一株拮抗番茄叶霉病菌的放线菌筛选、鉴定及发酵条件研究

菌株xjy是一株从新疆棉田土壤中筛选出的对番茄叶霉病菌(Fulviafulva)有较强拮抗作用的放线菌,其对23种常见植物病原真菌和6种细菌有较好的抑制效果,抗菌谱广。其形态特征、培养特性、生理生化特性、细胞壁组分与放线菌中的淡紫灰链霉菌(Streptomyces lavendulae)相同,16SrDNA序列同源性达99.6%。研究发现该菌的摇瓶发酵配方和培养条件为:大豆粉2%、葡萄糖2%、NaCl0.8%、CaCO30.2%、(NH4)2SO40.32%,起始pH7.0、28℃、180r/mim、摇瓶培养6d,这些结果为该菌株今后的应用、抗生素的分离提纯和产业化提供了实验依据。

番茄叶霉病菌对多菌灵、乙霉威及代森锰锌抗性检测

报道了番茄叶霉病菌Fulviafulva对多菌灵、乙霉威及代森锰锌的敏感性基线,以及抗性频率和抗性水平。离体条件下,多菌灵、乙霉威及代森锰锌对番茄叶霉病菌敏感菌株的平均EC50值分别为0.101、2.475、9.067μg/mL;最低抑制浓度(MIC)值分别为0.5、5、50μg/mL。山西晋南地区番茄叶霉病菌对3种杀菌剂的抗性频率最高,分别达到97.4%、70.5%、98.7%;山西吕梁地区与太原地区相对较低,但该病菌对3种杀菌剂的抗性频率也都超过了30%。辽宁沈阳、山东寿光、河北保定番茄叶霉病菌对多菌灵的抗性频率均为100%;对乙霉威的抗性频率前两地为100%,保定为10%;对代森锰锌的抗性频率都超过90%。所有抗性菌株对多菌灵均属于高抗类型,抗性指数超过5000,测不出MIC值;对乙霉威有50%的高抗菌株,抗性指数在100以上;对代森锰锌各地均未发现高抗菌株,低抗和中抗菌株所占比例较大,其抗性指数集中在50左右。对多菌灵与乙霉威具有双重抗性的菌株占测试菌株总数的49.9%,并且首次在田间发现了对3种杀菌剂都具有抗性的番茄叶霉病菌多抗菌株。

番茄叶霉病菌对嘧菌酯的抗性检测及抗性风险评估

利用孢子萌发法测定了从河北、浙江、江苏、山东、四川等省田间采集的97个番茄叶霉病菌菌株对嘧菌酯的敏感性。结果表明，田间番茄叶霉病菌已对嘧菌酯产生不同程度的抗药性。97个菌株可分为敏感菌株（EC50值〈5．4μg／mL）、低抗菌株（EC50值5．4～54μg/mL），中抗菌株（EC50值54～270μg／mL）、高抗菌株（EC50值270～1350μg／mL）、特高抗菌株（EC50值〉1350μg／mL）5种类型，分别占55．67％、14．43％、11．34％、10．31％和8．25％。其中从未用过甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂的27个菌株的EC50平均值为（O．544±0．349）μg/mL，可作为敏感基残；高抗和特高抗菌株集中在常施用甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂的河北定州。通过紫外线诱导和药剂驯化的方法获得了番茄叶霉病菌5个抗嘧菌酯突变体，其抗药性不稳定。在不含药PDA平板上继代培养后抗药性水平下降，甚至恢复至敏感状态；除突变体cf21^MI的产孢量高于其亲本外，抗药性突变体的菌落生长速率、产孢量、孢子萌发率均显著低于其亲本菌株，所有抗嘧菌酯突变体及其亲本菌株接种于番茄离体叶片后，突变体病情指数与亲本菌株之间没有显著差异。嘧菌酯与多菌灵、苯醚甲环唑之间不存在交互抗药性。田间抗药性检测及室内抗药性风险评估结果表明，番茄叶霉病菌对嘧菌酯具有较高的抗药性风险。

