元件合成钼铁硫簇合物的键价分析

运用原子簇化合物键价计算公式 ,对元件合成钼铁硫簇合物轨道分布情况进行分析。无论是低核簇还是高核簇都具有 M-M金属键 ,又具有单电子占据轨道和孤对电子占据轨道。在合成过程中 ,各种变化轨道都转化成为

健脾疏肝丸对非酒精性脂肪性肝病大鼠肝X受体α-固醇调节元件结合蛋白-1-脂肪酸合成酶信号转导通路的影响

目的探讨健脾疏肝丸对非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)大鼠肝X受体(liver X receptorα,LXRα)-固醇调节元件结合蛋白-1(sterolregulatory element-binding protein-1,SREBP-1)-脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FAS)信号转导通路的影响。方法将32只无特定病原体(specific pathogen free,SPF)SD雄性大鼠按照随机数字表法分为正常组、模型组、健脾疏肝丸组和易善复组,每组8只。正常组进食普通饲料,其他组进食高脂饲料,健脾疏肝丸组给予4.86 g/(kg·d)灌胃,易善复组给予0.123 g/(kg·d)灌胃,正常组和模型组给予等量蒸馏水灌胃。灌胃与造模同时进行,共8周。检测大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、高密度脂蛋白(high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C)、低密度脂蛋白(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)、甘油三酯(triglycerides,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)及白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)水平。对大鼠肝组织切片进行HE染色和油红O染色,于光学显微镜下观察。采用免疫组织化学法、蛋白质免疫印迹法及实时荧光定量聚合酶链式反应(real time polymerase chain reaction,RT-PCR)检测大鼠LXRα、SREBP-1及FAS的表达水平。结果 (1)正常组、模型组、健脾疏肝丸组和易善复组大鼠ALT[(3.40±0.81)U/L vs(9.98±2.27)U/L vs(7.80±1.52)U/L vs(6.43±1.89)U/L]、AST [(10.61±1.17)U/L vs(23.63±4.82)U/L vs(18.04±2.98)U/L vs(16.42±3.30)U/L]、TNF-α[(2.40±0.96)×10-3μg/L vs(6.64±0.92)×10-3μg/L vs(4.87±1.35)×10-3μg/L vs(4.45±1.39)×10-3μg/L]、IL-6 [(0.95±0.81)pg/ml vs(7.88±3.08)pg/ml vs(3.17±1.26)pg/ml vs(1.64±0.55)pg/ml]、TG [(0.33±0.13)mmol/L vs(0.90±0.24)mmol/L vs(0.62±0.37)mmol/L vs 0.62(0.46,0.66)mmol/L]、TC [(2.10±0.42)mmol/L vs 5.34(5.17,6.12)mmol/Lvs(3.68±0.63)mmol/Lvs(3.41±0.81)mmol/L]、HDL-C [(1.07±0.17)mmol/Lvs(0.62±0.14)mmol/Lvs(0.78±0.13)mmol/Lvs(0.79±0.12)mmol/L]及LDL-C[0.38(0.26,0.41)mmol/L vs(0.69±0.11)mmol/L vs(0.41±0.13)mmol/L vs(0.43±0.10)mmol/L]水平差异均有统计学意义(P <0.05)。与正常组相比,模型组AST、ALT、LDL-C、TG、TC、IL-6及TNF-α显著升高,HDL-C显著降低(P <0.05);与模型组相比,健脾疏肝丸组和易善复组AST、ALT、LDL-C、TG、TC、IL-6、TNF-α显著降低,HDL-C显著升高(P<0.05);与健脾疏肝丸组相比,易善复组大鼠血清TC显著降低(P <0.05),其他各指标差异无统计学意义(P> 0.05)。(2)肝组织HE染色和油红O染色示:与正常组相比,模型组大鼠肝脏脂肪变严重;与模型组相比,健脾疏肝丸组大鼠肝脏脂肪变减轻。(3)免疫组织化学结果表明,正常组、模型组、健脾疏肝丸组和易善复组大鼠LXRα(345872±52737 vs 544998±55506 vs 436319±65076 vs 448588±104641)、SREBP-1(259408±71143 vs 538701±62336vs 399705±102395 vs 394167±158047)和FAS(201683±48205 vs 466884±74934 vs 425589±63672 vs417852±84373)相对表达水平差异有统计学意义(P <0.05)。与正常组相比,模型组各蛋白相对表达水平均显著升高(P <0.05);与模型组相比,健脾疏肝丸组与易善复组各蛋白相对表达水平显著下降(P <0.05);健脾疏肝丸组与易善复组各蛋白相对表达水平差异无统计学意义(P> 0.05)。(4)Western blot结果表明,正常组、模型组、健脾疏肝丸组和易善复组大鼠LXRα[0.80±0.29 vs 1.57(1.30,1.67) vs 1.09±0.30 vs 1.10±0.36]、SREBP-1(0.42±0.12 vs 1.15±0.45 vs 0.86±0.20 vs 0.84±0.20)和FAS(0.43±0.12 vs 1.10±0.40 vs 0.81±0.26 vs 0.80±0.28)相对表达水平差异有统计学意义(P <0.05)。与正常组对比,模型组小鼠各蛋白相对表达水平显著升高(P <0.05);与模型组对比,健脾疏肝丸组及易善复组小鼠LXRα蛋白相对表达水平显著降低(P <0.05),健脾疏肝丸组与易善复组相比,各蛋白相对表达水平差异无统计学意义(P> 0.05)。(5)正常组、模型组、健脾疏肝丸组和易善复组大鼠肝组织LXRα[1.13±0.38 vs 4.14(4.01,4.35) vs 2.65±1.85 vs 1.35(0.54,4.23)]、SREBP-1、FAS[1.37±0.49 vs 4.35±1.97 vs 1.98(1.88,3.22)m RNA相对表达量差异有统计学意义(P <0.05)。与正常组相比,模型组LXRα[1.46±0.51 vs 6.13±1.17 vs 3.82±2.06 vs 1.56(1.19,4.74)]、SREBP-1、FAS vs1.83(1.64,4.29)] m RNA相对表达量显著升高(P <0.05);与模型组对比,健脾疏肝丸组及易善复组LXRα、SREBP-1、FAS m RNA表达均显著降低(P <0.05),健脾疏肝丸组与易善复组相比,LXRα、SREBP-1、FAS m RNA表达差异无统计学意义(P> 0.05)。结论健脾疏肝丸对大鼠NAFLD的改善作用可能与其抑制LXRα-SREBP-1-FAS信号转导通路有关。

