两种缘毛类纤毛虫胞质Hsp70基因序列的克隆及其系统发育分析

克隆得到 2种缘毛类纤毛虫———钟形钟虫 (Vorticellacampanula)和螅状独缩虫 (Carchesiumpolyp inum)的胞质Hsp70基因部分序列 ,长度均为 4 38bp ,编码 14 6个氨基酸。以细菌为外类群 ,利用最大似然法和邻接法构建包括其他 5种纤毛虫在内的共 2 6个物种的Hsp70基因氨基酸序列系统发育树 ,其拓扑结构显示 :V campanula和C polypinum聚在一起 ,并与另 2种寡膜纲的嗜热四膜虫 (Tetrahymenathermophila)及草履虫(Parameciumtetraurelia)聚为姊妹枝 ,提示了缘毛类纤毛虫为单系 ,且隶属于寡膜纲的系统发育地位。

黄瓜CSHSP70基因内含子结构分析

【目的】探明黄瓜CSHSP70基因的内含子数目及其结构特点。【方法】根据黄瓜CSHSP70基因cDNA序列设计引物,应用PCR技术从gDNA中克隆CSHSP70基因,采用RT-PCR技术验证内含子的存在。【结果】经测序与拼接,得到长度为4056bp的黄瓜CSHSP70基因,它包含7个内含子。经分析发现这些内含子富含A·T,具有类似启动子和HSE核心结构的序列存在。对黄瓜、甜瓜和丝瓜CSHSP70基因部分序列的比较分析表明,该基因在这3个葫芦科作物中具有很强的保守性。【结论】内含子存在的特殊结构表明其可能对该基因表达具有调控作用。

夏季高温条件下饲粮中添加刺梨提取物对皖西白鹅生长性能、脂质代谢及肝脏中热休克蛋白70基因表达的影响

本试验旨在研究夏季高温条件下饲粮中添加刺梨提取物对皖西白鹅生长性能、脂质代谢及肝脏中热应激蛋白70(HSP70)基因表达的影响。挑选28日龄、体重相近的健康皖西白鹅150只,随机分成3组,即对照组、试验1组和试验2组,每组5个重复,每个重复10只鹅。对照组试验鹅饲喂基础饲粮,试验1组和试验2组试验鹅分别饲喂在基础饲粮中添加100和200 mL/kg刺梨提取物的试验饲粮。预试期7 d,正试期14 d,试验期间最高气温37℃,最低气温24℃,日平均气温31.6℃。饲喂2周后,每个重复挑选1只鹅屠宰,采集血样,并分离出肝脏,测定血清脂质代谢指标和肝脏中HSP70基因的相对表达量。结果表明:饲粮中添加刺梨提取物对皖西白鹅的平均日采食量和平均日增重均无显著影响(P>0.05),但添加200 mL/kg刺梨提取物可显著降低料重比(P<0.05);饲粮中添加100和200 mL/kg刺梨提取物均可显著提高血清高密度脂蛋白含量(P<0.05),但对血清总胆固醇和甘油三酯含量无显著影响(P>0.05);与对照组相比,试验1组和试验2组肝脏中HSP70基因的相对表达量均极显著提高(P<0.01),同时试验1组肝脏中HSP70基因的相对表达量还极显著高于试验2组(P<0.01)。由此得出,在夏季高温条件下,在皖西白鹅饲粮中添加刺梨提取物可提高饲料转化率、调节脂质代谢、上调肝脏中HSP70基因的表达,具有较明显的抗应激效果,且添加量为100 mL/kg时的抗应激效果优于添加量为200 mL/kg时。

SOD、VitC对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑组织HSP70基因表达的影响

目的 探讨超氧化物歧化酶 (SOD)、维生素 C(Vit C)对脑缺血再灌注损伤保护作用及其机制。方法 参照 Zea longa线栓法略加改进建立大鼠局灶脑缺血再灌注模型 ,根据实验需要分为 4组 ,应用免疫组织化学法 ,以生理盐水 (NS)为对照 ,观察 SOD、Vit C对热休克蛋白 70 (HSP70 )基因表达的影响。结果 与对照组相比 ,SOD(80 0 U / 10 0 g)能显著上调大脑皮质、皮质下白质、海马区 HSP70基因的表达 (χ2 检验 ,P<0 .0 5、P<0 .0 1) ,Vit C(2 0 m g/ 10 0 g)不能上调同一区域 HSP70基因的表达 (χ2 检验 ,P >0 .0 5 )。结论 SOD促进缺血再灌注脑组织HSP70基因的表达 ,是 SOD脑保护作用的分子机制之一 ;Vit C不能促进 HSP70基因的表达 ,其脑保护作用与SOD有所不同。 SOD促进 HSP70的表达不是依赖其清除自由基的作用而是存在另一机制。

