叶酸偶联白蛋白纳米粒肿瘤细胞靶向性研究

目的 研究能通过叶酸受体介导靶向肿瘤细胞的叶酸偶联白蛋白纳米粒。方法 利用叶酸活性酯在碱性条件下与白蛋白纳米粒表面上的氨基反应 ,制得叶酸偶联的白蛋白纳米粒。以荧光定量法确定浓度、时间、游离叶酸对肿瘤细胞摄取叶酸偶联白蛋白纳米粒的影响程度。结果 成功制备了叶酸偶联白蛋白纳米粒。叶酸偶联白蛋白纳米粒的肿瘤细胞摄取量随纳米粒浓度增大、培养时间延长而增加 ,肿瘤细胞对叶酸偶联白蛋白纳米粒的摄取可被过量的外源性游离叶酸所抑制。结论 叶酸偶联白蛋白纳米粒能通过细胞膜上的叶酸受体介导内吞入胞 。

叶酸偶联白蛋白纳米粒的制备工艺研究

采用去溶剂化法制备普通白蛋白纳米粒 ,利用叶酸活性酯在微碱性条件下与白蛋白纳米粒表面的氨基反应 ,制得叶酸偶联白蛋白纳米粒。采用葡聚糖凝胶柱色谱法及紫外分光光度法验证偶联是否成功 ,并测定叶酸偶联的程度。通过葡聚糖凝胶柱色谱法可以清楚地看到叶酸偶联白蛋白纳米粒与未反应的叶酸活性酯完全分离 ,叶酸偶联白蛋白纳米粒与叶酸白蛋白机械混合物的胰蛋白酶水解液在 35 8nm处的紫外吸收图谱基本一致 ,说明叶酸已经成功地偶联于白蛋白纳米粒的表面。纳米粒形态圆整 ,平均粒径为 6 6 nm。叶酸偶联白蛋白纳米粒制备成功 ,作为叶酸受体表达丰富的多种肿瘤细胞的主动靶向给药的潜在途径 。

量子点在叶酸偶联白蛋白纳米粒靶向肿瘤细胞研究中的应用

目的制备荧光量子点标记的叶酸偶联白蛋白纳米粒,并研究该纳米粒对人结肠癌HT-29细胞的靶向性。方法先通过缩合剂将量子点与白蛋白纳米粒相结合,再利用叶酸活性酯在碱性条件下与白蛋白表面上的氨基反应,制得叶酸修饰的白蛋白/量子点纳米粒,通过量子点荧光标记的方法对结肠癌HT-29肿瘤细胞摄取Folate-HAS/QDs纳米粒进行相关研究。结果成功制备了具有良好粒径分布和荧光性能的Fo-late-HAS/QDs纳米粒,并证实该纳米粒对HT-29细胞有较强的靶向性。结论通过量子点作为荧光标记物,简单直观的证实了叶酸修饰的白蛋白/量子点纳米粒能通过细胞膜上的叶酸受体介导内吞入细胞,可显著靶向于叶酸受体丰富的肿瘤细胞。

浅论叶酸偶联白蛋白纳米粒的制备及其靶向性

目的 :探讨叶酸偶联白蛋白纳米粒(Folate-BSANP)的制备及其靶向性。方法 :利用去溶剂化法制备白蛋白纳米粒(BSANP),再于碱性的环境下利用叶酸活性脂与BSANP表面的氨基反应,制得Folate-BSANP。以荧光定量法测定纳米粒的浓度、粒径、培育的时间、游离叶酸对肿瘤细胞摄取Folate-BSANP的影响程度。结果 :随着纳米粒浓度的增加、粒径的增大,培养时间的延长及肿瘤细胞外游离叶酸含量的减少,肿瘤细胞摄取Folate-BSANP的速率逐渐加快。结论 :Folate-BSANP可通过肿瘤细胞表面的叶酸受体介导进入肿瘤细胞,明显靶向于叶酸受体丰富的肿瘤细胞。

