疫组化研究

目的:探讨发育期髋关节股骨头骨骺关节软骨缺血再灌流后的诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)及热休克蛋白70(HSP70)的表达。方法:制作4周龄SD大鼠缺血再灌流及对照模型,每组各40只,于术后3、6、12、24、48h、5d、2、4周不同时点对股骨头骨骺关节软骨iNOS及HSP70进行免疫组织化学检测。结果:缺血再灌流组24、48h、5d、2周时点的关节软骨浅层、中层iNOS表达增强(P<0.05),缺血再灌流组24、48h、5d有关节软骨浅层、中层HSP70的增强表达(P<0.05)。结论:发育期髋关节缺血再灌流损害后存在关节软骨的iNOS损害机制及HSP70内源性细胞保护机制。

不同运动负荷对大鼠巨噬细胞诱导型一氧化氮合成酶活性及细胞免疫功能的影响

目的探讨不同运动负荷对大鼠免疫功能的影响。方法 40只 SD大鼠，随机分为对照组、 45min组、 90min组、 150min组和力竭组，进行无负重游泳训练 8周，每周 6次。测定腹腔巨噬细胞诱导型一氧化氮合酶 (iNOS)和血液中表面受体细胞 (CD)CD4＋ /CD8＋变化。结果 150min组及力竭运动组腹腔巨噬细胞 iNOS与对照组相比显著上升（ P< 0.05），且力竭组显著高于 150min组。血浆 CD4＋ /CD8＋的比值在 90min组、 150min组显著上升（ P< 0.05），而在力竭组则显著下降。结论适量运动引起的腹腔巨噬细胞诱导型一氧化碳合成酶 (iNOS)活性提高，增强机体的细胞免疫，增强机体的抗癌能力。而力竭运动引起的腹腔巨噬细胞 iNOS的活性增强，可能与大强度运动引起的细胞免疫抑制有关。

低氧对大脑皮层微血管内皮细胞诱导型一氧化氮合成酶表达的影响

未研究采用反转录多聚酶链反应技术观察了低氧对培养的大鼠大脑皮层微血管内皮细胞中诱导型一氧化氮合成酶基因表达的影响。发现经３％Ｏ２（培养液中氧分压为６．７ｋＰａ）作用２４小时后，能够明显诱导内皮细胞中该型合成酶基因的表达，且在复氧１２小时后，仍不能消除上述作用；而１１％Ｏ２（培养液中氧分压为１０．７ｋＰａ）作用相同时间，则不能诱导该酶的表达。结果表明，较严重的低氧条件可以直接诱导一氧化氮合成酶的表达，提示ＮＯ在低氧下大脑皮层微循环的调节中可能起重要作用。

骨桥蛋白及诱导型一氧化氮合成酶在胃癌中的表达

目的 研究骨桥蛋白在胃癌组织中的表达及其与诱导型一氧化氮合成酶表达的关系。方法 应用免疫组织化学方法检测胃癌组织中骨桥蛋白和诱导型一氧化氮合成酶的表达 ,并进行随访。结果 66例胃癌组织中骨桥蛋白和诱导型一氧化氮合成酶表达的阳性率分别为 72 .7% ( 4 8/66)、75 .7% ( 5 0 /66) ,骨桥蛋白的表达与肿瘤浸润深度、肿瘤直径、淋巴结转移程度及有无远处转移有关 ,iNOS的表达与肿瘤浸润深度、肿瘤直径、淋巴结转移程度有关。结论 骨桥蛋白在胃癌组织中表达均增强 ,能够作为反映肿瘤的生物学特性 ,评估预后的重要参考指标。骨桥蛋白和iNOS表达有协同作用。

诱导型一氧化氮合成酶与尖周病变

诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)是多形核细胞、内皮细胞、巨噬细胞等在慢性感染刺激下产生的一种活性较高的酶类,其合成及分泌受到众多细胞因子的调控。iNOS催化产物一氧化氮(NO)在尖周病理损害中起轴心作用,NO生成抑制剂可望作为根管药物用于尖周病的治疗。本文就iNOS的产生、主要生物学作用及其临床意义作一综述。

血红素氧合酶-1、诱导型一氧化氮合成酶在局灶性脑缺血中的表达

目的观察两种不同信使分子CO/NO的限速酶血红素氧合酶-1(HO-1)、诱导型一氧化氮合成酶(i N-OS)在局灶性脑缺血中的表达,初步探讨HO-1、i NOS在局灶性脑缺血中的不同作用。方法采用免疫荧光技术,观察HO-1、i NOS在局灶性缺血脑组织中不同时间点的表达及分布。结果i NOS在海马、皮质、基底节均有分布以灶周皮质最多。HO-1在同侧海马、皮质、基底节、丘脑均有分布,以灶周皮质为最多。i NOS的表达在缺血后2h出现,24～48h达最高峰,以后逐渐下降。HO-1表达在缺血后0.5h即出现,缺血后6～12h达最高峰。在缺血皮质半暗带的某些神经细胞有i NOS及HO-1的共同表达。结论脑缺血早期即有HO-1的表达,而i NOS表达则较晚出现,其表达的高峰期晚于HO-1。在半暗带的某些神经细胞可见有HO-1和i NOS的同时表达。

诱导型一氧化氮合成酶在肺结核组织中的定量分析

目的探索诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)在肺结核病变中的作用机制及临床意义。方法对46例肺结核组织和9例正常肺组织进行免疫组织化学染色,使用全自动数码显微镜系统进行图像积分光密度(iOD)定量分析,结合临床检验指标抗酸染色和结核菌素试验(PPD)结果进一步分析。结果在肺结核组织中均可见iNOS强阳性表达,iOD值(12±9)×104显著高于正常肺组织(3.4±2.6)×104(P<0.01),与PPD反应强度呈正相关(r=0.419,P<0.01),与抗酸染色不相关(P>0.05)。结论免疫细胞活化产生高水平的iNOS是结核菌感染人体的重要分子机制;全自动数码显微镜系统进行图像iOD定量分析/免疫组织化学染色能够更准确反应iNOS的客观含量。

诱导型一氧化氮合成酶在实验性大鼠脑损伤中表达及其意义

一氧化氮合成酶(Nitric oxide synthase,NOS)是体内催化L-精氨酸酶合成一氧化氮(Nitric oxide NO)的关键酶,介导神经损伤的NO来源于NOS阳性神经元。NO在中枢神经系统中的主要作用是调节脑血管张力和维护其完整性,并可作为神经介质参与长程增强效应、突触的可塑性和记忆的形成等。为探索NOS在脑损伤中的作用,我们采用免疫组化学方法,对诱导型一氧化氮合成酶在实验性大鼠脑损伤中的表达进行了研究,现将结果报道如下。