银杏叶提取物对星形胶质细胞诱导型一氧化氮合酶基因表达的调控

目的研究银杏叶提取物(EGh761)对星形胶质细胞合成一氧化氮(NO)的作用以及对共培养的小脑颗粒神经元的作用。方法以脂多糖(LPS)和IFN-γ诱导体外培养的大鼠星形胶质细胞表达诱导型一氧化氮合酶(iNOS),产生NO作为病理条件下胶质细胞过度活化的实验模型,应用逆转录基因扩增技术和蛋白质印迹技术检测EGb761对星形胶质细胞中iNOS基因表达的影响,并探讨这一调控作用的分子机制。结果EGb761能明显降低星形胶质细胞中iNOS mRNA和蛋白质的表达、减少NO 的生成、防止活化的胶质细胞损伤共培养神经元,抑制IκB-α的降解和阻止p65/RelA进入细胞核,提示EGb761对iNOS基因表达的抑制作用依赖于NF-κB信号通路。结论EGb761可能对与胶质细胞过度活化有关的神经系统疾病具有治疗、预防的作用。

妊娠早期小鼠卵巢、输卵管及子宫内诱导型一氧化氮合酶的分布

目的 了解胚泡着床前后妊娠昆明系小鼠卵巢、输卵管及子宫内诱导型一氧化氮合酶 (inducible ni-tric oxide synthase,i NOS)的分布。 方法 免疫细胞化学 L SAB法。 结果 妊娠 2～ 5 d小鼠的卵巢内 ,黄体细胞上有 i NOS的阳性表达 ;输卵管粘膜上有 i NOS的分布 ,肌层则为阴性 ;妊娠 2、3d的小鼠子宫内 ,阳性标记主要出现在子宫内膜上皮以及子宫内膜中的子宫腺上皮 ,内膜基质细胞为阴性 ;妊娠 4d的子宫内 ,子宫腺及蜕膜部分均有 i-NOS的分布 ,妊娠 5 d时 ,在小鼠胚泡的表面也检测到了 i NOS的存在。 结论 小鼠胚泡着床前后 ,在其卵巢、输卵管及子宫内均有 i NOS的存在 ,提示 i NOS在小鼠胚胎早期发育及着床过程中起作用。

槲皮素对刀豆蛋白A诱导小鼠急性肝损伤的保护作用

目的探讨槲皮素对刀豆蛋白A(Concanavalin A,Con A)诱导小鼠急性肝损伤的保护作用及其可能的分子机制。方法通过检测Con A注射后8 h血清转氨酶水平及肝组织病理学评估肝损伤;应用酶联免疫法(ELISA)检测TNF-α、IFN-γ、IL-4水平;定量PCR和Western blotting或免疫组织化学检测肝组织mRNA与蛋白的表达。结果与模型组相比,槲皮素预防组显著降低了血清转氨酶水平(P<0.05),且组织病理学分析表明肝脏炎症坏死程度明显减轻;与模型组相比,槲皮素预防组显著降低了血清促炎症细胞因子TNF-α、IFN-γ和IL-4的水平(P<0.01);槲皮素预防组肝组织NOX4、COX-2和i NOS基因与蛋白的表达均明显低于模型组(P<0.05)。结论槲皮素对Con A诱导小鼠急性肝损伤具有保护作用,其发挥有益作用的机制可能与抑制肝脏的炎症反应有关。

佛波酯对LPS/IFN-γ诱导的巨噬细胞活性氧产生的影响

目的研究佛波酯(PMA)对脂多糖/γ-干扰素(LPS/IFN-γ)诱导的巨噬细胞RAW264.7活性氧产生的影响。方法于实验前0、3、6、9、12、18h,用1μg/mL的LPS和100 U/mL IFN-γ诱导处于对数生长期的RAW264.7细胞,采用蛋白质印迹技术检测细胞中一氧化氮合酶(iNOS)的表达;对经LPS/IFN-γ诱导12h的RAW264.7细胞加入终浓度为200ng/mL的PMA,应用激光共聚焦显微技术观察RAW264.7细胞中活性氧的产生。结果 LPS/IFN-γ可使RAW264.7细胞的诱导型iNOS表达增加,同时PMA可刺激经LPS/IFN-γ诱导后的RAW264.7细胞产生呼吸爆发,细胞的荧光强度较未刺激组增强(P<0.01)。结论 PMA可促使经LPS/IFN-γ诱导的RAW264.7细胞产生大量活性氧。