叶酸偶联白蛋白纳米粒的应用研究进展

叶酸偶联白蛋白纳米粒具有主动靶向性和靶向范围广等独特优点,应用前景广阔。笔者收集整理了叶酸偶联白蛋白纳米粒的相关国内外文献,现对其作为靶向药物载体的制备方法、靶向性、载药方式及其应用作一综述。

叶酸偶联米托蒽醌白蛋白纳米粒的制备及体外性质研究

目的研究叶酸偶联米托蒽醌白蛋白纳米粒的制备工艺及体外性质。方法考察了pH值对包封率的影响及包封率与载药量之间的关系。并考察了不同量交联剂对纳米粒释药速度的影响。结果叶酸偶联米托蒽醌白蛋白纳米粒包封率为(96.55±0.96)%,载药量为(9.66±0.10)%。在加入了不同量的固化剂后,可得到释放速度不同的叶酸偶联米托蒽醌白蛋白纳米粒。结论优化了叶酸偶联米托蒽醌白蛋白纳米粒的制备工艺。

叶酸-白蛋白纳米粒偶联荧光素制备工艺的研究

目的研究叶酸-白蛋白纳米粒(叶酸-BSA纳米粒)偶联荧光素的制备工艺。方法制备叶酸-BSA纳米粒偶联物,将所得偶联物物理包合荧光素,通过透析将大部分未包裹的荧光素除去,并用葡聚糖凝胶柱色谱法进一步分离纯化,用紫外分光光度法测定荧光素上载效率。结果通过物理包合可以成功将荧光素包裹到叶酸-BSA纳米粒内,荧光素上载效率为6.4%。结论通过研究叶酸-BSA纳米粒包裹荧光素的制备工艺,可为进一步利用叶酸-BSA纳米粒偶联物包裹近红外荧光染料,对肿瘤体内在位监测奠定了基础。

叶酸受体介导米托蒽醌白蛋白纳米粒的体内分布及药效学研究

目的考察叶酸偶联米托蒽醌白蛋白纳米粒(MTO-BSANP-folate)在荷瘤裸鼠体内分布特征及抑瘤情况。方法以荷SKOV3人卵巢肿瘤细胞裸鼠为模型,考察了MTO-BSANP-folate对荷瘤裸鼠肿瘤生长情况的影响,并与米托蒽醌白蛋白纳米粒(MTO-BSANP)及米托蒽醌溶液(MTO-sol)进行比较。采用HPLC研究静脉给药后各实验组米托蒽醌的体内分布情况。结果尾静脉给予MTO-BSANP-folate的荷瘤裸鼠肿瘤生长最为缓慢,抑瘤率最高。体内分布实验结果表明,MTO-BSANP-folate在肿瘤的分布高于MTO-BSANP及MTO-sol。结论叶酸偶联米托蒽醌白蛋白纳米粒是一种有潜力的抗肿瘤药物的载体,可靶向于高表达叶酸受体的肿瘤。

EGF偶联牛血清白蛋白纳米载体的构建

目的:制备表皮生长因子(Epidermal growth factor,EGF)偶联牛血清白蛋白纳米载体,作为多种高表达表皮生长因子受体(Epidermalgrowthfactorreceptor,EGFR)的肿瘤细胞主动靶向给药的新途径。方法:采用二次超声乳化和溶剂挥发技术制备白蛋白纳米载体,通过化学交联试剂将EGF与白蛋白纳米载体偶联,制得EGF偶联白蛋白纳米载体并进行核素标记,通过葡聚糖凝胶柱及聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)验证偶联效果和EGF偶联的程度。结果:成功制备得到平均粒径为34nm的牛血清白蛋白纳米载体,而且EGF与白蛋白纳米载体偶联率较高,所得的EGF-BSA纳米载体室温稳定性和血清稳定性均较好。结论:成功制备得到体积较小的牛血清白蛋白纳米载体和EGF偶联牛血清白蛋白纳米载体,为进一步探讨其体外肿瘤细胞靶向性及体内分布规律奠定了实验基础。

