右旋柠烯乳剂对人胃癌移植瘤生长和转移的抑制作用

目的 研究并探讨右旋柠烯乳剂 (D limonene)对人胃癌生长和转移的抑制作用及其机制。 方法 采用人胃癌BGC 82 3细胞株经反复传代成实体瘤的完整组织块 ,建立人胃癌裸小鼠原位移植瘤模型。将 4 0只荷瘤裸小鼠随机分成 4组 ,移植后第 5d开始分别用生理盐水灌胃、5 氟尿嘧啶 (5 FU)腹腔注射、D limonene灌胃、D limonene灌胃 +5 FU腹腔注射共 7周。第 8周处死动物 ,测量原位肿瘤瘤重并计算抑瘤率 ,检测肿瘤细胞凋亡指数 (AI)、肿瘤微血管密度 (MVD)及免疫组织化学测定肿瘤组织血管内皮生长因子 (VEGF)的表达变化 ,光镜与电镜观察组织细胞超微结构变化 ;观察荷瘤鼠腹膜、肝、其他脏器肿瘤转移及腹水情况。 结果 D limonene组、联用组分别与对照组相比 ,胃癌的原位肿瘤瘤重与抑瘤率、AI、MVD、VEGF下调 ,差异有显著性 (P <0 0 5 )。腹膜、肝转移受到明显抑制 (P <0 0 5 )。 结论 D limonene通过抑制肿瘤微血管形成 ,诱导胃癌细胞凋亡 ,抑制了体内胃癌的生长和转移。

右旋柠烯对不同类型人胃癌细胞的生长抑制作用

目的 :探讨右旋柠烯 (D limonene)对不同类型人胃癌细胞的生长抑制作用及其机制。方法 :以D limonene作用于SGC 790 1、BGC 82 3及AGS三种不同类型人胃癌细胞 ,采用噻唑蓝 (MTT)比色法、流式细胞仪及电镜检测细胞生长抑制率、凋亡率以及形态学改变 ,免疫细胞化学法检测 p5 3、bax和bcl 2基因表达。 结果 :D limonene处理后的细胞生长抑制率与凋亡率均增加 ,与药物浓度呈正相关。细胞呈现核固缩、染色质边集、凋亡小体形成等典型凋亡表现。经D limonene处理后SGC 790 1、BGC 82 3细胞株 p5 3、bax蛋白表达明显增加 ,bcl 2蛋白表达降低。AGS细胞株bax蛋白表达明显增加 ,bcl 2蛋白表达降低。 结论 :D limonene对人胃癌细胞的抑制作用主要是通过诱导细胞凋亡 ,不同类型的细胞株作用途径可能不同。升提 p5 3与bax及降低bcl 2的蛋白表达为其诱发胃癌细胞凋亡的机制之一。

右旋柠烯对人乳腺癌细胞微丝结构及体外侵袭能力的影响

目的探讨右旋柠烯对乳腺癌细胞微丝骨架机构及体外侵袭行为的影响和Fascin-1相关机制。方法不同剂量右旋柠烯作用于乳腺癌细胞MDA-MB-435,激光共聚焦技术获得F-actin细胞骨架形态morphology改变;利用Transwell小室,以Matrigel和纤维粘连蛋白构建重组基底膜,检测右旋柠烯对乳腺癌侵袭人工基底膜能力的影响;应用Western Blot法检测乳腺癌细胞Fascin-1蛋白表达。结果右旋柠烯作用后乳腺癌细胞间排列较规则,细胞基底少见长而密的微刺结构;微丝结构改变的同时对基底膜的侵袭能力下降。Western Blot结果显示,Fascin-1蛋白表达明显下调(分别为2.9±0.3、12.4±0.7和19.3±0.7),与对照组(28.6±0.5)比较差异显著(P<0.05)。结论右旋柠烯通过下调Fascin-1蛋白表达,调控乳腺癌细胞微丝结构,进而抑制体外侵袭能力。

右旋柠烯对裸鼠人乳腺癌模型淋巴转移的抑制作用

目的:观察右旋柠烯对人乳腺癌淋巴管生成和淋巴结转移的影响,探讨其抗肿瘤转移机制。方法:人乳癌细胞株MDA-MB-435裸鼠乳腺原位种植建立乳癌模型,免疫组化法检测右旋柠烯对乳癌组织微淋巴管密度(LMVD)和VEGF-C的影响。结果:右旋柠烯组乳癌生长和淋巴结转移受到抑制,LMVD降低,VEGF-C表达下调。结论:右旋柠烯通过影响VEGF-C诱导的淋巴管生成抑制乳癌淋巴结转移。