抗氧化剂芦丁对星形胶质细胞iNOS基因表达的影响

研究抗氧化剂芦丁对星形胶质细胞可诱导型一氧化氮合酶基因表达的抑制作用,并探讨其作用的机制。以脂多糖和γ-干扰素诱导星形胶质细胞表达可诱导型一氧化氮合酶,应用蛋白质印迹分析以及ESR自旋捕集技术研究了芦丁对星形胶质细胞产生内源性一氧化氮的作用。研究结果表明芦丁能够有效地抑制星形胶质细胞可诱导型一氧化氮合酶基因的表达、减少内源性一氧化氮的生成,而这一抑制作用是通过NF-κB信号通路实现的。芦丁对星形胶质细胞的活化具有明显的调控作用。

细胞外信号调节激酶1/2在谷氨酸引起的星形胶质细胞炎症反应中的作用

目的观察谷氨酸诱导星形胶质细胞激活炎症细胞因子表达及细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)的表达情况,探讨ERK1/2在星形胶质细胞激活炎症细胞因子中的作用。方法传代体外培养的大鼠星形胶质细胞,分别用终浓度为20μmol/L和50μmol/L的谷氨酸作用30 min。应用ERK上游激酶MEK特异性阻断剂PD98059(10μmol/L)阻断ERK信号转导通路,Western blot观察阻断前后星形胶质细胞磷酸化ERK1/2、白细胞介素-1β(IL-1β)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和环氧合酶-2(COX-2)蛋白表达水平的改变。结果谷氨酸使体外培养星形胶质细胞磷酸化ERK1/2蛋白表达明显增加,同时,使iNOS、COX-2I、L-1β表达明显增加;PD98059可完全阻断谷氨酸引起的ERK1/2表达增加,也可抑制谷氨酸引起的iNOS、COX-2、IL-1β蛋白表达增加。结论ERK1/2信号转导通路参与谷氨酸引起体外培养星形胶质细胞炎症反应的作用。

细胞外信号调节激酶1/2在Aβ_(25-35)引起体外培养星形胶质细胞炎症反应中的作用

目的观察Aβ诱导星形胶质细胞激活炎症细胞因子表达及细胞外信号调节激酶1/2的表达。探讨细胞外信号调节激酶1/2是否参与了星形胶质细胞激活炎症细胞因子作用及其作用机制。方法传代体外培养的大鼠星形胶质细胞,分别用终浓度为10μmol/L和20μmol/L的Aβ25-35作用30分钟。在PD98059组,加入Aβ25-3520μmol/L前1小时,加入PD培养。用Western blot分析iNOS、COX-2、IL-1β、P-ERK1/2的改变。结果Aβ25-35可使体外培养星形胶质细胞P-ERK1/2蛋白表达明显增加,同时,Aβ25-35也可使iNOS、COX-2、IL-1β表达明显增加,ERK1/2上游激酶MEK特异性阻滞剂PD98059可完全阻断Aβ25-35引起的ERK1/2表达增加,也可抑制Aβ25-35引起的iNOS、COX-2、IL-1β蛋白表达增加。结论ERK1/2信号转导通路参与Aβ25-35引起体外培养星形胶质细胞炎症反应的作用。

