叶酸结合蛋白1、间皮素在卵巢癌组织中的表达及临床病理意义

目的分析叶酸结合蛋白1(FOLR1)、间皮素(MSLN)在卵巢癌组织中表达的变化及临床病理意义。方法回顾性分析2014年7月至2019年9月西平县人民医院收治的90例卵巢癌患者的临床资料,收集术后切除的癌组织制成标本,同时选择交界性卵巢肿瘤组织标本15例、正常卵巢组织标本30例作为对照。采用免疫组化染色检测并比较分析FOLR1、MSLN在不同卵巢组织中的表达,同时分析FOLR1、MSLN蛋白表达与卵巢癌临床病理参数的关系。结果卵巢癌组织中FOLR1、MSLN蛋白的阳性率分别为86.67%、61.11%,明显高于交界性卵巢肿瘤组织(6.67%、13.33%)、正常卵巢(3.33%、0.00%),差异均有统计学意义(χ^(2)=84.053,P<0.001;χ^(2)=40.218,P<0.001)。卵巢癌组织中FOLR1蛋白表达与其临床分期关系密切(χ^(2)=18.281,P<0.001);卵巢癌组织中MSLN蛋白表达与其临床分期、淋巴结转移关系密切(χ^(2)=11.314,P=0.001;χ^(2)=6.800,P=0.009)。结论FOLR1、MSLN蛋白表达与卵巢癌病情进展关系密切,检测FOLR1、MSLN蛋白表达可用于卵巢癌的治疗及预后评估。

孕鼠叶酸缺乏对幼鼠肺发育及叶酸结合蛋白1基因的影响

目的探讨孕鼠叶酸缺乏对幼鼠肺发育及其叶酸结合蛋白1基因(Folbp1)的影响。方法成熟雌性36只SD大鼠随机均分为A组(缺乏叶酸饲料的实验组)和B组(添加叶酸饲料的对照组),2周后与成熟SD雄性大鼠交配,生后7 d处死新生大鼠,留取肺组织标本。HE染色观察病理改变,实时荧光定量RT-PCR技术检测Folbp1 mRNA表达。结果与B组比较,A组肺组织结构紊乱,肺泡数量明显减少,肺间隔明显增宽,肺泡、孔腔形状较不规则,肺组织结构明显被破坏。A组肺组织中Folbp1 mRNA相对表达量低于B组(561.21±73.53 vs.1095.73±95.88)(P<0.05)。结论孕期叶酸缺乏会降低Folbp1基因表达,从而可能导致幼鼠肺发育形态异常,造成肺发育成熟障碍。

叶酸结合蛋白1真核表达载体的构建及鉴定

目的构建pcDNA3.1-叶酸结合蛋白1(Folbp1)基因真核表达载体,检测其在肺腺癌A549细胞中的表达。方法采用反转录-PCR技术从肺腺癌A549细胞中扩增Folbp1基因的完整编码框,将其克隆到真核表达载体pcDNATM3.1/myc-His B,脂质体转染肺腺癌A549细胞,通过G418筛选,建立稳定转染的肺腺癌A549细胞株,并利用Western blot法鉴定其表达。结果 PCR扩增Folbp1基因全长编码区,电泳显示其分子大小与823 bp预期值一致;连接产物pMD-Folbp1转化感受态细菌,经氨苄西林筛选,提取质粒鉴定表明插入pMD-18T载体的目的片段大小和方向正确;重组质粒扩增Folbp1基因连入pcDNATM3.1/myc-His B载体,酶切鉴定显示切出约5.1 kb符合载体大小的条带及符合插入片段大小的特异条带;转染pcDNA3.1-Folbp1重组质粒的肺腺癌A549细胞株经抗生素G418筛选,Western blot分析显示与预期大小一致的特异性条带。结论 pcDNA3.1-Folbp1真核表达载体构建成功,并在肺腺癌A549细胞内过表达,这将为研究Folbp1基因的功能及其肺发育中奠定了良好的基础。

