急性淋巴细胞白血病患儿叶酰多聚谷氨酸合成酶和γ-谷氨酰水解酶基因表达与大剂量甲氨蝶呤疗效相关性

目的研究叶酰多聚谷氨酸合成酶(FPGS)、γ-谷氨酰水解酶(GGH)基因表达水平在急性淋巴细胞白血病(ALL)患儿和正常儿童中是否存在差异,并分析不同基因表达水平与大剂量甲氨蝶呤(MTX)疗效、毒副作用及预后的相关性。方法以深圳市儿童医院(我院)血液科收治的ALL初诊且接受大剂量MTX化疗患儿为ALL组,以非造血系统恶性疾病儿童为对照组;采用SYBR Green荧光定量RT-PCR检测ALL组骨髓和对照组外周血中FPGS与GGH基因相对表达水平,比较ALL组和对照组FPGS与GGH基因表达水平差异。进一步按照ALL组FPGS、GGH基因表达水平的中位数分为相应的高表达亚组和低表达亚组,分析FPGS、GGH不同表达亚组MTX疗效、毒副作用及预后的差异。结果 2003年1月至2013年12月61例ALL患儿进入分析,男39例,女22例,平均年龄4.6岁;对照组纳入30例,男19例,女11例,平均年龄4.2岁。ALL组FPGS、GGH基因相对表达水平及其比值中位数(P25~P75)分别为14.14(6.52~27.31)、9.34(4.97~14.22)和1.74(0.76~2.91),对照组分别为0.59(0.3~1.23)、3.00(0.94~5.26)和0.26(0.13~1.00),差异均有统计学意义(P均<0.01)。FPGS高表达和低表达亚组复发率分别为3.7%(1/27)和23.3%(7/30),差异有统计学意义(P<0.05)。FPGS基因表达水平升高增加发生中性粒细胞减少的风险(OR=4.17,95%CI:1.65~10.52,P=0.003)。GGH基因高表达水平增加肝毒性的风险(OR=5.61,95%CI:1.14~27.47,P=0.033)。未观察到FPGS/GGH比值对MTX疗效及毒副作用的影响。结论 ALL患儿FPGS、GGH基因表达水平及其比值高于正常儿童;FPGS基因表达水平对ALL患儿大剂量MTX疗效及毒副作用有一定的影响。

甲氨蝶呤注射液所致药物不良反应与叶酰多聚谷氨酸合成酶和γ-谷氨酰水解酶基因多态性的相关性

目的考察叶酰多聚谷氨酸合成酶(FPGS)rsl544105和γ-谷氨酰水解酶(GGH)rs3758149基因多态性与甲氨蝶呤(MTX)治疗非霍奇金淋巴瘤(NHL)所致药物不良反应的相关性。方法收集81例使用大剂量MTX化疗的NHL患者血样,用直接测序法检测FPGS rsl544105和GGH rs3758149基因多态性。用美国国立癌症中心通用药物不良反应术语标准统一评价MTX化疗后的药物不良反应。用SPPS软件分析FPGS rsl544105和GGH rs3758149基因多态性与MTX药物不良反应的相关性。结果 FPGS rsl544105位点GG、GA和AA基因的分布频率分别为6.17%,39.51%和54.32%,G和A等位基因的分布频率为25.93%和74.07%。GGH rs3758149位点CC、CT和TT基因的分布频率分别为65.43%,33.33%和1.23%,C和T等位基因的分布频率为82.10%和17.90%。FPGS rs1544105野生型(GG)和突变型(GA+AA)患者发生2级以上骨髓毒性和肝毒性的比例之间差异无统计学意义(P>0.05)。GGH rs3758149野生型(CC)和突变型(CT+TT)患者发生2级以上中性粒细胞减少的比例分别为35.85%和10.71%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 FPGS rsl544105可能与NHL患者MTX化疗后2级以上骨髓毒性和肝毒性发生率无相关性;而GGH rs3758149基因多态性与NHL患者MTX化疗后2级以上中性粒细胞减少发生率存在相关性。

叶酰多聚谷氨酸合成酶基因一个新的错义突变的发现

目的研究叶酰多聚谷氨酸合成酶(FPGS)基因编码区突变及多态性在中国汉族急性白血病(AL)患儿与健康儿童中的频率分布特征,为探讨FPGS基因多态性与肿瘤化疗个体化用药之间的关系提供理论依据。方法采用PCR-DGGE结合DNA直接测序的方法对91例AL患儿和124例上呼吸道感染儿童(对照组)的FPGS基因第5号外显子的突变及多态性情况进行分析,计算等位基因频率和基因型频率并分析其差异性。结果在对照组儿童FPGS编码区中发现了一个国内外未见报道的错义突变502/490 T>C(L151/101P),分别在FPGS线粒体型和胞浆型中发现了新突变2例和3例,并鉴定了其等位基因频率为0.70%(胞浆型)和0.47%(线粒体型)。这个新的错义突变与儿童AL无明显的相关性。结论首次在中国汉族儿童中发现FPGS外显子5的一个新的错义突变502/490 T>C(L151/101P),其在中国汉族儿童中的等位基因频率为0.70%(胞浆型)和0.47%(线粒体型)。