四霉素对番茄叶霉病菌的毒力效应及田间防治效果

为评价四霉素对番茄叶霉病的防治效果,采用菌丝生长速率法和孢子萌发法分别测定了四霉素对9株不同地区来源的叶霉病菌(Passalora fulva)菌丝生长、孢子萌发以及芽管伸长的毒力,并进行了田间药效试验。结果表明:四霉素对番茄叶霉病菌具有较高的抑制活性,其中抑制孢子萌发、芽管伸长的活性较高,其EC_50值分别为0.002 30~0.012 7μg/mL、0.00050~0.013μg/mL;对菌丝生长抑制活性略低,其EC_50值为0.601 6~1.394μg/mL。显微观察发现:经四霉素处理后,番茄叶霉病菌新生菌丝生长受阻、部分菌丝末端分支增多、变粗;分生孢子萌发受抑制,芽管膨大变粗、生长受阻。田间试验结果表明:经四霉素有效成分6.75和20.25 g/hm^2处理后,对番茄叶霉病的保护防效分别为74.40%和83.09%,治疗防效分别为67.92%和76.68%,均显著高于对照药剂甲基硫菌灵(有效成分540 g/hm^2)的处理防效。

番茄叶霉病菌对氟硅唑抗药性的初步研究

2002～2003年 ,从辽宁省不同地区番茄保护地采集番茄叶霉病病叶 ,经单孢分离共获得叶霉病菌51株。采用菌丝生长速率法测定了各菌株对氟硅唑的敏感性。结果表明:在测定的番茄叶霉病菌中 ,中抗菌株占15.69 % ,高抗菌株占11.76 %。在对不同抗性菌株生物学特性比较中发现 ,高抗菌株和敏感菌株在菌丝生长速率、菌丝鲜重及渗透敏感性方面均达到显著差异水平 ,说明高抗菌株的适合度下降。氟硅唑与速克灵、嘧菌酯无交互抗药性 ,但与腈菌唑、三唑酮有交互抗药性。

北京地区番茄叶霉病菌致病性分化新动态

通过对北京地区番茄叶霉病菌生理小种分化的连续监测,发现了可侵染目前生产上主栽抗叶霉病品种的新小种。采用国际上通用的一套叶霉病生理小种鉴别寄主品种,利用苗期接种鉴定的方法,对新小种进行了多次小种归属鉴定,该小种属于1.2.3.4.9。与目前生产上的优势小种1.2.3和1.2.3.4相比,新小种的分化层次高,致病性更强,虽然现在还不是优势小种,但必须引起高度重视。

番茄叶霉病菌对多菌灵抗药性的诱导及抗性菌株特性研究

采用紫外线诱导及药剂驯化两种方法对番茄叶霉病菌的目标菌株进行多菌灵抗性诱导,分别经7、9代诱导后获得抗性突变体。突变体菌株的EC50均大于500μg／mL,达高抗水平。突变体菌株与自然抗性菌株无药继代培养10代后,抗性程度没有明显变化。与亲本菌株比较,突变体菌株菌落生长速率、产孢量及产毒量有所下降。室内交互抗性测定表明:多菌灵与苯菌灵、菌核净及克霉灵之间具有正交互抗性,与瑞毒霉、扑海因及速克灵无交互抗性。乙霉威对多菌灵的高抗菌株表现负交互抗性或无交互抗性,但对敏感菌株不表现负交互抗性。

壳聚糖对番茄叶霉病菌的抑制作用

以番茄叶霉病菌为实验菌种,用含毒介质法系统研究了壳聚糖的脱乙酰度、分子量、浓度、环境pH值及溶剂等因素对壳聚糖抑菌活性的影响.结果表明,壳聚糖对番茄叶霉病菌具有明显抑制作用;在研究范围内,随浓度的增加和环境pH值降低,抑菌活性增强;较理想的溶剂是乳酸和醋酸;脱乙酰度为86%、分子量为213×103的壳聚糖抑菌效果较好;0.2%的壳聚糖与三唑酮等农药抑菌效果相同.

番茄叶霉病菌绎几种杀菌剂敏感性的测定

番茄叶霉病菌绎几种杀菌剂敏感性的测定＊潘洪玉１张浩２丁利１席景会１董苏＊＊（１解放军农牧大学植保教研室长春１３００６２２吉林农业大学植保系）番茄叶霉病〔Ｆｕｌｖｉａｆｕｌｖａ（Ｃｏｏｋｅ）Ｃｉｆ．〕是保护地番茄上发生的一种重要病害。由于该病菌的生理小...