CDK14和FOLR1在结肠癌组织中的表达及与患者临床病理特征和预后的关系

目的分析周期蛋白依赖性激酶14(CDK14)、叶酸结合蛋白1(FOLR1)在结肠癌组织中的表达及与患者临床病理特征和预后的关系。方法选择2016年10月至2019年10月由洪湖市人民医院收治的177例结肠癌患者作为研究对象,收集其经手术切除的结肠癌组织及癌旁组织。采用实时荧光定量PCR法检测组织中CDK14、FOLR1的mRNA表达水平。采用免疫组织化学法检测组织中CDK14、FOLR1的蛋白表达情况。采用Pearson法分析结肠癌组织中CDK14、FOLR1表达的相关性。采用Kaplan-Meier生存曲线分析结肠癌组织中CDK14、FOLR1表达与患者预后的关系(采用log-rank检验)。采用COX回归分析探讨结肠癌患者预后的危险因素。结果结肠癌组织中CDK14、FOLR1的mRNA表达水平及其蛋白表达阳性率均显著高于癌旁组织(P均<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,结肠癌组织中CDK14与FOLR1表达呈正相关(P<0.05)。结肠癌组织中CDK14、FOLR1表达与患者的TNM分期、分化程度和浸润深度均有相关性(P均<0.05)。Kaplan-Meier生存曲线分析结果显示,结肠癌组织中CDK14、FOLR1阳性表达的患者的3年累积生存率分别显著低于CDK14和FOLR1阴性表达的患者(P均<0.05)。COX回归分析结果显示,结肠癌组织中CDK14、FOLR1阳性表达均是结肠癌患者预后的危险因素(P均<0.05)。结论CDK14、FOLR1在结肠癌组织中表达水平均显著升高,并且两者与患者的TNM分期、分化程度、浸润深度和预后均密切相关,CDK14、FOLR1阳性表达均是结肠癌患者预后的危险因素。

血清TK1、FOLR1在卵巢癌患者中的表达及临床意义

目的探讨血清胸苷激酶1(TK1)、叶酸结合蛋白1(FOLR1)在卵巢癌患者中的表达及临床意义。方法选取眉山市人民医院收治的卵巢癌患者50例作为卵巢癌组,另选取同期在该院接受治疗的良性卵巢肿瘤患者50例作为良性卵巢肿瘤组。比较卵巢癌患者和良性卵巢肿瘤患者血清中TK1、FOLR1水平,分析卵巢癌患者血清中TK1、FOLR1水平与临床病理特征的关系,采用受试者工作特征曲线(ROC曲线)分析血清TK1、FOLR1对卵巢癌的诊断价值。结果卵巢癌组患者血清中TK1、FOLR1水平为(4.93±1.96)pmol/L、(563.28±212.62)pg/mL,均明显高于良性卵巢肿瘤组[(0.84±0.31)pmol/L、(129.58±65.89)pg/mL],差异有统计学意义(P<0.05)。卵巢癌患者血清中TK1水平与国际妇产科联盟(FIGO)分期、分化程度、淋巴结转移有关(P<0.05);卵巢癌患者血清中FOLR1水平与FIGO分期、分化程度、淋巴结转移、组织分型有关(P<0.05)。应用TK1、FOLR1联合诊断时,其灵敏度和特异度可升高至0.895、0.889。结论TK1、FOLR1在卵巢癌患者血清中呈高表达,且TK1、FOLR1与患者的临床病理特征有关,两者联合检测对卵巢癌的诊断价值较高。

FOLR1慢病毒表达载体的构建及鉴定

本研究通过构建叶酸结合蛋白1(FOLR1)基因的慢病毒表达载体并进行表达鉴定。采用PCR技术扩增出基因全长,克隆至pWPI载体质粒,重组阳性克隆行PCR和测序鉴定,将重组载体质粒与辅助质粒共同转染人肾上皮(293T)细胞包装病毒,病毒颗粒感染人卵巢上皮癌(SKOV3)细胞,流式分选,RT-PCR和Western blot检测病毒感染后细胞中的FOLR1基因和蛋白表达。经鉴定结果显示重组载体质粒构建成功,293T细胞高效包装此慢病毒,携带FOLR1基因的慢病毒感染SKOV3细胞后可见大量绿色荧光细胞,流式分选后经两种方法分别检测出FOLR1基因和蛋白稳定表达。这为探讨FOLR1基因在卵巢恶性肿瘤中的生物学功能提供了实验基础。