叶酰多聚谷氨酸合成酶与肿瘤耐药

叶酰多聚谷氨酸合成酶(folyl-polyglutamate synthetase,FPGS)是近几年来研究比较多的肿瘤耐药靶酶之一。随着人们对其在基因组学和蛋白组学研究的逐渐深入,涉及FPGS(分胞浆型cFPGS和线粒体型mFPGS两种异构体)与肿瘤耐药的研究也越来越多。本文就FPGS结构、功能、生化特点及其与肿瘤耐药关系作一综述,并探讨其在临床的应用前景和意义。

叶酰多聚谷氨酸合成酶与甲氨蝶呤敏感性的关系

叶酰多聚谷氨酸合成酶（folypolyglutamatesynthetase，FPGS）作为甲氨蝶呤（methotrexate，MTX）类抗肿瘤药物细胞内代谢过程中的关键酶，催化形成活性形式的MTX多聚谷氨酸，其异常是MTX耐药的重要原因之一。近年来研究发现，FPGS表达及活性的降低可使细胞内MTX多聚谷氨酸浓度降低，从而导致MTX耐药。FPGS基因多态性在MTX耐药中也起着重要的作用，但其具体机制尚未完全明了。该文就FPGS酶活性及基因多态性与MTX药物敏感性的关系进行综述。

叶酰多聚谷氨酸合成酶基因多态性对急性白血病患儿大剂量甲氨蝶呤治疗的影响

目的探讨叶酰多聚谷氨酸合成酶(FPGS)基因多态性与急性白血病患儿甲氨蝶呤(MTX)动态血药浓度及预后的相关性。方法对57例急性淋巴细胞白血病患儿和31例对照组儿童,应用聚合酶链-限制性片段长度多态性法分析FPGS-rs1544105位点基因型;高效液相色谱法24、44 h测定甲氨蝶呤血药浓度;比较不同基因型患儿甲氨蝶呤浓度的差异;并随访复发及死亡等情况进行生存分析。结果急性淋巴细胞白血病患儿与健康对照人群的基因型与等位基因分布频率相近,差异无统计学意义;携带AA型患儿24 h甲氨蝶呤浓度明显高于携带GG型和GA型者(P<0.05);各基因型44 h的甲氨蝶呤浓度未见差异;Kaplan-Meier生存分析结果显示,FPGS-rs1544105 AA基因型中位生存时间高于其他基因型,总体生存率存在统计学差异(P<0.05)。结论 FPGS rs1544105基因多态性可能可以做为甲氨蝶呤药物治疗疗效预测的有效生物学手段。

过表达叶酰聚谷氨酸合成酶对低氮胁迫下叶酸突变体的影响

为了解低氮胁迫下质体定位的叶酰聚谷氨酸合成酶（DFB）对同工酶（DFC）功能缺失作用,通过在拟南芥dfc突变体中过表达DFB,分析低氮条件下过表达DFB拟南芥的主根长度、相关基因转录水平及叶酸含量的变化。结果显示：在低氮环境和dfc背景下,过表达DFB的拟南芥主根长恢复至野生型拟南芥的65%～131%,叶酸和氮代谢相关基因的RT-PCR电泳条带亮度与野生型拟南芥相似,5-甲酰四氢叶酸含量增加至野生型拟南芥的90%～116%。表明,在低氮胁迫条件下DFB在一定程度上能对DFC的缺失起到弥补作用。

桑树叶酰聚谷氨酸合成酶基因的克隆及表达分析

对桑树叶酰聚谷氨酸合成酶(folylpolyglutamate synthetase,FPGS)基因进行克隆,获得2个桑树FPGS基因(分别命名为MaFPGS1和MaFPGS2),其编码区分别编码543、558个氨基酸,推导蛋白质分子质量分别为60.3和61.8 kD,pI值分别为5.73和6.02。MaFPGS1与MaFPGS2的氨基酸序列相似度约为49.80%,MaFPGS1与川桑同源蛋白FPGS(XP_010108389.1)的序列相似度为97.60%,MaFPGS2与川桑同源蛋白FPGSiX4(XP_024025432.1)的序列相似度为91.79%。MaFPGS1和MaFPGS2各自聚在1个分支,二者与枣(Ziziphus jujuba)的FPGS亲缘关系都最近。MaFPGS1和MaFPGS2在桑树嫩叶中的表达量最高,根中表达量最低。在桑树种子萌发过程中,MaFPGS1的表达量比MaFPGS2更高,且在吸水后10 d子叶完全展开时达到最高。在桑树离体再生根系中,MaFPGS2的表达量比MaFPGS2更高,且在诱导7 d后表达就明显上调,而MaFPGS1的表达在诱导15 d后才显著上调,推测MaFPGS可能参与根系形成。桑树再生植株受到轻度低氮胁迫时,MaFPGS的表达量显著增加。研究结果为进一步解析MaFPGS基因的功能奠定了基础。

