台盼蓝拒染法、MTT法、CCK-8法在研究As_2O_3细胞毒性作用中的意义

目的筛选三氧化二砷（As203）对HL一60细胞毒性的有效剂量及作用时间的检测方法，并对其结果进行分析。方法采用台盼蓝拒染法、M1Tr法、CCK～8法测定不同浓度的As203，体外作用HL一60细胞株的细胞存活率．采用单因素方差分析其与剂量一时间依赖反应的关系。结果4．0、8．0μmol／L作用48、72h及8．0μmol／L作用24h被染细胞小于5％，其余均未观察到蓝染细胞。MTY法检测在1．0～8．0μmol／LAs20，剂量范围内培养24、48、72h（P〈0．05），各组均能够抑制HL-60细胞活性。CCK-8法检测在0．5～8．0μmol／LAs203剂量范嗣内培养24、48、72h（P〈0．05），各组均能够抑制HL-60细胞活性。HL-60细胞在不同时间、不同浓度均能出现细胞存活率明显降低，As20，的毒副作用呈现明显的剂量-时间依赖反应。结论在研究As203的细胞毒性时，用CCK-8法优于M11’法，均比台盼蓝法更为灵敏。

鉴定细胞活性的实验方法

本文介绍了5种与高中生物学教学有关的鉴定细胞活性的实验方法。

MTT法不适用于代谢水平改变的细胞活力检测

利用MTT法和台盼蓝拒染计数法分别检测L02肝细胞经游离脂肪酸(FFA)处理的存活率,同时测定各组细胞琥珀酸脱氢酶(SDH)活性。结果 MTT法显示0.8 mmol/L FFA组细胞存活率较正常组显著增加(p<0.01),而台盼蓝拒染计数法却显示该组细胞存活率较正常组无明显改变(p>0.05),同时0.4 mmol/L、0.8 mmol/L FFA组细胞SDH活力显著增加(p<0.01)。研究表明,MTT法不适用于检测代谢水平改变的细胞生长、存活等指标。

台吩蓝拒染法测定细胞活力的改进与观察

近几年，胎肝输注已被临床用于治疗晚期肝硬变病人。而胎肝悬液中细胞活力大小与有核细胞总数的高低是临床治疗病人剂量的重要指标。因此细胞活力测定一直被临床工作人员所关注。目前大多数临床实验室都用常规台盼蓝试验方法，我们通过实践对原方法略加改进，

猫儿眼植物酸对人SGC-7901细胞增殖的影响及其机制探讨

目的探讨猫儿眼植物酸对人SGC7901细胞增殖影响及其机制。方法采用流式细胞仪、MTT法和台盼蓝染色法测定猫儿眼植物酸对人SGC7901细胞增殖的影响。结果分别给予猫儿眼植物酸10.0、1.0、0.1mg·L-1培养48h,MTT法测定结果显示,猫儿眼植物酸对人SGC7901细胞增殖的抑制率分别为82.9%、42.7%和24.6%;台盼蓝法计数结果显示,给予猫儿眼植物酸后,活细胞数随培养时间的延长而减少,到48h,对SGC7901细胞增殖抑制率分别为76.4%、56.9%、42.6%,凋亡率分别为26.8%,22.5%和15.6%。结论猫儿眼植物酸对人SGC7901细胞增殖具有明显的抑制作用,其抑制作用强度随给药浓度的增加和作用时间的延长而递增。

猫儿眼植物酸抗肿瘤作用的实验研究

采用气-质联用仪、流式细胞仪、MTT法和台盼蓝法对猫儿眼植物酸组分及其抗肿瘤活性进行实验研究.结果为,分别给予SGC-7901细胞猫儿眼植物酸10.0μg/mL、1.0μg/mL和0.1μg/mL48h后测定,对肿瘤细胞的抑制率分别为73.5%、52.9%和26.5%,半数抑制浓度(IC50)为0.909μg/mL;对细胞增殖抑制率分别为70.8%、58.7%和30.9%,IC50为0.552μg/mL;凋亡率分别为26.8%、22.6%和12.4%.