叶酸受体靶向的人血清白蛋白-叶酸偶联物的制备、标记及生物性能评价

以人血清白蛋白为连接剂和药物载体,制备了人血清白蛋白-叶酸偶联物(HSA-FA),其偶联数n≈3.以SnCl2·H2O作为还原剂,采用直接标记法制备99mTc-HSA-FA标记配合物,其放射化学纯度大于90%.体外细胞结合实验结果表明,99mTc-HSA-FA能被叶酸受体高表达的KB细胞特异性摄取.荷瘤S180小鼠体内生物分布的研究结果表明,与99mTc-HSA相比,99mTc-HSA-FA在小鼠体内的生物分布发生明显变化,其在肿瘤中的放射性浓集明显增加(t=12.03,P<0.05),并表现出较高的摄取[(4.37±1.12)%ID/gat1h]和滞留[(3.40±0.69)%ID/gat4h];经注射过量稳定配体使99mTc-HSA-FA受到抑制后,其在肿瘤和肾中的摄取明显降低(t=24.17和17.87,P<0.05),表明人血清白蛋白-叶酸偶联物对叶酸受体有特异性结合.

叶酸修饰白花丹素人血清白蛋白纳米粒的制备及抗肿瘤活性研究

为提高白花丹素的抗肿瘤活性,本文构建了叶酸修饰的人血清白蛋白纳米粒运输白花丹素。体外活性实验表明,FA-HSA-白花丹素NPs与裸药白花丹素相比,对MCF-7细胞毒性明显增强,活性提高接近2倍,而对人胚肺细胞WI-38的毒性无明显变化。

叶酸-人血白蛋白-索拉非尼纳米粒的制备与体外抗肿瘤活性评价

目的制备叶酸-人血白蛋白-索拉非尼纳米粒(FA-HSA-SRF-NPs),评价其体外抗肝肿瘤活性。方法化学交联法制备FA-HSA-SRF-NPs,采用粒度分析仪和透射电镜对其进行表征,并计算载药量和包封率;共聚焦显微镜观察FITC-FA-HSA在HepG2细胞中的蓄积;高效液相色谱(HPLC)法测定HepG2细胞中索拉非尼含量;噻唑蓝(MTT)法检测该纳米粒对HepG2细胞毒性;流式细胞技术和Western blotting法考察纳米粒对HepG2细胞促凋亡能力。结果FA-HSA-SRF-NPs水合粒径(85.4±3.3)nm,Zeta电位(-22.47±0.90)mV,载药量和包封率分别为(3.83±0.26)%和(91.09±6.14)%,叶酸偶联量(13.97±0.27)μg·mg HSA^(-1),能在HepG2细胞蓄积,对HepG2细胞毒性和促凋亡作用显著优于索拉非尼。结论FA-HSA-SRF-NPs制剂性质良好,体外抗肝肿瘤活性显著优于索拉非尼,具有潜在抗肝癌临床应用价值。

受体介导米托蒽醌白蛋白纳米粒肿瘤细胞靶向性研究

目的研究叶酸偶联米托蒽醌白蛋白纳米粒(MTO-BSANP-FOLATE)的肿瘤细胞靶向性。方法采用去溶剂化法制备白蛋白纳米粒,采用叶酸活性酯在微碱性条件下与白蛋白纳米粒表面的活性氨基偶联制备叶酸偶联白蛋白纳米粒,再将其与米托蒽醌混合,戊二醛固化,制备MTO-BSANP-FOLATE。采用3HTDR掺入法和流式细胞术对其肿瘤细胞靶向性进行评价。结果所制备的MTO-BSANP-FOLATE包封率为(96.55±0.96)%,载药量为(9.66±0.10)%。3HTDR掺入法和流式细胞术结果表明MTO-BSANP-FOLATE组的肿瘤细胞抑制率及凋亡率均高于MTO-BSANP。结论MTO-BSANP-FOLATE可通过肿瘤细胞高表达的叶酸受体靶向于肿瘤细胞。

