培养基和培养条件对栀子悬浮细胞合成多糖的影响

对栀子悬浮细胞合成多糖的调控因子研究表明 :B5为最适培养基 ;5～ 10d继代周期的细胞可以保持良好的生长状态和多糖的合成能力 ;80g L的鲜细胞的接种量有利于栀子细胞的生长和多糖的合成 ;使用单一碳源时 ,葡萄糖比蔗糖对细胞生长更有益 ,但葡萄糖成本高 ,因而混合碳源 4 5g L(葡萄糖 :蔗糖 =1∶1)是最佳配方 ;氮源种类对细胞生长和多糖合成没有明显的影响 ,但氮源浓度是主要因素 ,4 0～ 5 0mmol L是最佳浓度 ,同时运用悬浮细胞生产栀子多糖可以通过在不同时间收获的细胞来避免提取时黄色素的干扰 ,具有很好的实际意义。

合成多糖负荷对健康成人糖与脂类代谢的影响

<正> 膳食纤维是由一种或几种不同化合物构成的,特别是水溶性的能抑制肠道中糖的吸收,降低血胆固醇水平,对糖及脂类代谢起着一定作用。以葡萄糖为主要原料制成的合成多糖(Polydextrose)是水溶性难消化的多糖,可能与膳食纤维具有同样的性质。本实验以中老年人为对象,观察投给合成多糖后对糖和脂类代谢的影响。 对象与方法 一、对象:实验对象为糖耐量正常、身体健康的11名自愿受试者,其中男性4名,女性

黑木耳UGP基因家族全基因组鉴定及其与菌丝生长多糖合成的相关性研究

黑木耳多糖是具有药用价值的生物活性分子,然而黑木耳高多糖的合成分子机理尚未明确。本研究对处于多糖合成途径关键位置的UGP家族基因进行了鉴定,从黑木耳基因组中鉴定出2个AhUGPs基因,并从另外21个食用菌基因组内挖掘出39个UGPs基因,通过生物信息学分析发现,UGP基因家族成员在真菌体内具有较高的保守性,成员数量少但仍发挥着重要作用,木耳属的4个UGPs则表现出了更高的保守性。在对黑木耳AhUGPs的启动子区域分析中发现了较多的光响应元件和激素响应元件,说明AhUGPs较易受到光和激素调节。在对AhUGPs的表征中,发现AhUGP1的表达水平与菌丝生长速度、菌丝生物量、多糖含量都显著相关,相较于AhUGP2,AhUGP1在菌丝生长和多糖合成中的重要性更高。

植物乳杆菌DMDL 9010胞外多糖合成蛋白cpsB的生物信息学分析

为了探讨植物乳杆菌DMDL 9010胞外多糖合成蛋白cpsB的结构特性,该文通过生物信息学技术研究了胞外多糖合成蛋白cpsB的理化性质、亲/疏水性、跨膜结构、功能位点、磷酸化位点、信号肽、结构域、保守功能域、序列同源性以及空间结构进行预测与分析。结果表明胞外多糖合成蛋白cpsB相对分子质量约为2920,等电点6.86,含有191个氨基酸;其为疏水蛋白,具有较高的稳定性;经过跨膜结构预测,发现其不存在跨膜结构,为胞内蛋白;胞外多糖合成蛋白cpsB中含有15个磷酸位点;氨基酸序列中不包含信号肽,所编码蛋白均为内分泌型蛋白;保守功能域预测中,基因中仅发现一段PHP结构域,该基因可能参与调节胞外多糖的基因表达。胞外多糖合成蛋白cpsB的二级结构中α-螺旋占51.14%,并不存在β-折叠和β-转角结构,其三级结构比例与二级结构基本相似。该研究对植物乳杆菌DMDL 9010的胞外多糖合成蛋白cpsB功能机制进行深入研究,对利用基因工程技术研究其胞外多糖的生物合成具有重要意义。

草本和木本多糖协同葡萄糖对香菇多糖的影响

采用不同质量分数氢氧化钠乙醇溶液提取草本和木本来源的半纤维素多糖。研究分级提取的半纤维素多糖协同不同质量浓度葡萄糖对香菇菌丝体多糖抗氧化活性的影响,同时分析菌丝体生长情况和多糖含量。结果表明:所有提取多糖协同0~20 g/L葡萄糖诱导菌丝体生物量均高于对照组,柞木多糖诱导的胞外多糖含量低于玉米秸秆多糖,但其抗氧化活性较高;质量分数1.5%氢氧化钠乙醇溶液提取的柞木多糖协同5 g/L葡萄糖诱导菌丝体胞外多糖的抗氧化活性最高,同时生物量和多糖含量也得到提升。动态结果表明,质量分数1.5%氢氧化钠乙醇溶液提取的秸秆多糖和柞木多糖协同5 g/L葡萄糖在不影响香菇菌丝生长和多糖含量的情况下,不仅使胞外多糖抗氧化活性提高,还缩短了达到最大抗氧化活性的时间。

不同产地“宁杞1号”枸杞果实的多糖合成代谢差异

基于同位素标记相对和绝对定量(isobaric tags for relative and absolute quantity,iTRAQ)技术,以采自宁夏中宁的“宁杞1号”枸杞果实为样品,以采自新疆精河、内蒙古乌拉特前旗、甘肃瓜州和青海德令哈的“宁杞1号”枸杞果实为对照,进行差异蛋白组学的生物信息学分析。结果表明,新疆/宁夏组、内蒙古/宁夏组、甘肃/宁夏组和青海/宁夏组分别有446,166,966个和1015个差异表达蛋白(DEPs),与枸杞多糖合成代谢相关的DEPs共160个。进一步筛选得到23个与枸杞多糖相关DEPs,包括蔗糖磷酸合成酶、β-葡萄糖苷酶和α-半乳糖苷酶等。推测采自不同产地的枸杞果实的多糖合成代谢差异通路主要包括蔗糖、纤维素、半乳聚糖、半纤维素和果胶合成代谢过程,且这些过程均可通过UDP-葡萄糖链接在一起。通过蛋白组学分析枸杞多糖合成途径上的相关蛋白,为深入研究不同产地同种枸杞多糖调控机制提供理论参考。