右旋柠烯对人结肠癌LS174T细胞p-ERK和p-Akts表达的影响

目的研究右旋柠烯（D—limonene）对人结肠癌细胞（LSl74T）中信号传导分子ERKl／2、Akt及其磷酸化蛋白（P—ERK和P—Akts蛋白〉表达的影响。方法采用四甲基偶氮唑盐（MTF）方法检测右旋柠烯对LSl74T细胞增殖的抑制作用；采用Westernblot方法检测不同浓度右旋柠烯对LSl74T细胞中ERKl／2、Akt及其磷酸化蛋白表达情况的影响。结果右旋柠烯作用LSl74T细胞48h后，呈剂量依赖性抑制细胞增殖；Westernblot结果显示右旋柠烯对细胞中ERKl／2、Akt蛋白的表达没有明显影响，但显著下调P—ERKl／2蛋白和P—Akts的表达。结论右旋柠烯抑制LSl74T细胞增殖可能与其抑制P—ERKl／2和P—Akts表达有关。

右旋柠烯对小鼠胃癌COX-2表达及淋巴管生成的影响

目的探讨右旋柠烯对胃癌组织中淋巴管的生长以及环氧化酶-2(COX-2)表达的影响,为癌的防治提供形态学依据。方法将50只昆明小鼠用致癌剂苯并芘(B(a)P)灌胃12周构建小鼠胃癌模型。确定胃癌形成之后将其随机分成治疗组(n=25)、对照组(n=25)。治疗组用5%右旋柠烯灌胃干预;对照组用等量色拉油灌胃。另选取10只昆明小鼠用等量色拉油灌胃作为正常组(n=10)。第24周取材,测量肿瘤体积。采用HE染色观察癌组织的生长、浸润;免疫组织化学S-P法分析COX-2和淋巴管内皮细胞透明质酸受体-1(LYVE-1)在各组组织及淋巴管中的表达。结果治疗组肿瘤发生率为52%低于对照组的82%(P<0.05),其肿瘤体积亦小于对照组[(0.758±0.33)cm3比(2.124±0.29)cm3,P<0.05]。光镜下HE染色可见正常胃壁的层次结构被癌组织破坏,并有大量炎性细胞浸润,对照组癌细胞侵袭范围广而深,多达肌层;治疗组侵袭范围较小,主要限于黏膜及黏膜下层。免疫组织化学染色治疗组胃癌组织COX-2呈弱阳性表达且低于对照组(39%比78%,P<0.05),而对照组较正常组表达明显增高(78%比20%,P<0.05)。LYVE-1的表达符合毛细淋巴管的典型形态特征,治疗组胃癌周边组织微淋巴管与对照组相比管腔较小,微淋巴管密度(LMVD)较少,但与正常组比较明显增多(均P<0.05)。结论右旋柠烯对肿瘤生长有抑制作用,可降低瘤细胞COX-2的表达并影响淋巴管生成;LMVD和COX-2的阳性表达率均与胃癌的生长浸润有关。

右旋柠烯对实验性乳腺增生症的影响

目的:观察右旋柠烯(d limonene ,DL)对大鼠乳腺增生及血雌激素和孕激素水平的影响。方法:苯甲酸雌二醇-黄体酮注射复制乳腺增生模型;HE染色观测乳腺组织学改变;放射免疫法检测血雌激素和孕激素水平。结果:右旋柠烯低、中、高剂量均能减少大鼠乳腺小叶数(9.2 0±2 .3 2、6.90±1.2 0、6.10±1.3 7)、小叶腺泡数(8.2 0±1.75、6.10±2 .2 3、5 .10±1.5 2 )和导管上皮层数(5 .3 0±0 .95、4.5 0±1.2 7、3 .10±0 .99) ,与模型组(分别为10 .0 0±1.5 4、12 .91±3 .88和6.17±1.5 9)比较有显著性差异(P <0 .0 1)。右旋柠烯高、中剂量亦能降低血雌激素水平(2 8.3 5±2 .16、2 5 .17±1.2 5 ) ,提高孕激素水平(3 3 .84±2 .2 3、3 5 .3 9±2 .2 0 ) ,与模型组(分别为3 2 .63±0 .93 ,3 1.77±1.48)比较差异显著(P <0 .0 1) ,且对雌激素水平的影响有明显的量效关系。结论:右旋柠烯可抑制大鼠乳腺增生,降低血清雌激素水平、提高孕激素水平可能为其作用机制。