叶酸介导阿霉素白蛋白纳米粒的制备及细胞学研究

以牛血清白蛋白为载体材料,制备叶酸介导的具有主动抗肿瘤靶向功能的新型高载药量的阿霉素白蛋白纳米粒,并对其进行体外抗肿瘤活性研究.采用去溶剂化法制备白蛋白纳米粒,再利用白蛋白表面上的活性氨基与叶酸活性酯反应得到具有主动靶向叶酸介导的阿霉素白蛋白纳米粒,对其性质进行考察.以市售阿霉素粉针剂为对照,采用MTT法,考察主动靶向制剂对人肝癌细胞HEPG2和人胃癌细胞SGC7901的体外抗肿瘤活性.制备出叶酸介导的载阿霉素白蛋白纳米粒,其粒径大小平均为(137.43±0.67)nm,粒度分布较为均匀.包封率为(89.43±0.67)%,载药量高达(19.03±0.32)%.体外释放实验表明:叶酸介导阿霉素白蛋白纳米粒具有缓释性质,24 h内药物释放率约为26.7%.体外药效学结果显示:FA-BSANPs/DOX和DOX对高表达的人肝癌细胞HEPG2细胞的IC 50值分别为4.98μmol/L和5.13μmol/L,对人胃癌细胞SGC7901的IC 50值分别为4.85μmol/L和5.02μmol/L.以白蛋白为载体、偶联叶酸可制备阿霉素高载药量白蛋白纳米粒,其在体外对HEPG2细胞和SGC7901具有杀伤作用.与盐酸阿霉素粉针剂相比,显示出较强的肿瘤细胞抑制效果.

核素标记叶酸偶联白蛋白纳米微球对人卵巢癌细胞生长的影响

目的观察核素标记叶酸靶向白蛋白纳米微球对人卵巢癌细胞生长的影响。方法将体外培养的SKOV3人卵巢癌细胞分为八组:阴性对照组(只加RPMI-1640培养液),单纯化疗组(叶酸偶联载药白蛋白磁性纳米微球,不加磁场),单纯放疗组[188铼(188 Re)标记的叶酸偶联白蛋白磁性纳米微球,不加磁场],单纯热疗组(叶酸偶联白蛋白磁性纳米微球,加磁场),化疗联合放疗组(188 Re标记的叶酸偶联载药白蛋白磁性纳米微球,不加磁场),化疗联合热疗组(叶酸偶联载药白蛋白磁性纳米微球,加磁场),放疗联合热疗组(188 Re标记的叶酸偶联白蛋白磁性纳米微球,加磁场)和热疗、化疗、放疗联合治疗组(联合治疗组,188 Re标记的叶酸偶联载药白蛋白磁性纳米微球,加磁场)。48h后MTT方法测定各组细胞增殖率,流式细胞术测定细胞凋亡率。结果阴性对照组对卵巢癌细胞增殖的抑制作用弱于其他各组,联合治疗组强于其他各组(P<0.05)。单纯热疗组、化疗联合放疗组、化疗联合热疗组、放疗联合热疗组和联合治疗组中细胞周期G1期前出现明显的亚二倍体凋亡峰;阴性对照组、单纯热疗组、化疗联合放疗组、化疗联合热疗组、放疗联合热疗组和联合治疗组的细胞凋亡率分别为0.08%、7.56%、17.14%、21.64%、33.94%和57.16%。结论磁感应热疗、化疗、核素靶向放疗的联合作用能有效抑制人卵巢癌细胞的生长。

乳铁蛋白-固体脂质纳米粒偶联物用作脑靶向载体的研究

采用乳化-溶剂蒸发法制备了多西他赛（DTX）固体脂质纳米粒（SLN）,再将乳铁蛋白（Lf）通过碳二亚胺法连接到SLN表面。通过动态散射光（DLS）、原子力显微镜（AFM）、傅里叶变换红外光谱（FTIR）和X射线衍射（XRD）法表征并测定体外释药行为。结果表明,所得制品粒径适宜,表面形态（ζ电位和AFM）和表面化学（FTIR）结果证实Lf偶联到了SLN表面。