啶酰菌胺对番茄叶霉病菌的毒力及田间防效

为探明啶酰菌胺对番茄叶霉病菌的抑制效果,采用菌丝生长速率法分别测定了啶酰菌胺、嘧霉胺和多菌灵对番茄叶霉病菌的毒力,并进行了田间防治试验,结果表明:啶酰菌胺、嘧霉胺和多菌灵对番茄叶霉病菌菌丝生长抑制的EC50值分别为7.3972、10.7540和19.7834μg/mL,啶酰菌胺对番茄叶霉病菌菌丝生长抑制活性优于嘧霉胺和多菌灵;50%啶酰菌胺WDG 1200倍液、40%嘧霉胺SC 750倍液和50%多菌灵WP 1200倍液,2次施药后21 d对番茄叶霉病的防效分别为80.71%、72.05%和38.95%,啶酰菌胺对番茄叶霉病的防效优于嘧霉胺和多菌灵。

山西省番茄叶霉病菌对多菌灵的抗性检测

从山西神池山区采集到 30个番茄叶霉病菌 [Fulviafulva (Cooke)Ciferri]菌株 ,测得对多菌灵 (MBC)EC50的平均值为 0 0 978μg/mL ,最低抑制生长浓度 (MIC)值为 0 5 μg/mL。该区从未用过MBC ,以其EC50 的平均值定为敏感基线。从其它六个地区数十个县市采集分离得到 347个菌株 ,并测定了对MBC的敏感性。有 30 1个菌株属于抗性菌株 ,占总数的 86 7% ,并且 95 %以上的菌株EC50 >10 0 0 μg/mL。晋南和晋北地区的抗性频率最高 ,分别达到97 6 %和 10 0 % ;太原和吕梁地区相对低 ,但也分别达到 74 4 %和 79 6 %。抗性菌株经过多代无药培养后抗性程度没有明显变化。

番茄叶霉病菌分生孢子生物学特性研究

番茄叶霉病菌分生孢子萌发的最适温度为２５℃，最适ｐＨ值为４０～５０。相对湿度小于８６％时孢子不萌发，病菌在ＰＳＡ培养基上产孢量最大。分生孢子的致死温度为４５℃５ｍｉｎ，孢子可在地表或浅土层中的病残体上越冬。

番茄叶霉病菌拮抗链霉菌BPS2发酵条件的研究

对番茄叶霉病菌拮抗链霉菌BPS2(StreptomycestumenensisBPS2)菌株的最适培养基成分和发酵条件进行研究。结果表明,F培养基最适合该菌株的发酵培养。通过正交设计试验得出,F培养基最佳碳氮浓度组合为蔗糖1.0%,玉米粉2.0%,蛋白胨0.3%,豆饼粉3.0%,硫酸铵0.5%;发酵参数在培养温度为28℃,180r/min振荡培养条件下,发酵时间60h,装液量250ml三角瓶装70ml,培养基初始pH值为6,种子液菌龄为22h,种子液以6%的接种量转接时发酵液活性最强。

2006～2007年东北三省番茄叶霉病菌生理小种变异的监测

2006～2007年,对东北三省番茄叶霉病菌生理小种的变异情况进行了监测。在供试的66个菌株中,检测到的生理小种有1.2.3、1.2、2.3、1.2.3.4、1.3、1.4、1.3.4和1.2.4,主要生理小种仍为1.2.3.4,1.3.4和1.4为新检测到的生理小种。

番茄叶霉病菌对代森锰锌的抗性检测

从山西神池山区露地番茄植株上采集分离到番茄叶霉病菌30个菌株,经室内测定,对代森锰锌平均EC50值为9.0671μg/ml,MIC值为50μg/ml,以此作为敏感基线。山西省6个地区的保护地番茄叶霉病菌对代森锰锌的抗性频率是83.9%,晋南地区抗性频率最高为98.7%;辽宁沈阳、山东寿光、河北保定的抗性频率都超过了90%。所有抗性菌株中没有高抗菌株,低抗和中抗菌株所占比例较大,其抗性水平集中在50倍左右。

番茄叶霉病菌主要生理小种的RAPD标记鉴别

叶霉病是番茄的主要病害之一,目前我国大部分地区番茄叶霉病菌生理小种以1.2.3,1.2.3.4和1.2.3.4.9为主。本研究旨在利用RAPD技术对3个主要的番茄叶霉病菌生理小种进行分子鉴别。在筛选了41个RAPD随机引物的基础上,利用28个引物对3个生理小种的基因组DNA进行了分析,扩增获得了138个位点,3个生理小种基因组的带型相似率达96.38%。4个引物S89、S40、A30和A31在3个小种间产生了5个多态性位点,可以将3个生理小种完全区分开来。这些RAPD标记可用于番茄叶霉病菌生理小种鉴别,为有效地开展番茄叶霉病菌生理小种分化研究提供了一个新方法。