右旋柠烯抑制小鼠S-180移植瘤生长的实验观察

目的观察右旋柠烯乳剂(D-limonene)对小鼠移植瘤生长及转移的抑制作用。方法用小鼠S180癌性腹水建立皮下移植瘤模型,随机分为3组,预防组建模当天开始给药;治疗组移植后第5天开始给药;对照组不给药。每3d测量肿瘤大小,20d后取材,观察肿瘤细胞的浸润程度及淋巴结转移。结果对照组肿瘤体积较大,与皮肤及深部组织发生粘连,7只发现颈部或腋下淋巴结肿大。治疗组和预防组移植瘤生长速度明显缓慢,体积小,且瘤体较规则,未发现有淋巴结转移者。结论右旋柠烯有抑制肿瘤生长,减少淋巴结转移的作用,其机制有待进一步探讨。

右旋柠烯对大鼠结直肠癌E-钙黏蛋白和β-连环素表达的影响

目的观察D-limonene(右旋柠烯)对大鼠结直肠癌的生长和E-cad(E-钙黏蛋白,E-cadherin)、β-cat(β-连环素,β-catenin)表达的影响,从分子学角度探讨其抗肿瘤的机制。方法皮下注射致癌剂二甲基肼(dimethylhydrazine,DMH)构建大鼠原发肠癌模型,中期后给予D-limonene干预,免疫组化染色观察癌组织E-cad、β-cat的表达情况。结果E-cad和β-cat在两组均有异常表达,治疗组异常表达率低;β-cat对照组异位表达增加。结论D-limonene降低了E-cad、β-cat异常表达率,可能抑制了肿瘤的发展和转移。

小鼠S-180移植瘤模型的建立及右旋柠烯抑瘤作用的实验研究

目的建立小鼠移植瘤模型,研究右旋柠烯乳剂(D-limonene)对移植瘤的生长及其肿瘤细胞转移的抑制作用及其机制。方法取昆明小鼠30只,用S180小鼠癌性腹水皮下注射建立移植瘤模型后,随机分为3组,每组10只。预防组建模的当天开始给药;治疗组移植后第5天开始给药;对照组不给药,其间每3d测量肿瘤大小。20d后处死取材。观察肿瘤体积和肿瘤细胞的浸润程度。结果对照组肿瘤体积较大,与皮肤及深部组织发生粘连,部分肿瘤侵及颈部、腋下。治疗组和预防组皮下移植瘤生长速度与对照组相比明显缓慢,体积小,且瘤体较规则。结论异种肿瘤移植成功率高;治疗组和和预防组皮下移植瘤生长速度与对照组相比明显缓慢,体积小,向周边浸润减少。推测右旋柠烯明显抑制肿瘤生长。

右旋柠烯对乳腺癌淋巴结转移影响的实验研究

目的探讨右旋柠烯对乳腺癌淋巴结转移的影响。方法人乳癌细胞株MDA.MB-435裸小鼠乳腺原位种植建立乳腺癌模型,分3组进行实验,免疫组织化学方法检测乳腺癌LMVD、VEGF-C,比较各组肿瘤体积大小、转移率、LMVD及VEGF-C。结果右旋柠烯组乳癌生长和淋巴结转移受到抑制,LMVD降低、乳癌转移率下降、VEGF-C表达下调。结论右旋柠烯通过抑制乳腺癌组织淋巴管增生,减少淋巴管密度,从而达到抑制乳腺癌的生长和转移。