肿瘤靶向性药物载体叶酸-壳聚糖微球的制备及特性研究

目的探索叶酸偶联壳聚糖(FA-CTS)纳米粒的合成方法及对肿瘤细胞的靶向性。方法利用叶酸活性酯与壳聚糖分子上的氨基反应形成稳定的酰胺键,制备FA-CTS。再利用壳聚糖在偏酸性溶液中带正电荷,在高速磁力搅拌作用下能与阴离子凝集的特性,将紫杉醇(PTX)做模型药物,制备负载PTX叶酸偶联壳聚糖(FA-CTS/PTX)纳米粒。采用荧光标记法和MTT法评价其肿瘤细胞靶向性。结果所制备的FA-CTS/PTX纳米粒,形态均质规则,无粘连,平均粒径282.8nm,包封率75.4%,载药量9.0%。荧光标记法结果表明FA-CTS纳米粒的肿瘤细胞亲和性均高于普通CTS纳米粒。MTT法结果显示FA-CTS/PTX纳米粒组的肿瘤细胞抑制率均高于普通CTS/PTX纳米粒组。结论合成的FA-CTS纳米粒可通过叶酸受体途径特异靶向于叶酸受体丰富的肿瘤细胞。

盐酸小檗碱/叶酸-壳聚糖纳米粒的制备及其对CNE-1细胞的抑制作用

目的制备载盐酸小檗碱(berberine hydrochloride,BH)的叶酸(folic acid,FA)偶联壳聚糖(chitosan,CTS)纳米粒(BH/FA-CTS-NPs),优化制备工艺并考察BH/FA-CTS-NPs的理化特性及其对CNE-1细胞的抑制作用。方法利用FA活性酯与CTS分子上的氨基反应,制得FA偶联CTS(FA-CTS);BH为模型药物,通过离子交联法制备BH/FA-CTS-NPs。考察其形态、粒径、包封率、载药量及体外释放等理化特性;分别通过MTT法、划痕实验和Annexin-V-FITC单染法进行检测,验证BH/FA-CTS-NPs对CNE-1细胞的抑制作用、抗增殖侵袭能力以及诱导凋亡作用。结果透射电镜下观察所得BH/FA-CTS-NPs形态外观圆整,大小均匀,无粘连,平均粒径为(282.4±4.5)nm;包封率为(89.82±2.91)%;载药量为(9.16±1.01)%;5 h内累积释药率为(80.32±3.24)%,随后缓慢释放,24 h内累积释药率为(90.92±5.21)%。CNE-1细胞实验显示,BH/FA-CTS-NPs能够显著抑制CNE-1细胞的生存和增殖能力,诱导细胞CNE-1凋亡,具有剂量和时间依赖性。结论离子交联法成功制备具有体外缓释作用的BH/FA-CTS-NPs,形态圆整,粒径大小均一,对抑制CNE-1细胞增殖及促进凋亡效果好,为开发抗肿瘤给药系统提供了理论依据。

神经胶质瘤归巢肽修饰的PEG-PCL纳米粒的制备

NG2蛋白在神经胶质瘤细胞上过表达,而在正常组织上表达量受限。LTLRWVGLMS（LS10）肽,一种神经胶质瘤归巢肽（glioma homing peptide）,能选择性地与NG2蛋白结合。因此,选择LS10肽作为特异性靶向于神经胶质瘤的功能性配体,通过1-乙基-3-（3-二甲胺基丙基）碳二亚胺盐酸盐/N-羟基硫代琥珀酰亚胺偶联反应连接到聚乙二醇-聚（ε-己内酯）（PEGPCL）纳米粒（NP）表面,并用其负载紫杉醇（PTX）。