叶酸偶联的青霉素G酰化酶对叶酸受体阳性肿瘤细胞的靶向作用

目的研究叶酸偶联的青霉素G酰化酶(F-PGA)对叶酸受体阳性肿瘤细胞的靶向作用。方法用激光共聚焦显微镜观察宫颈癌HeLa、卵巢癌SKOV3和肺癌A549细胞对F-PGA以及游离叶酸(F-A)的摄取,并进一步用同位素示踪法加以验证和定量检测。结果F-PGA与F-A相似,均能被叶酸受体阳性的HeLa和SKOV3肿瘤细胞选择性摄取,且有饱和性、可逆性、温度依赖性和高亲和性的特点,但不能被叶酸受体阴性的A549细胞摄取。结论F-PGA与F-A都是通过叶酸受体介导,从而特异性地靶向于叶酸受体阳性肿瘤细胞的。

HPLC测定叶酸-青霉素G酰化酶对N-苯乙酰化阿霉素的催化活性

目的：利用高效液相色谱法测定叶酸-青霉素G酰化酶（PGA）对N-苯乙酰化阿霉素（DOXP）的催化活性，为叶酸导向的酶催化前体药物的肿瘤治疗（FDEPF）研究奠定理论基础。方法：色谱柱为Diamonsil C18（250mm×4．6mm，5μm）；流动相为乙腈-水，用85％磷酸调节pH至2．4；梯度程序：0.3min为24％乙腈，3～15min为80％乙腈；紫外检测波长：495nm；流速：1mL/min。结果：DOXP和酶解产物阿霉素的tR分别为5．5min和12．3min，原酶PGA和叶酸-PGA偶联酶对DOXP的Km和Vmax分别为15μmol/mL，0．094μmol/（min·mg）和19μmol/mL，0．086μmal/（min·mg）。结论：DOXP为PGA的较好底物，叶酸与PGA偶联对酶的催化活性的影响较小。

叶酸靶向的PGA联合N-苯乙酰化阿霉素的抗肿瘤活性

目的考察叶酸靶向的青霉素酰化酶G(PGA)联合前药N-苯乙酰化阿霉素(DOXP)对叶酸受体阳性肿瘤细胞的活性。方法通过双功能偶联剂EDC将叶酸与PGA偶联,荧光显微镜观察HeLa和SKOV3细胞对叶酸-PGA的摄取,MTT法检测DOXP联合叶酸-PGA对HeLa和SKOV3细胞的毒性。结果叶酸-PGA能被HeLa和SKOV3细胞选择性摄取;DOXP在叶酸-PGA的作用下对HeLa和SKOV3细胞的IC50分别为0.72和0.75μmol.L-1,均低于阿霉素。结论叶酸-PGA的特异性靶向作用提高了阿霉素对HeLa和SKOV3细胞的敏感性。

叶酸受体阳性肿瘤细胞对Folate-PGA偶联酶的特异性结合

目的考察叶酸受体阳性肿瘤细胞对叶酸偶联的青霉素G酰化酶(Folate-PGA)的特异性结合。方法采用Iodo-gen法标记的125I-Folate-PGA测定叶酸受体表达阳性FR(+)HeLa与SKOV3细胞以及叶酸受体表达阴性FR(-)A549细胞于4℃对Folate-PGA偶联酶的结合。结果125I-Folate-PGA对FR(-)A549无特异性结合;与HeLa和SK-OV3细胞的特异性结合的Kd分别为0.11nmol·L-1和0.25nmol·L-1。结论叶酸偶联的PGA酶对FR(+)肿瘤细胞具有较好的亲和力和靶向性,可用于叶酸导向的酶前体药物疗法的进一步研究。

丁酸在亚急性瘤胃酸中毒和动物健康方面作用机制的研究进展

反刍动物饲喂高谷物饲粮易诱发亚急性瘤胃酸中毒(SARA),导致采食量和消化率降低,瘤胃和肠上皮的黏膜屏障受损,肝脏脓肿和炎症反应增加。丁酸作为微生物的发酵产物和上皮细胞的能量来源,影响瘤胃液pH和胃肠道微生物区系,促进上皮生长发育。作为信号分子,丁酸参与多个信号通路,在细胞功能、信号转导、机体免疫等方面发挥作用。丁酸通过激活G蛋白偶联受体(GPR)引起多种转录因子的活化,或者作为组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂在基因表达的表观遗传调控中发挥作用。本文综述了丁酸尤其是在高谷物饲粮中添加丁酸盐对反刍动物瘤胃、肠道和肝脏的影响以及分子作用机制,为缓解SARA的危害提供理论依据。

短链脂肪酸及其调节肠道炎症作用的研究进展

哺乳动物体中的胃肠道微生物是细菌生态系统的组成部分,这些微生物对胃肠道发育、功能和调节有着非常重要的作用。短链脂肪酸(short-chain fatty acids,SCFAs)是由胃肠道微生物组中的有益细菌发酵产生的代谢物,主要包括乙酸(acetate)、丙酸(propionate)和丁酸(butyrate),目前的研究多集中在微生物对宿主细胞代谢的影响上,但短链脂肪酸调节肠道炎症及其机制的研究仍值得关注。越来越多的研究表明,SCFAs具有为肠道上皮细胞提供能量、保护肠道屏障、调节肠道炎症等功能。在肠道炎症的治疗上,SCFAs可以作为信号分子在细胞表面激活G蛋白偶联受体(GPCRs),在细胞内通过底物转运蛋白抑制组蛋白脱乙酰化酶(HDACs),从而达到抗炎的目的。本文就SCFAs的组成和来源、机体中合成途径和分布、对肠道健康的影响、在肠道炎症中调节的分子机制以及膳食纤维对SCFAs合成的影响进行综述,重点阐述了短链脂肪酸调节肠道炎症的作用机制,为后续进一步研究提供理论依据。