右旋柠烯对HL-60、K562白血病细胞体外作用的研究

本研究观察右旋柠烯(d-limonene,D-L)对HL-60和K562白血病细胞增殖凋亡的影响,并进一步探讨其作用机制。首先采用碘化丙锭染色法观察右旋柠烯对HL-60、K562细胞增殖的影响,再通过细胞形态学观察、流式细胞术分析、免疫细胞化学半定量测定突变型p53、bcl-2、bax基因的表达水平,系统观察D-L对HL-60、K562细胞体外诱导凋亡的情况。结果表明D-L抑制HL-60和K562细胞的增殖,IC50均为0.75mmol/L,呈剂量时间依赖关系;D-L诱导HL-60、K562细胞凋亡;D-L在诱导HL-60细胞凋亡过程中随作用浓度增加,bcl-2的表达下降;D-L在诱导K562细胞凋亡过程中随作用浓度增加,突变型p53及bcl-2的表达下调,而bax的表达上调。结论D-L抑制HL-60和K562细胞增值并诱导其凋亡;突变型p53,bcl-2,bax参与了D-L诱导凋亡的基因调控。

右旋柠烯诱导人白血病HL-60细胞凋亡及其机制的研究

目的:探讨右旋柠烯诱导人髓性白血病HL60细胞凋亡的作用及其相关机理。方法:采用碘化丙啶染色法、流式细胞仪技术、荧光染色以及免疫细胞化学技术,观察右旋柠烯对白血病细胞凋亡及相关蛋白表达的影响。结果:不同浓度的右旋柠烯(0.5、0.6、0.7、0.8、0.9mmol/L)均对白血病细胞增殖有抑制作用,呈时间及剂量依赖关系。右旋柠烯可诱导白血病细胞凋亡,浓度在0.5、0.75、1.0mmol/L时的凋亡率(%)分别为7.31±1.17,30.07±2.17,25.06±1.78。荧光染色可见细胞凋亡的形态学改变,随右旋柠烯浓度的增高,细胞内Bcl2蛋白的表达逐渐减少,细胞内的突变型P53及bcl2基因蛋白表达没有变化。结论:右旋柠烯可以抑制HL60细胞增殖并可以诱导其凋亡,其作用机理与下调细胞内的Bcl2蛋白的表达有关。

右旋柠烯对幼鼠颞叶癫痫海马星形胶质细胞的影响

探讨右旋柠烯(D-L)对癫痫幼鼠海马星形胶质细胞胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)的影响。利用尼氏染色及免疫组化技术观察匹罗卡品致癫痫的幼鼠经药物(左乙拉西坦、丙戊酸钠、D-L)治疗后星形胶质细胞形态学变化和GFAP的表达。尼氏染色显示药物治疗后幼鼠海马胶质神经元脱失较未治疗的幼鼠明显减轻;海马GFAP免疫阳性细胞数在药物治疗后的幼鼠较未治疗幼鼠明显减少(P<0.05)。幼鼠癫痫发作可能与海马星形胶质细胞增生有关,D-L对发育期大鼠颞叶癫痫星形胶质细胞的增生及GFAP的表达似有抑制作用,推测D-L可能具有抗癫痫作用。

自制复方右旋柠烯乳剂溶解胆固醇结石的实验研究

本研究通过对人胆囊结石标本的成份分析,进而选用对各种主要成分有良好的溶解作用的药物配成4组复方溶石液,通过体外溶石实验,筛选出复方右旋柠烯乳剂的溶石效果最好。在此基础上,用家兔作动物体内溶石实验及动物急性、亚急性毒性试验,局部刺激试验。结果证明,自制复方右旋柠烯乳剂对CS有显著的溶解作用,溶石速度快,且毒副作用小,是一个很有前途的CS接触溶解剂。

开发“右旋柠烯”新用途市场前景广阔

我国是仅次于巴西的世界第2柑桔生产大国。目前国内生产的柑桔主要供人们作为水果直接食用，也有相当数量的柑桔被运回果汁厂加工成鲜桔汁供出口或国内市场消费。榨汁后剩下的桔子渣中可以提取出一种宝贵的医药化工原料—右旋柠烯(d-limonene)。它是一种五色透明的液体，沸点在176℃左右，具有令人愉快的柠檬香气。