iNOS基因在胶质细胞中转录激活机制初探

目的:通过瞬时转染p38MAPK途径中上游激酶:组成激活型MAPK激酶3(MKK3b)和MAPK激酶6(MKK6b),进一步了解p38MAPK级联传导信号系统调节iNOS基因在胶质细胞中的转录激活机制。方法:MKK3b或MKK6b与接有荧光素酶(luciferase,Luc)的大鼠iNOS启动基因质粒(iNOS-Luc);cAMP反应元件(CRE-Luc)和核因子κB(NFκB-Luc)联合转染C6胶质细胞株。结果:MKK3b/MKK6b能引起iNOS-Luc的激活,并都能够被p38MAPK抑制剂SB203580所抑制。MKK可以诱导cAMP反应元件(CRE-Luc)介导的和核因子κB(NFκB-Luc)依赖的转录活性。显性抑制型(dominantnegative,dn)CRE结合蛋白(dnCREB)和CCAAT/增强子结合蛋白(C/EBP)都是p38MAPK的靶向作用目标。结论:转染这两种转录因子产生相反的影响:dnCRE增强了iNOS-Luc的表达,而dnC/EBP则引起抑制作用,对CRE-Luc也具有相同的影响。

EGb761对星形胶质细胞iNOS基因表达的调控

目的：以脂多糖(LPS)和γ-干扰素(WN-γ)诱导体外培养的大鼠脑星形胶质细胞表达可诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、产生大量一氧化氮(NO)为病理条件下胶质细胞过度活化的实验模型，研究了银杏叶提取物(EGb761)对星形胶质细胞合成一氧化氮的作用以及对共培养的小脑颗粒神经元的作用。方法：应用逆转录基因扩增技术和蛋白质印迹技术检测了EGb761对星形胶质细胞中iNOS基因表达的影响，并探讨了这一调控作用的分子机理。结果：EGb76l能明显降低星形胶质细胞中iNOSmRNA和蛋白的表达、减少一氧化氮的生成、防止活化的胶质细胞损伤共培养神经元，抑制IKB-α的降解和阻止p65／RdA进入细胞核，结果提示EGb761对iNOS基因表达的抑制作用依赖于NF-κB信号通路。结论：实验结果提示EGb761可能对与胶质细胞过度活化有关的神经系统痰病具有治疗、预防的作用。

银杏叶提取物对胶质瘤细胞NF-κB表达和NO生成的调控

目的 研究银杏叶提取物(EGb761)对C6胶质瘤细胞核转录因子-κB(NF-κB)表达和可诱导型一氧化氮合酶(iNOs)、一氧化氮(NO)生成的影响。方法 以脂多糖(LPS)和佛波酯(PMA)诱导体外培养的C6胶质瘤细胞表达可诱导型一氧化氮合酶、产生大量NO，应用激光共聚焦成像系统和NO荧光探针监测细胞内NO浓度变化，逆转录基因扩增技术和蛋白质印迹技术检测EGb761对C6胶质瘤细胞中iNOs基因表达的影响，并探讨这一调控作用的分子机制。结果 EGb761能明显降低C6胶质瘤细胞中iNOs mRNA和蛋白的表达、减少NO的生成，抑制IκB-α的降解和阻止p65／RelA进入细胞核。结论 结果提示EGb761可通过NF-κB信号通路对C6胶质瘤细胞iNOs基因表达和NO的生成进行调控。

银杏叶提取物对胶质瘤细胞NF-κB表达和NO生成的调控

目的研究银杏叶提取物(EGb761)对C6胶质瘤细胞核转录因子-κB(NF-κB)表达和可诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、一氧化氮(NO)生成的影响。方法以脂多糖(LPS)和佛波酯(PMA)诱导体外培养的C6胶质瘤细胞表达可诱导型一氧化氮合酶、产生大量NO,应用激光共聚焦成像系统和NO荧光探针监测细胞内NO浓度变化,逆转录基因扩增技术和蛋白质印迹技术检测EGb761对C6胶质瘤细胞中iNOS基因表达的影响,并探讨这一调控作用的分子机制。结果EGb761能明显降低C6胶质瘤细胞中iNOSmRNA和蛋白的表达、减少NO的生成,抑制IκB-α的降解和阻止p65/RelA进入细胞核。结论EGb761可通过NF-κB信号通路对C6胶质瘤细胞iNOS基因表达和NO的生成进行调控。