MNP对氨基酰化酶的不可逆抑制作用的研究

用有机汞试剂MNP(2-chloromercuri-4-nitrophen01)对氨基酰化酶进行了修饰。在MNP存在的情况下,连续监测了氨基酰化酶催化底物的反应过程,发现MNP对氨基酰化酶的抑制作用为构象变化型,即在MNP与氨基酰化酶的必需半胱氨酸巯基反应之前,先使酶的构象发生了一个较快的变化,同时得到了这个构象变化的速度常数以及MNP与巯基反应的速度常数。

酶可逆抑制作用中线性混合型抑制的动力学

除竞争性抑制，非竞争性抑制和反竞争性抑制外，线性混合型抑制也是一种酶的可逆抑制作用，本文推导了线性混合型抑制的动力学方程并分析了它的动力学曲线的特点．

图形法导出可逆抑制作用的酶反应动力学方程

推导一个有可逆抑制作用的酶反应动力学方程的工作是很繁杂的，原因是这类酶反应的历程较复杂，为简化此项工作，这里介绍一种能迅捷导出复杂酶反应动力学方程的图形法．

α-苯巯基-α-氨基乙酸乙酯类LSD1抑制剂的设计、合成及活性评价

目的设计构建α-苯巯基-α-氨基乙酸乙酯类组蛋白赖氨酸特异性去甲基化酶1(lysine specific demethylase 1,LSD1)抑制剂,并进行生物活性评价与计算机模拟研究。方法以乙醛酸乙酯、氨和芳基硫酚为原料,采用三组分一锅法构建α-苯巯基-α-氨基乙酸乙酯类小分子化合物。采用课题组构建的筛选平台,测试目标化合物在5和1μmol·L^(-1)浓度下对LSD1的抑制率,将活性最好的化合物测试其半数抑制浓度值(IC_(50)),并通过分子模拟研究其结合机制。利用稀释法评价抑制剂的可逆性,通过迁移(transwell)和蛋白质印迹(Western blot)试验评价抑制剂对肿瘤细胞的抗转移和上皮-间质转换(epithelial-mesenchymal transition,EMT)过程。结果共合成11个目标化合物,多数化合物具有很好的LSD1抑制活性。活性最好的化合物4j的IC_(50)值为0.28μmol·L^(-1),能够可逆性作用于LSD1,在细胞水平能通过抑制LSD1来提高H3K4me2的表达水平。此外,化合物4j能够抑制肺癌细胞H1299的转移能力和EMT过程。结论α-苯巯基-α-氨基乙酸乙酯类结构是一类结构新颖的LSD1抑制剂骨架,为进行后续结构优化和构效关系研究打下良好基础。