猫眼草提取物对人胃癌细胞BCG-823增殖影响的实验观察

目的观察猫眼草提取物对人胃癌细胞株BEG-823增殖的影响并探讨其可能的机制。方法人胃癌细胞株BEG，823分别给予猫眼草提取物10．0，1．0，0.1mg／L培养48h，采用MTT法和台盼蓝染色法检测猫眼草提取物对胃癌细胞株增殖的影响。结果Mrrr法测定结果显示，猫眼草提取物各浓度组对BCG一823细胞增殖均有明显抑制作用且具有良好的量效关系（P〈0．05）；台盼蓝法计数结果显示，给予猫眼草提取物后，活细胞数随培养时间的延长而减少，对胃癌细胞株BGC。823增殖的抑制具有良好的时效关系（P〈0．05）。结论猫眼草提取物对人胃癌细胞株BCG-823增殖具有明显的抑制作用。其抑制作用强度随给药浓度的增加和作用时间的延长而递增。

蜂毒素对肝癌细胞系BEL-7402细胞凋亡的影响

目的 :了解蜂毒素诱导肝癌细胞凋亡的作用。方法 :肝癌细胞BEL 74 0 2经不同浓度的蜂毒素处理后 ,采用台盼蓝排染法测定细胞增殖的抑制率 ,流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡及Fas蛋白的表达。结果 :16 μg/ml蜂毒素作用肝癌细胞系BEL 74 0 2 ,12h抑制率为 (78.13±6 .15 ) % ,2 4h抑制率为 10 0 % ;4 ,8μg/ml蜂毒素对细胞的生长也有抑制作用 ,并且可诱导细胞凋亡的产生 ,能够增加细胞Fas蛋白的表达。结论 :蜂毒素高剂量有杀伤肿瘤细胞作用 。

脑苷肌肽对rd小鼠视网膜细胞保护作用的研究

目的观察脑苷肌肽(cattle encephalon glycoside and ignotin,CEGI)对体外分离的rd小鼠视网膜细胞的保护作用,旨在探求CEGI对视网膜以及视神经损伤相关疾病的治疗效果,为临床用药提供客观依据和指导。方法采用体外分离rd小鼠视网膜细胞悬液,用MTT和台盼蓝染料排斥法观察CEGI和神经生长因子(NGF)对细胞活性的影响。结果 MTT实验示CEGI8.00mg·L-1、0.04g·L-1、0.20g·L-1和NGF0.04mg·L-1、0.20mg·L-1对视网膜细胞活性有促进作用,尤其以CEGI0.04g·L-1和NGF0.20mg·L-1最为明显,细胞增殖率分别为130.0%±21.8%和124.0%±13.3%。若将二者组合使用,可使细胞增长率达到132.0%±9.1%,与药物空白对照组100.0%±10.1%相比差异均有统计学意义。台盼蓝染料排斥试验结果显示0.04g·L-1CEGI组活细胞比例在除5min外的各时间点,都明显高于对照组,而0.20mg·L-1NGF组也可保护视网膜细胞,主要以短时间点为主(5min～1d),与对照组相比差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论 CEGI有促进视网膜细胞生长发育作用,对rd小鼠视网膜细胞有一定的保护作用。

桂皮酸对急性早幼粒细胞白血病NB4细胞增殖和分化作用

目的 探讨桂皮酸 (CinnamicacidCINN )对急性早幼粒细胞白血病 (APL)细胞增殖和分化的作用。方法 将APL细胞株NB4细胞与不同浓度CINN在体外共同培养 ,应用台盼蓝拒染试验及MTT比色法观察细胞生长曲线、生长抑制率 ;用光学显微镜观察细胞形态变化 ;以NBT还原试验检测药物作用前后NB4细胞NBT还原能力改变 ;用流式细胞仪测定细胞周期及细胞分化抗原CDlla、CDllb的表达。结果 lmmol/LCINN、3mmol/LCINN和 5mmol/LCINN能明显抑制NB4细胞增殖 ,呈剂量时间依赖性 ;lmmol/L、3mmol/LCINN能诱导NB4分化 ,表现在NBT还原能力显著增强 ,CDlla、CDllb表达升高 ,药物组与对照组之间差异有显著性 (P <0 .0 1) ,流式细胞术分析发现 ,CINN处理组细胞被阻滞于S期 ,S期细胞数明显增多 ,G2 期细胞数减少。结论 CINN体外能诱导NB4细胞分化 ,增殖能力下降。

