紫薇叶片DNA的提取及AFLP反应体系的建立

以紫薇叶片为材料,利用改进的酚—氯仿法,提取到了高质量的紫薇叶片DNA,并建立了20个紫薇品种和南紫薇的AFLP银染反应体系,首次在紫薇DNA提取、酶切连接、预扩增、选择性扩增等实验过程取得了成功,得到了清晰的紫薇品种的AFLP指纹图谱,为紫薇基因库的建立、优良品种选育以及亲缘关系的系列研究奠定了理论基础.

猕猴桃干叶片DNA的提取及叶绿体基因PCR-RFLP反应

采用CTAB法从猕猴桃干叶片提取总DNA ,运用PCR技术扩增出rbcL和psbA两个叶绿体基因片段 ,分别用两种限制性内切酶对它们进行酶切分析。实验结果表明 :当CTAB提取液体积数为 75 0 μl,猕猴桃叶片质量为 10mg时 ,所得到的猕猴桃DNA的质量较为理想 ;DNA模板量为 2 5 0ng时 ,扩增到的特异性条带明亮、无拖尾 ;2个基因的酶切结果共得到 2 5个限制性位点 ,其中 2 4个具有多态性 。

叶片DNA对玉米丝黑穗病研究的可靠性

提取发病植株叶片及茎髓组织DNA,用玉米丝黑穗病菌特异引物进行PCR检测,验证叶片DNA对玉米丝黑穗病研究的可靠性。结果发现,提取叶片DNA研究玉米丝黑穗病的可靠性远低于茎髓组织DNA。

板栗叶片DNA的提取及AFLP反应体系的建立

以初展开的板栗嫩叶为材料,利用改进的CTAB法,提取到高质量的板栗叶片总DNA。通过优化酶切连接、预扩增、选择性扩增等试验条件,建立了板栗AFLP银染反应体系,得到了清晰的板栗AFLP指纹图谱。为板栗品种的分子标记和板栗品种间亲缘关系等研究奠定了基础。研究结果表明:①DNA模板的质量影响酶切以及后续的连接扩增反应。以初展开的嫩叶提取的板栗叶片总DNA纯度最高,所含蛋白质、小分子杂质少,改良的CTAB提取法可用于板栗AFLP分析,形成清晰的AFLP指纹。②先进行酶切后再进行酶连的反应体系比酶切酶连一起进行的体系效果更好。板栗基因组DNA最佳酶切反应体系为:模板DNA总量500ng,反应体积为25μl,10×Y+/TanqoTMBuffer2.5μl,BSA0.8μl,EcoRI5U,MseI5U。连接反应体系中T4DNA连接酶浓度2U即达最佳效果。酶切、酶连反应最佳温度均为37℃。③以板栗为材料进行AFLP标记时,E AAC+M CAA、E AAC+M CAT和E AGT+M CAT三个引物均获得较好的多态性。其中以E AGT+M CAT引物组合的扩增条带信号强度一致性好,条带分布均匀,能够得到稳定、清晰、分辨率较高的指纹谱带,可进行中国板栗的遗传变异分析。

花生DNA提取方法比较

目的:旨在筛选优化花生DNA提取方法。方法:采用SDS法、改进SDS法;CTAB法、改进CTAB法四种方法对花生叶DNA进行提取,并从电泳结果、纯度、得率、等方面对其进行比较研究,从而确定花生DNA提取适用流程;结果:CTAB法DNA平均得率为55.0μg/g.Fw,略小于SDS的60.3,但其A260/A280平均值为1.81,比SDS的1.55更接近标准要求。结论:综合考虑CTAB法是提取花生DNA的最佳方法,可提取到较高质量的DNA,符合分子检测要求;虽然改良CTAB法也相对好于SDS法,但由于步骤增加反而加剧DNA降解。

石榴DNA提取方法的比较及抗氧化剂对DNA质量的影响

比较了SDS-CTAB微量提取法和改进的SDS微量提取法提取的石榴叶片DNA质量,结果认为两种方法提取的DNA均可用于RAPD分析,但SDS微量提取法较适合于石榴叶片DNA的提取。试验中还研究了抗氧化剂PVP,α-巯基乙醇和抗坏血酸3种试剂单独使用及PVP与α-巯基乙醇混合使用对SDS-CTAB微量提取法的影响,发现与对照相比,单独加抗坏血酸及PVP与α-巯基乙醇混合使用能很好地防止DNA在提取过程中的褐化。

桉树ISSR-PCR反应体系的建立及优化

模板DNA、引物、dNTPs、Mg2+的浓度,Taq DNA聚合酶的用量以及退火温度是影响简单序列重复区间扩增(ISSR-PCR)结果的主要因素.以桉树叶片基因组DNA为试材,系统地测试了这6个因素对桉树ISSR反应结果的影响.结果表明:最优化的反应体系即20μL反应体系中,含20 ng模板DNA、0.4μmol.L-1随机引物、0.15 mmol.L-1dNTPs、2.0 mmol.L-1Mg2+、1.25 U TaqDNA聚合酶.最佳退火温度为55℃;PCR反应程序为94℃预变性5 min;94℃变性45 s,55℃退火45 s,72℃延伸1.5 min,35个循环;72℃再延伸7 min.

鹅掌楸ISSR-PCR反应体系的建立及优化

为建立鹅掌楸简单序列重复区间扩增ISSR的PCR优化反应体系,以鹅掌楸叶片基因组DNA为材料,系统地测试了模板DNA、引物、dNTPs、Mg2+浓度、TaqDNA聚合酶用量及退火温度对ISSR-PCR反应体系的影响。结果表明:优化的PCR反应体系为:20μL总体系中,含30 ng模板DNA,0.3μmol.L-1随机引物,0.2 mmol.L-1dNTPs,1.4 mmol.L-1Mg2+,0.8 UTaqDNA聚合酶;最佳退火温度为60℃;PCR反应程序为:94℃预变性5 min;94℃变性1 min,60℃退火45 s,72℃延伸2 min;45个循环;72℃再延伸7 min。

桂花SCoT标记体系的建立及其在遗传多样性分析中的应用

以‘籽银桂’桂花叶片DNA为材料，以2×EsTaq MasterMix预混液为基本体系，针对影响SCoT—PCR反应的退火温度、模板DNA用量、引物浓度等因素进行优化，