基于FXR-Srebp1c-FAS通路及CD36探讨祛痰活血方抗非酒精性脂肪性肝病的机制

目的 以内源性脂肪酸合成相关法尼醇X受体(farnesoid X receptor,FXR)-固醇调节元件结合蛋白-1c(sterol regulatory element-bindingprotein-1c,Srebp1c)-脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FAS)通路及外源性脂肪酸摄入相关的白细胞分化抗原36(cluster of differentiation 36,CD36)为切入点,探讨祛痰活血方抗非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)的分子机制。方法 雄性C57BL/6J小鼠,随机分为对照组、模型组、祛痰活血方组和易善复组,每组各10只。模型组、祛痰活血方组和易善复组给予高脂饲料喂养,4周后祛痰活血方组和易善复组开始给药干预,给药8周后取各组小鼠血清用于生化检测;肝组织用于病理、肝脏总胆固醇(cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)含量及FXR、Srebp1c、FAS、CD36基因及蛋白表达的检测。结果 与对照组比较,模型组小鼠体质量、肝质量明显增加(P<0.05);肝组织病理结果及肝脏TC、TG含量的升高(P<0.01)均提示明显脂肪变性;肝组织FXR、Srebp1c的m RNA表达水平,以及CD36的m RNA和蛋白表达均明显上升(P<0.01),FAS蛋白表达下降(P<0.05);与模型组比较,祛痰活血组小鼠体质量、肝质量均明显降低(P<0.01);肝组织脂肪变性明显减轻;肝组织中FXR m RNA表达明显升高(P<0.01),Srebp1c、FAS、CD36的m RNA及蛋白表达均明显降低(P<0.05)。结论 外源性脂肪酸摄入增加可能是高脂引起的NAFLD的主要成因,祛痰活血方既抑制外源性脂肪酸摄入,亦减少内源性脂肪酸合成,双向调节改善NAFLD。

平糖方抑制NAFLD大鼠肝脏脂质合成作用的实验研究

目的:探讨平糖方对非酒精性脂肪肝病(NAFLD)模型大鼠治疗作用的机制。方法:通过高脂喂养诱导NAFLD大鼠模型,观察平糖方对NAFLD模型大鼠血脂、转氨酶、肝脏形态学的影响,采用荧光实时定量PCR技术检测肝脏X受体α(LXRα)、固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c)、脂肪酸合酶(FAS)等与脂质合成相关的基因表达。结果:与NAFLD组相比,平糖方组大鼠的血脂及转氨酶水平显著下降,脂肪变性肝细胞数目显著下降,肝脏SREBP-1c和FAS表达显著降低。结论:平糖方对NAFLD模型大鼠具有良好的治疗作用,其机制可能与抑制肝脏成脂作用有关。

