叶下珠提取物抗乙肝病毒及乙肝病毒X基因的研究

目的:研究叶下珠提取物在体外抗HBV以及抑制HBX表达的作用。方法:选用2.2.15细胞以及建立HepG2X、HepG2X-H IV-1-LTR-luc iferase细胞系,用不同浓度的叶下珠药液进行细胞培养试验。确定药液对试验细胞的药物最大无毒浓度(TC0)以及半数药物有效浓度(IC50)。实验时,将细胞分空白对照组、HepG2CAT-H IV-1-LTR-lu-c iferase细胞对照组,以及不同药物浓度的试验组(15mg/m l,7.5mg/m l,3.75mg/m l),并以β-action作为内参照。用real tim e-PCR、RT-PCR,以及抑制荧光素酶(luc iferase)等方法,定量检测HBV DNA含量以及HBX表达量。结果:叶下珠提取物最大无毒剂量是15mg/m l,对HepG2.2.15细胞HBV DNA和HepG2-X细胞HBX半数有效量皆为3.75mg/m l(P<0.05),而7.5mg/m l、15mg/m l剂量与空白对照组相比较,分别为P<0.01,P<0.001。对HBX的抑制荧光素酶试验,叶下珠对细胞对照组及空白对照组抑制不明显,而高剂量用药组(15mg/m l),用药72小时与24小时比较,抑制率上升了10倍。结论:叶下珠不仅对全基因的HBV有抑制作用,还可能直接对X基因表达有抑制作用。

叶下珠水提物对HBx致肝癌细胞miRNA-21和miRNA-145异常表达的影响

目的:探讨HBx基因(简称HBx)对人肝癌Hep G2细胞mi RNA(亦称mi R或mincro RNA)-21、mi R-145表达的影响,以及叶下珠水提物对HBx和mi R-21、mi R-145异常表达的影响。方法:体外培养HBx阴性的Hep G2-CAT及稳定表达HBx的Hep G2-HBx细胞,实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测mi R-21、mi R-145表达的变化;分别以不同浓度叶下珠水提物(15mg/ml、7.5 mg/ml、3.75 mg/ml、0 mg/ml)处理96h后,RT-PCR检测Hep G2-HBx细胞中HBx的表达变化,以及Hep G2-CAT和Hep G2-HBx细胞中mi R-21、mi R-145的表达变化。结果:叶下珠能浓度依赖性地抑制HBx的表达(<0.05或0.01),HBx蛋白可显著上调mi R-21表达及下调mi R-145的表达水平(<0.01)。叶下珠水提物明显下调Hep G2-HBx细胞中mi R-21表达水平,且随着药物浓度的增加抑制作用显著增强(<0.01);中浓度叶下珠水提物促进Hep G2-HBx细胞中mi R-145表达(<0.01),高浓度叶下珠水提物明显提高Hep G2细胞中mi R-145的表达(<0.01)。结论:抑制HBx进而下调mi R-21及上调mi R-145表达,或直接上调mi R-145表达可能是叶下珠抗肝癌的作用机制之一。

人重组干扰素α和叶下珠提取物对人肝癌细胞株PLC/PRF/5产生HBsAg的影响

通过观察人重组干扰素α和苦味叶下珠提取物对人肝癌细胞PLC/PRF/5产HBsA生g的影响,实验结果表明α干扰素主要是影响了宿主细胞对HBsAg的合成而抑制PLC/PRF/5细胞产生HBsAg。不同浓度的苦味叶下珠提取物对PLC/PRF/5细胞产生HBsAg有不同影响,较大剂量的苦味叶下珠提取物有较明显的抑制作用,其机理与使PLC/PRF/5细胞株分泌HBsAg减少和HBsAg的合成受抑制有关,但尚不能排除其与HBsAg特异性结合的可能。