叶酰聚谷氨酸合成酶基因在甲氨蝶呤对映体获得性耐药A549细胞株中的表达差异

目的研究不同甲氨蝶呤（MTX）对映体耐药与叶酰聚谷氨酸合成酶（FPGS）基因水平表达的关系。方法用大剂量冲击递增结合低剂量持续诱导法诱导获得两组含不同构型15～55μmoL／L浓度的MTX对映体[L-（＋）-MTX和D-（-）-MTX]耐药的细胞系，细胞为人源非小细胞性肺癌A549细胞，用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测各细胞系的耐药指数；用实时荧光定量聚合酶链反应（RFQ—PCR）方法检测这两组各细胞系中胞质型FPGS（cFPGS）和线粒体型FPGS（mFPGS）基因的相对含量。结果D-（-）-MTX耐药细胞组耐药指数高于L-（＋）-MTX耐药细胞组（32．7±9．3比11．54-2．9，P〈0．05），L-（＋）-MTX／A549细胞系耐药指数均在5～15之间，为中度耐药，而D-（-）-MTX／A549细胞系耐药指数均〉15，为高度耐药。在D-（-）-MTX和L-（＋）-MTX两组耐药细胞系中，mFPGS表达水平仅在MTX为15μmol／L时差异无统计学意义，在MTX其他各浓度点两组间差异均有统计学意义（25μmol／L：2．3±0．9比1．3±0．7，35μmoL／L：2．6±0．3比1．1±0．9，45μmol／L：1．4±0．8比1．0±1．0，55μmoL／L；1．0±0．2比0．2±0．1均P〈0．05）；cFPGS表达水平在MTX为15μmol／L时两组间差异也同样无统计学意义，在25～55μmol／L浓度区间内D-（-）-MTX／A549细胞系的cFPGS表达与耐药指数呈现高度负相关（r=-0．95，P〈0．05）。结论在A549细胞中MTX对映体初次剂量15μmol／L冲击法诱导获得的对映体耐药与再次接受更大剂量（t〉25μmol／L）MTX诱导获得耐药的机制不同，D-（-）-MTX／A549耐药细胞系表现为更高的耐药性，提示临床使用MTX时应考虑该药物存在手性对映体问题。

MTHFD1及FPGS和GGH基因多态性对大剂量甲氨蝶呤中枢疗效的影响

目的探讨亚甲基四氢叶酸脱氢酶(MTHFD1)、叶酰多聚谷氨酸合成酶(FPGS)和γ-谷氨酰水解酶(GGH)的基因多态性与大剂量甲氨蝶呤(HD-MTX)对非霍奇金淋巴瘤(NHL)患者中枢治疗效果之间的相关性。方法接受HD-MTX化疗的原发中枢或中枢转移的NHL患者共71例,用Sequenom MassARRAY时间飞行质谱检测MTHFD1、FPGS和GGH的基因型分布情况,根据卢加诺缓解标准评价用药后的中枢治疗效果,用SPSS 22.0版软件分析MTHFD1、FPGS和GGH基因型对疗效的影响。结果MTHFD1 rs2236225基因分型与疗效之间有显著相关性(P=0.011),FPGS rs10106和GGH rs1800909基因多态性对疗效无影响(P>0.05);纳入年龄、性别、疾病分期、MTX剂量等因素进行多元回归分析后,MTHFD1 rs2236225基因分型与疗效仍有显著相关性(P=0.023)。结论MTHFD1的基因多态性可能影响MTX的中枢治疗效果,需要进一步扩大样本确定;未观察到FPGS、GGH基因多态性与MTX疗效之间有明显的相关性。

风湿性疾病患者MDR1、RFC1、GGH、FPGS和MTHFR基因型研究

目的研究中国风湿性疾病患者群中MDR1 C3435T、RFC1 G80A、GGH C-401T、FPGS(rs1544105)G>A、MTHFR C677T和MTHFR A1298C基因型的分布,并与北京汉族健康人群及其他种族的基因频率进行比较,明确种族差异。方法用PCRRFLP的方法检测分析MDR1 3435、RFC1 80、GGH-401、FPGS(rs 1544105)、MTHFR 677和MTHFR 1298五个基因6个位点在中国风湿患者群中的分布情况,并验证是否符合Hardy-Weinberg平衡,同时和北京健康汉族人群及其他种族基因突变频率与等位基因频率的分布进行比较。结果 6个位点等位基因频率如下:MDR1 3435C 64%,MDR1 3435T 36%;RFC1 80G 51%,RFC180A 49%;GGH-401C 81%,GGH-401T 19%;FPGS(rs1544105)G 26%,FPGS(rs1544105)A 74%;MTHFR 677C 73%,MTHFR677T 27%;MTHFR 1298A 79%,MTHFR 1298C 21%。各个基因型频率都符合Hardy-Weinberg平衡。结论除了MTHFR 677的突变频率较低外,本研究风湿患者群中的各基因频率与已报道的北京健康志愿者基因频率相似。各基因频率与其他种族间存在种族差异。