氨基葡萄糖硫酸盐诱导K562细胞凋亡的实验研究

目的 探讨氨基葡萄糖硫酸盐(GS)对慢性髓系白血病K 5 62细胞凋亡诱导作用和分子机理。方法 采用台盼蓝拒染法测定细胞生长曲线来观察GS对K5 62细胞的生长抑制作用;取对数生长期K 5 62细胞,在0 .5 ,1.0 ,5 .0mmol/LGS不同浓度作用48h后,利用细胞计数、电镜、吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)染色、DNA梯状电泳、流式细胞仪等方法来观察GS对K 5 62细胞的抑制效应和促凋亡作用。并用Westernblot检测活化的caspase 3和bcl- 2基因的表达。结果 0 .5 ,1.0 ,5 .0mmol/LGS对K 5 62细胞的生长有抑制作用,并呈时间和剂量依赖性(P <0 .0 1)。采用光镜、电镜和AO /EB染色法发现5mmol/LGS作用K 5 62细胞后,出现典型的凋亡形态学改变。AnnexinV染色后流式细胞仪能检测到早期凋亡细胞,细胞周期显示:G1期细胞比例增高,S期比例减低,并有凋亡峰。有明显的梯状DNA。同时GS诱导K 5 62细胞凋亡后出现活化的Caspase 3 ,而Bcl- 2蛋白表达减弱,甚至消失。结论 GS能诱导白血病K- 5 62细胞凋亡,该过程伴有Caspase- 3的活化和Bcl- 2蛋白表达降低。

白细胞介素-2对脐血CIK细胞体外增殖活性的影响

目的研究白细胞介素2对脐血细胞因子诱导的杀伤细胞增殖的影响。方法将白细胞介素2与经CD3单抗、γ干扰素活化的脐血细胞因子诱导的杀伤细胞体外共培养,以台盼蓝拒染法、MTT法检测细胞增殖水平,Giemsa染色观察细胞集落。结果体外培养3、7、10d后脐血单个核细胞分别扩增至3倍、9倍、25倍,培养10d后细胞密度增大,集落形成。结论白细胞介素2能诱导脐血细胞因子诱导的杀伤细胞增殖,是脐血造血干细胞扩增的重要细胞因子。

木犀草素对人白血病HL-60细胞内蛋白激酶C的抑制作用

目的 观察木犀草素对HL- 60细胞内蛋白激酶C活性的影响。方法 采用台盼蓝拒染法,在不同条件下测定细胞增殖的抑制率。PKC活性通过测定转移到CK2 底物上的[γ 32P]ATP的32P的放射性活度来检测。结果 木犀草素能够显著地抑制HL- 60细胞内PKC的活性并呈剂量依赖性关系,其IC50为2.38μmol/L,作用效果强于阳性对照槲皮素(IC50=2.54μmol/L)。结论 木犀草素作为一种细胞内的PKC抑制剂具有潜在的抗肿瘤临床应用价值。

当归多糖诱导K_(562)白血病细胞凋亡及相关凋亡基因的实验研究

目的从细胞凋亡角度探讨当归的成分当归多糖(ASP)抑制白血病细胞增殖的机制。方法体外培养白血病细胞株K562,培养时添加25μg/ml、250μg/ml、2500μg/mlASP,分别于第2、4、6d取细胞,用台盼蓝拒染法进行活细胞计数,观察细胞形态改变,免疫组织化学检测bc12、cmyc基因的表达。结果2500μg/ml的ASP对白血病细胞株K562有显著抑制作用,且呈剂量效应关系;ASP诱导细胞后bc12、cmyc均明显降低(P<0.05)。结论ASP对白血病细胞株K562细胞增殖具有显著抑制作用,bc12、cmyc表达降低可能是ASP诱导白血病细胞凋亡重要途径之一。

羟喜树碱对人肾上腺皮质癌SW-13细胞生长增殖的影响

目的观察羟喜树碱对人肾上腺皮质癌SW-13细胞生长增殖的影响。方法体外培养人肾上腺皮质癌SW-13细胞,随机分为干预组和对照组,干预组加入羟喜树碱使其终浓度为0.8μg/ml,对照组不加羟喜树碱,分别培养48 h后,采用台盼蓝拒染法观察羟喜树碱对SW-13细胞生长增殖的影响。结果光镜下可见干预组SW-13细胞数减少,死亡细胞数较多,干预组活细胞率明显低于对照组(P<0.05)。结论羟喜树碱可能具有抑制人肾上腺皮质癌SW-13细胞增殖并促进其死亡的作用。