HSP_(70)在早期妊娠大鼠子宫中的表达及己烯雌酚的诱导作用

目的探讨在早期妊娠大鼠子宫中热休克蛋白70(hearshockprotelns,HSP70)的表达变化以及己烯雌酚(dithylstilbestrol,DES)对子宫HSP70表达的诱导作用。方法采用免疫组织化学和图像分析技术研究正常大鼠未孕及已孕的子宫。结果①孕鼠子宫HSP70的阳性表达较未孕鼠明显增强,差异有显著性(P<0.01);②小剂量(1.25滋g/50g)大剂量(5滋g/50g)DES均可诱导大鼠子宫HSP70免疫反应阳性细胞数量显著增加(P<0.01)。结论热休克蛋白70在早期妊娠大鼠子宫内膜固有层的基质细胞及蜕膜内蜕膜细胞的表达明显增高,DES对子宫HSP70。表达具有明显诱导作用。

NSCLC组织中MMP-9、bcl-2及HSP90α表达及其临床意义

【目的】探讨非小细胞肺癌（NSCLC）组织中基质金属蛋白酶．9（MMP-9）、B淋巴细胞瘤_2基因（bcl-2）、热休克蛋白90α（HsP90d）的蛋白及其mRNA的表达情况及临床意义。【方法】收集62例NSCLC患者的病理组织标本作为观察组，并取其中30例患者癌旁正常肺组织（距肿瘤边缘〉3cm）作为对照组，测定两组MMP-9、bcl-2、HSP90仅蛋白及其mRNA表达水平及与临床病理特征的相关性。【结果】①观察组MMP。9mRNA、bcl-2mRNA、HSP90α mRNA蛋白表达水平及阳性率均高于对照组（P〈0．05）；②不同TNM分期、伴或不伴淋巴结转移NSCLC患者组织MMP-9、HSP90ct蛋白阳性率比较差异有显著性（P〈0．05），不同组织类型NSCLC患者组织bcl-2蛋白阳性率比较差异有显著性（P〈0．05）。【结论】NSCLC组织中MMP-9、bcl-2、HSP900t蛋白阳性率均高于癌旁正常组织，MMP-9、bcl-2表达与TNM分期及淋巴结转移有关，bcl-2蛋白表达与NSCLC组织学类型有关。

热休克蛋白70在脑梗死发病中作用的研究进展

随着生活水平的提高和老龄化进程的加剧，脑血管疾病已成为目前人类疾病的三大死亡原因之一。据流行病学研究结果统计，我国每年新发脑卒中患者〉200万，每年死于脑卒中约150万，生存的脑卒中患者目前达700万。其中，脑梗死占脑血管病的60％～80％［1］。它是指由于脑部血液供应障碍，缺血。

热休克蛋白90α在人类肝癌细胞外的表达及其对侵袭、迁移能力的影响

目的探讨细胞外热休克蛋白90α（HSP90α参与肝癌细胞转移的可能分子机制。方法采用免疫印迹法检测HSP90α在低、高转移性肝癌MHCC97-L和MHCC97-H细胞外的表达。选取高转移潜能MHCC97-H细胞，应用不穿透细胞膜的小分子抑制剂抑制细胞外HSP90α表达，体外侵袭实验观察细胞侵袭、迁移能力的变化，明胶酶谱法分析基质金属蛋白酶2（MMP-2）活性的改变。免疫印迹和免疫共沉淀法检测细胞外辅助分子伴侣HSP70和MMP-2的表达及其与HSP90d的相互作用。利用RNA干扰技术下调细胞HSP70表达，观察细胞外HSP90仅与MMP-2相互作用及其细胞转移潜能的变化。结果HSP90d在不同转移潜能肝癌细胞内外均表达，且与肝癌细胞转移潜能呈正相关。MHCC97-H细胞经特异性HSP90抑制剂二甲氨基乙氨基-17-去甲氧基格尔德霉素-N-氧化物（DMAG—N—oxide）作用24h后，穿过上室基底膜的细胞数较未处理组和空白对照组明显下降（P〈0．01），分别为（28．11±3．56）、（80．12±4．16）、（82．24±4．12）个。体外侵袭实验显示，穿过Matrigel人工基底膜的细胞数低于未处理组和空白对照组，分别为（36．54±4．12）、（95．12±3．48）、（101．11±3．36）个，差异有统计学意义（P=0．017），并伴有细胞外MMP-2活性减低。HSP70和MMP-2均可在MHCC97-H细胞外表达，且能与HSP90α相互结合。小分子干扰RNA（siRNA）能有效抑制细胞HSP70表达，MHCC97-H细胞外HSP90d和MMP-2相互作用减弱，MMP-2活性下降，细胞侵袭、迁移能力受抑制。同时联合应用MMP-2抑制剂，具有协同抑制效应。结论细胞外HSP90饯可能通过与HSP70形成伴侣复合体介导MMP-2成熟活化，增强肝癌细胞侵袭、迁移运动，提示其可能是潜在的对肝癌转移实施防治的靶点。