番茄叶霉病菌拮抗菌的筛选及其发酵条件

从蔬菜地田间土壤中筛选出对番茄叶霉病具拮抗作用的22株菌株，其中14株细菌，8株放线菌。孢子萌发抑制试验表明，细菌X14菌株和放线菌F15菌株的发酵液及其离心后上清液对番茄叶霉病菌孢子萌发抑制率均达100％。菌丝生长抑制试验表明，X14菌株对番茄叶霉病菌的平均抑菌直径为22．2mm，初步鉴定该菌株为芽孢杆菌。利用离体叶片法测定对番茄叶霉病致病性的影响，结果表明，X14菌株对番茄叶霉病的防治效果为79．8％～89．0％。对X14菌株发酵条件研究，最佳碳源为淀粉，最佳氮源为NHaNO3，最适pH为6．0。

叶霉病菌毒素对番茄幼苗几种酶的影响

以番茄幼苗为材料,研究了叶霉病菌毒素对番茄叶片内SOD酶、POD酶活性及叶片细胞相对电导率和MDA含量变化的影响。结果表明,番茄叶片经叶霉粗毒素处理后,体内SOD酶和POD酶活性的变化基本趋于一致,即抗病品种中杂8号的活性均高于感病品种823番茄,从平均水平上看,酶活性下降,且抗病品种下降比率小于感病品种;毒素处理后,细胞内MDA含量和相对电导率增加,抗病品种增加比率低于感病品种。

番茄叶霉病菌对氟硅唑敏感基线及抗药性风险研究

从辽宁省不同地区未使用过氟硅唑的保护地中采集番茄叶霉病叶,经单孢分离获得43株叶霉病菌。采用茵丝生长速率法测定其对氟硅唑的敏感性。结果表明,菌株间存在较大差异,EC50值最低为0.151 9μg／mL,最高达4.647 5 μg／mL。所有菌株的EC50总平均值为1.253 1μg/mL,可作为番茄叶霉病菌对氟硅唑的敏感基线。野生菌株经紫外线照射,获得两个抗药性突变菌株,其抗药性倍数分别为6.0和7.6。突变菌株的菌丝生长速率及产孢能力显著低于原野生菌株。

番茄叶霉病菌异菌脲抗药性突变体的诱导与生物学性状

测定了苯并咪唑类杀菌剂敏感-乙霉威抗性(BenS-DieR)、苯并咪唑类杀菌剂抗性-乙霉威敏感(BenR-DieS)和苯并咪唑类杀菌剂抗性-乙霉威抗性(BenR-DieR)3种类型的番茄叶霉病菌Cladosporium fulvum菌株对不同类型药剂的敏感性。结果表明,蕃茄叶霉病菌对供试药剂的敏感性与其对苯并咪唑类杀菌剂及乙霉威的敏感性无关。根据药剂对3类菌株EC50值的平均值,16种杀菌剂抑制菌丝生长的活性依次为腐霉利>乙烯菌核利>异菌脲>戊唑醇>百菌清>嘧霉胺>醚菌酯>代森锰锌>8-羟基喹啉铜>丙环唑>苯醚甲环唑>嘧菌酯>灭锈胺>烯酰吗啉>烟酰胺>三唑酮;抑制孢子萌发的活性依次为醚菌酯>腐霉利>百菌清>乙烯菌核利>灭锈胺>8-羟基喹啉铜>异菌脲>代森锰锌>嘧菌酯>烟酰胺>嘧霉胺>戊唑醇>丙环唑>苯醚甲环唑>三唑酮>烯酰吗啉。通过紫外诱变共获得17株抗异菌脲突变体,突变频率为4.5×10-7。其中低抗、中抗和高抗菌株分别占17.65%、70.59%和11.75%。这些突变体对腐霉利和乙烯菌核利表现交互抗性,对苯并咪唑类、脱甲基抑制剂(DMIs)、QoIs等药剂的敏感性与亲本菌株之间没有显著性差异,与亲本菌株在生长、产孢、致病能力等方面也无显著差异,但对渗透胁迫的敏感性要显著高于亲本。