大豆黄酮对人乳腺癌MCF-7细胞系体外增殖和细胞周期的影响

目的观察大豆黄酮对人乳腺癌MCF-7细胞体外增殖及细胞周期的影响并探讨其作用机制。方法分别采用台盼蓝拒染法、流式细胞术,在不同条件下测定大豆黄酮对细胞增殖抑制率及细胞周期分布的影响。蛋白激酶C(PKC)活性通过测定转移到CK2底物上的[γ-32P]ATP的32P的放射性活度来检测。结果大豆黄酮能够显著地抑制MCF-7细胞的体外增殖,作用24h可使MCF-7细胞的细胞周期阻滞于G2/M期和S期。细胞内PKC活性分析表明:大豆黄酮能够显著地抑制MCF-7细胞内PKC的活性并呈剂量依赖性关系,其IC50为13.27μmol/L。结论大豆黄酮可抑制人乳腺癌MCF-7细胞的体外增殖,其作用机制可能与细胞周期G2/M期和S期阻滞及抑制PKC的活性有关。

4种细胞毒活性方法评价紫草素体外肿瘤细胞抑制作用效果

目的研究4种细胞毒活性测定方法对紫草素体外肿瘤细胞抑制作用的评价效果,对紫草萘醌为代表的天然色素在细胞毒活性评价中常出现的假阴性现象进行对比分析。方法将紫草素与其高敏感株急性早幼粒白血病HL-60细胞和低敏感株人非小细胞肺癌A549细胞体外共培养,通过台盼蓝法、磺酰罗丹明B(SRB)法、Cell Counting Kit-8(CCK-8)法和四甲基偶氮唑盐(MTT)法进行平行实验,测定紫草素在0.4～128μmol/L抑制细胞生长的量效关系曲线。结果台盼蓝法、SRB法、CCK-8法、MTT法测得紫草素对HL-60细胞的半数抑制浓度(IC50)分别为0.57、0.77、1.36、1.01μmol/L,对A549细胞的IC50分别为6.30、10.38、13.48、15.24μmol/L。紫草素浓度分别在3.2、32μmol/L以下时,4种检测方法得到其对2种细胞的抑制率均呈线性增长,超过此浓度即出现差异。其中台盼蓝法与SRB法结果一致性良好,而MTT法与CCK-8法测得的抑制率较低。对于HL-60细胞,紫草素12.8μmol/L时,CCK-8测得抑制率为81%,台盼蓝法为96%;对于A549细胞,紫草素128μmol/L时,MTT法测得抑制率为89%,台盼蓝法为99%。紫草素的吸收光谱与甲臜在波长400～600 nm存在重叠,最大重叠峰在550～570nm,CCK-8试剂与紫草素对HL-60细胞存在协同抑制效应。台盼蓝法结果显示高浓度紫草素几乎完全杀死板孔内细胞,相比对照组差异显著,但MTT法和CCK-8法结果出现假阴性。结论紫草萘醌为代表的天然色素的细胞毒活性评价不建议使用MTT法和CCK-8法,推荐使用SRB法和台盼蓝法。

自然杀伤细胞系NK-92治疗卵巢癌的体外及动物实验研究

目的研究放射线照射后的自然杀伤细胞系NK92对人卵巢癌细胞的体外杀伤活性及对卵巢癌动物模型的治疗效果。方法医用电子直线加速器照射NK92细胞,照射剂量分别为0、1、2、4、8、16Gy,将NK92细胞按照上述不同照射剂量分为6组。台盼蓝拒染法进行细胞计数,氚标记的胸腺嘧啶核苷掺入法检测细胞增殖活性,51Cr释放法检测NK92细胞对靶细胞HO8910的杀伤活性。观察照射后的NK92细胞对NOD/SCID鼠卵巢癌皮下移植瘤的治疗效果,NOD/SCID鼠分肿瘤组(仅注射人卵巢癌细胞系HO8910细胞)和治疗组(同时注射HO8910和8Gy组NK92细胞)。结果(1)体外实验:4、8Gy组NK92细胞数量在照射后的第5天分别减少到10%、0%;照射后48h,与0Gy组NK92细胞相比,4、8Gy组增殖活性分别降至29%、6%。对HO8910细胞杀伤结果显示,4、8Gy组杀伤率分别在42%～62%、33%～58%之间。(2)动物实验:接种后30、40、50d,肿瘤组NOD/SCID鼠瘤结节体积分别为(0.214±0.061)cm3、(0.382±0.051)cm3、(0.428±0.021)cm3,治疗组分别为(0.047±0.019)cm3、(0.167±0.021)cm3、(0.343±0.022)cm3,治疗组与肿瘤组相比均有减小,两组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。治疗组NOD/SCID鼠全部存活到120d,肿瘤组于接种后74～82d全部死亡,中位生存时间为76d,与治疗组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论放射线照射后的NK92细胞治疗卵巢癌是有效的。