中药活性成分生物合成研究及应用

中药活性成分是中药发挥药效的物质基础,也是创新药物的来源,主要提取自药用植物.但植物中药用活性成分含量低、结构类似物多、分离纯化困难等因素限制了中药活性成分的深入研究及开发应用.挖掘中药活性成分生物合成过程中的关键催化元件,解析其生物合成途径,不仅对探讨中药成药性机制、道地性形成具有重要指导意义,也为通过现代生物技术方法,进一步可持续开发和利用中药活性成分奠定基础.本文将重点阐述中药活性成分生物合成途径的研究思路及重点研究方向,并从其合成生物学与代谢工程两个方向的应用进行探讨,为中药活性成分的开发利用提供新的思路,推动中医药现代化研究.

组合生物学技术合成他克莫司类似物的研究进展

近年来组合生物学技术在开发抗生素类似物的研究中发挥着越来越重要的作用,在他克莫司类似物的组合生物合成中,通过应用外源合成前体取代烯丙基丙二酸单酰基和4,5-二羟基-1-烯-环己甲酸,以及应用模块化合成元件取代AM合成元件和改造后修饰合成元件,已经生产出11个他克莫司类似物,这些研究拓宽了人们对标准化合成前体和模块化合成元件的认识,为通过组合生物合成手段进行抗生素的更新换代提供指导。

青钱柳总皂苷对游离脂肪酸诱导的H4-ⅡE细胞脂肪代谢的影响及作用机制

目的:研究青钱柳总皂苷(CPS)对游离脂肪酸(FFA)诱导的H4-ⅡE肝细胞脂肪代谢的影响和作用机制。方法:以FFA诱导的H4-ⅡE大鼠肝细胞为模型,培养72 h后,采用Neutral red法检测CPS(0,0.05,0.10,0.20,0.40 g·L^(-1))对细胞活性的影响;根据细胞活性检测结果选择CPS低剂量组(CPS-L,0.10 g·L^(-1))和高剂量组(CPS-H,0.20 g·L^(-1))干预,油红O(Oile red)染色并测定细胞内脂质含量;药物干预2 h后实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测肝细胞相应基因表达,药物干预30 min后,利用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞相应蛋白磷酸化水平。结果:与正常组比较,0.10,0.20 g·L^(-1)CPS干预后肝细胞活性明显升高(P<0.05);干预72 h后,Oile red染色显示FFA(20μmol·L^(-1))诱导后呈现大片红染的脂滴,细胞脂质含量显著增加(P<0.01),CPS干预后细胞中红染的脂滴减少,细胞脂质含量较FFA(20μmol·L^(-1))诱导组明显减少(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,CPS-L和CPS-H组腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK),乙酰Co A羧化酶(ACC)蛋白磷酸化水平明显升高(P<0.05,P<0.01);胆固醇应答元件结合蛋白1c(SREBP1c),脂肪酸合成酶(FAS)mRNA表达水平明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论:CPS能够显著降低体外FFA诱导肝细胞脂质沉积,可能是通过上调AMPK,ACC蛋白磷酸化水平,下调SREBP1c,FAS mRNA表达而发挥作用。

哺乳动物抑制型转录因子及启动子对的全新设计与构建

转录因子及启动子是基因回路的基础。相较于原核启动子,真核启动子作用机制复杂,增加了全新设计与改造的难度。目前有限数量的真核转录因子及启动子成为在哺乳动物细胞中设计并实现复杂基因回路以满足各类临床或工业应用需求的瓶颈。文中介绍了基于能够结合特定DNA序列的DNA结合结构域,通过柔性连接肽连接到转录抑制模块KRAB,构建抑制型转录因子以及通过在SV40启动子下游插入结合序列构建对应启动子的方法。而后,在哺乳动物细胞系中通过流式细胞术对其抑制转录的强度、不同转录因子及启动子对之间的正交性进行了测定。文中提供了一套标准化的、可调节的转录因子及启动子的全新设计与构建方案。基于该方案所构建的5对抑制型转录因子及启动子对能够在哺乳动物细胞中起到不同程度的抑制效果且相互正交。文中构建的哺乳动物转录因子及启动子对扩充了哺乳动物生物元件库,为构建复杂真核基因回路打下了基础;运用该设计方法能够根据需求构建更多正交的人工转录因子及启动子对。