右旋柠烯诱导人胃癌细胞凋亡

目的 探讨右旋柠烯 (D limonene)诱导人胃癌细胞株凋亡作用的机制。方法 采用噻唑蓝 (MTT)比色法、电镜、流式细胞术以及免疫细胞化学法 ,对p5 3和bcl 2在肿瘤细胞内的表达以及细胞凋亡的定性与定量指标进行检测。结果 经D limonene处理的BGC 82 3细胞出现核固缩 ,染色质边集 ,凋亡小体形成。凋亡细胞发生率与药物浓度呈正相关 ,即药物浓度为 0 .2 5 μg/ml(4 8h) ,凋亡细胞的发生率从 (2 .71± 0 .78) %上升至 (31.6 2± 7.81) %。经D limonene处理的BGC 82 3细胞内p5 3蛋白表达较对照组明显增加 ,bcl 2蛋白表达较对照组降低。结论 D limonene对人胃癌细胞的杀伤主要是通过诱导细胞凋亡 ,升提p5 3及降低bcl 2的蛋白表达为其诱发肿瘤细胞凋亡的机制之一。

右旋柠烯的药理毒理及临床应用研究进展

柠檬烯是自然界中常见的单萜类化合物,是一种具有柠檬香味的挥发油,主要存在于一些柑橘(橙、柠檬和葡萄柚)中。右旋柠烯是柠檬烯主要的存在形式,动物试验表明右旋柠烯具有抗肿瘤、抗炎、抗氧化应激等作用。毒性研究表明右旋柠烯毒性极低,虽然对雄性大鼠可致肾小管肿瘤,但对小鼠和雌性大鼠无致癌性,对人类无致癌、致突变和肾毒性。临床上右旋柠烯用于溶解胆结石、缓解胃灼热等。本文综述了其药理毒理及临床应用的研究进展。

右旋柠烯对胃癌细胞粘附和侵袭能力影响的研究

目的观察右旋柠烯对胃癌细胞粘附和侵袭行为的影响。方法用四唑氮蓝比色法检测右旋柠烯对胃癌细胞的抑制作用 ;以纤维粘连蛋白和层粘连蛋白为对象 ,检测右旋柠烯对胃癌细胞与细胞外基质粘附作用的影响 ;利用Transwell小室 ,以Matrigel和纤维粘连蛋白构建重组基底膜 ,检测右旋柠烯对胃癌细胞侵袭人工基底膜能力的影响 ;应用Westen blot法检测右旋柠烯对胃癌细胞条件培养液中基质金属蛋白酶 2 (MMP 2 )和组织金属蛋白酶抑制剂 2 (TIMP 2 )蛋白表达的影响。结果右旋柠烯对胃癌细胞的生长具有显著的抑制作用 ,并抑制胃癌细胞和细胞外基质的粘附及对重组基底膜的侵袭。右旋柠烯 (0 2 5mmol/L)作用后胃癌细胞培养液上清中TIMP 2表达升高(2 9 5± 0 6 ) ,MMP 2表达下降 (2 9± 0 3) ,与对照组比较差异有显著意义 (P <0 0 5 )。结论右旋柠烯对胃癌细胞SGC 790 1具有明显的细胞毒作用 ,并可能通过下调胃癌细胞MMP 2和上调TIMP 2的表达抑制其粘附和侵袭。

右旋柠烯对乳腺癌淋巴管生成和淋巴结转移影响的实验研究

目的观察右旋柠烯对人乳腺癌淋巴管生成和淋巴结转移的影响,探讨其抗肿瘤转移机制。方法24只裸鼠乳腺原位种植人乳腺癌细胞株MDA-MB-435,建立乳腺癌模型,分成模型对照组、右旋柠烯组和5-氟尿嘧啶(5-FU)组。检测肿瘤体积和腋窝淋巴结转移率,免疫组化法检测乳腺癌组织微淋巴管密度(LMVD)和血管内皮生长因子C(VEGF-C)。结果右旋柠烯组肿瘤体积(0·824±0·31)明显减小,腋窝淋巴结转移率(25·0%)明显减低,与模型对照组(2·178±0·35、87·5%)比较,差异有统计学意义(均P<0·01),与5-FU组(0·758±0·29、50%)比较,差异无统计学意义(均P>0·05);右旋柠烯组LMVD(13·80±5·91)明显降低,VEGF-C表达(3·54±0·68)下调,与模型对照组(28·59±7·21、5·40±0·89)和5-FU组(25·28±5·35、5·21±0·78)比较,差异有统计学意义(均P<0·01,均P<0·05)。结论右旋柠烯可能通过影响VEGF-C诱导的淋巴管生成抑制乳腺癌淋巴结转移。