短链脂肪酸在免疫调节和免疫相关性疾病中的作用

短链脂肪酸(short-chain fatty acids,SCFAs)由难消化的膳食纤维在肠腔内发酵所产生,主要包括乙酸、丁酸和丙酸。SCFAs不仅可以为肠黏膜细胞储存能量、降低渗透压,维持肠道健康,更重要的是可通过激活G蛋白偶联受体和抑制组蛋白去乙酰化酶调节免疫应答,并且可抑制部分炎症因子的表达,与炎性疾病的防治有关。本文根据近年来国内外相关研究报道,综述SCFAs参与免疫调节的两种主要机制及其在临床相关疾病中的研究进展,为更好地了解SCFAs对免疫应答的影响和治疗相关疾病提供理论依据。

1-磷酸鞘氨醇及其信号通路在炎症相关性疾病中的作用

1-磷酸鞘氨醇(sphingosine 1-phosphate,S1P)是细胞膜鞘磷脂在代谢过程中产生的一类重要的信号分子,S1P可被转运到细胞外,通过作用于S1P受体,激活一系列下游信号分子发挥作用,如Ras/Raf/ERK、PI3K/Akt等,也可作为第二信使直接作用于细胞内靶点,如HDAC、TRAF2。其介导的信号通路在很多生理和病理过程中发挥作用,如细胞增殖和迁移、炎性细胞因子浸润、血管生成、自身免疫等。该文分别从S1P的胞外及胞内两种作用方式,探讨S1P及其信号通路在炎症相关性疾病中的作用,综述S1P信号通路相关药物研究进展。

丁酸对脂肪代谢的调节及其作用机制

丁酸作为肠道菌群发酵产物之一,不仅可为生物体提供能量,还能以信号分子形式调节体内能量和物质代谢。近年来,在饲粮中添加丁酸能够有效减少动物过多脂肪沉积而受到广泛关注,然而一些研究发现丁酸表现出促进脂肪合成的作用。丁酸一方面作为脂肪合成的底物,另一方面以信号分子形式即通过结合G蛋白偶联受体(GPCRs)或者抑制组蛋白去乙酰化酶(HDACs)的活性来调节脂肪代谢。本文主要从这2方面来探讨丁酸与脂肪代谢之间的联系,为畜禽养殖中如何减少过多脂肪沉积或抑制肥胖提供理论参考。

短链脂肪酸与肠道疾病关系的研究进展

肠道菌群(gut microbiota,GM)是定殖于人体或哺乳动物肠道中的微生物群落,主要由古生菌、真菌、细菌和病毒等组成,统称为肠道微生物群。越来越多的研究指出,GM作为人体的“第二基因组”和“第二大脑”,与人体健康密切相关[1~3]。GM及其代谢产物紊乱可直接诱发消化系统疾病(如肠易激综合征和炎症性肠病等),并进一步通过肠-肝轴导致代谢系统疾病(如糖尿病和肥胖等)[4]。短链脂肪酸(short chain fatty acids,SCFAs)是GM的重要代谢产物和信息分子,主要由部分肠道菌群利用不易消化的碳水化合物(低聚糖、抗性淀粉、非淀粉多糖等)或宿主分泌物(粘蛋白)厌氧发酵产生,包括乙酸盐、丙酸盐、丁酸盐、异丁酸盐、戊酸盐等[5]。研究表明,SCFAs可通过激活G蛋白偶联受体(G protein-coupled receptor,GPR)和抑制组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylases,HDACs)调节体内免疫应答及能量代谢,影响消化系统疾病的发生发展,如肠易激综合征、炎症性肠病、结直肠癌等[6]。现综合近几年国内外相关报道,进一步阐述SCFAs在消化系统疾病发生发展中的作用机制。

短链脂肪酸及免疫调节与脓毒症关系的研究进展

短链脂肪酸是一类由特定肠道菌群产生的饱和脂肪酸,具有维持肠道稳态、参与免疫调节等多种功能。近年来短链脂肪酸与炎症性疾病的关系逐渐成为研究的热点,众多研究表明,短链脂肪酸与脓毒症的发生及发展具有一定关联,可通过调控机体免疫细胞进而影响脓毒症患者的病情进展及预后。本文将短链脂肪酸及免疫调节与脓毒症的关系作一综述,以期为脓毒症的防治提供参考。

肠道菌群代谢产物短链脂肪酸在慢性肾脏病中的研究进展

近年来研究发现肾脏与肠道微生态间存在密切的联系,称为"肠-肾轴"。慢性肾脏病患者(CKD)由于各种因素往往导致肠道生态失调,表现为肠道菌群种类的相对丰度、组成及其代谢产物发生改变。肠道菌群代谢产物短链脂肪酸(SCFAs)是联系宿主和肠道菌群的重要中介物质,具有生物学效应。研究发现SCFAs主要通过与G蛋白偶联受体结合,抑制组蛋白去乙酰化酶调节RAS系统、炎症反应和细胞自噬等,起到延缓肾脏炎症和纤维化的作用。基于SCFAs与肾脏之间的紧密联系,SCFAs可能成为慢性肾脏病治疗的新靶点。外源性补充SCFAs能延缓CKD发生和发展的作用逐渐受到认可。因此,进一步研究SCFAs在肾脏方面的具体作用机制尤为重要。