利用WGCNA挖掘黄精属植物多糖合成通路关键基因

为了获取黄精属植物多糖类有效成分合成的关键基因,基于转录组差异表达数据,采用加权共表达网络分析方法,并结合KEGG数据库中多糖合成通路信息,计算核心基因在多花黄精和玉竹的叶片及根状茎之间表达模式的相关性.结果表明,FBA(Fructose-Bisphosphate Aldolase)基因和GOLS(Galactinol Synthase)基因在叶片和根状茎之间对应多个转录本的表达量,在皮尔森线性回归计算结果中显示了强相关性,是黄精属植物多糖活性成分合成通路的关键基因.

控制pH环境对出芽短梗霉胞外多糖合成的影响

采用添加 Ca CO3 和 HCl的方法研究了 p H对出芽短梗霉多糖发酵的影响规律。在 P2培养基中发酵2 4 h,该菌有一个强烈的产酸期 ,导致 p H迅速下降到 3.6左右。在此 p H环境下继续发酵 12 0 h,多糖产量仅为 5.9g/ L。如果用 MP2培养基 (P2 + 0 .5% Ca CO3 )发酵 ,由于 Ca CO3 缓冲了发酵 p H的下降 ,在整个发酵过程中 p H值可以维持在 5.0以上 ,多糖产量达到 31g/ L。该菌的多糖合成不仅与发酵初始 p H有关 ,关键还在于整个发酵过程中发酵 p H值必须维持在 5.0以上。

利用还原性多糖合成银纳米粒子

利用还原性多糖为稳定剂、AgNO3为前驱物,通过一条绿色途径合成银纳米粒子,并探讨了纳米粒子的形成机理.对多糖高浓度时制得的复合物在空气与氮气气氛下进行了热处理,分别得到了银的大孔海绵体与银纳米粒子/碳的复合材料.对产物进行了X射线衍射(XRD)、扫描电子显微镜(SEM)、透射电子显微镜(TEM)、紫外-可见分光光度(UV-vis)以及BET吸附表征.

植物细胞壁多糖合成酶系及真菌降解酶系

秸秆类植物细胞壁多糖高效降解转化对我国农业经济的绿色可持续发展具有重要意义,然而植物细胞壁在长期进化过程中形成了复杂结构限制了工业化酶解转化的过程。一方面从植物细胞壁多糖合成酶系的多样性、细胞壁多糖成分的复杂性、超分子结构的异质性等方面综述了形成植物细胞壁抗降解屏障的原因;另一方面从真菌降解植物细胞壁酶系的多样性、不同菌株降解酶组成差异性等分析降解转化植物细胞壁时发挥的不同作用,从而为工业转化合理复配真菌降解酶系,提高秸秆生物质的利用效率提供理论支持。

无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)荚膜多糖合成基因研究进展

无乳链球菌是一种人畜鱼共患的重要病原菌,菌体表面的荚膜多糖是公认的毒力因子,其合成过程受荚膜多糖合成基因的调控。荚膜多糖合成基因存在于荚膜多糖操纵子中,参与无乳链球菌荚膜多糖的合成启动、寡糖和多糖的聚合以及外输并锚定于菌体表面,在新型诊断技术和减毒突变株的构建方面取得良好的应用。本文首次就cps基因的基本属性、转录调节、编码蛋白及其生物功能、对荚膜多糖合成的调控机理、在血清分型和突变株构建的应用这六个方面进行深入分析和讨论,以期为GBScps基因的新功能研究和创新应用提供理论参考。

11群肺炎链球菌荚膜多糖合成相关基因的分子生物学研究

目的利用分子生物学方法,研究7株11群肺炎链球菌荚膜多糖合成相关基因(cps loci)。方法根据11群肺炎链球菌荚膜多糖合成相关基因设计合成5对特异性引物,以7株肺炎链球菌基因组DNA作为模板进行PCR扩增,并对扩增产物进行序列测定及基因序列比对,确定其血清型。多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)技术分析7株11群肺炎链球菌序列型(ST)。采用相邻合并分析(neighbour-joining analysis),根据MLST的7个管家基因和cps基因分别绘制系统发育树。结果根据wcw C、gct和wcj E等3个基因产物确定5株原11A型肺炎链球菌为11A型,无11E型;根据wcwR和gct等2个基因产物确定2株原11B型肺炎链球菌为11B型。获得7株不包括4个合成调控基因(wzg、wzh、wzd和wze)的11群肺炎链球菌cps loci,长度为11～12 kb,11A型具有12个开放式阅读框(ORF),11B型具有11个ORF。5株11A型肺炎链球菌部分cps基因序列差异较大; 2株11B型肺炎链球菌部分cps基因序列相似性高于99%。根据MLST分析发现3种新的ST型。根据MLST的7个管家基因绘制的系统发育树和cps基因绘制的系统发育树差异很大。结论从分子水平上确定了11A和11B血清型。获得了5株11A型和2株11B型肺炎链球菌ST型和部分荚膜多糖合成相关基因(cps loci),完善了11群肺炎链球菌的菌种档案。

6群肺炎链球菌荚膜多糖合成相关基因的分子生物学研究

目的利用分子生物学方法,对25株6群肺炎链球菌荚膜多糖合成相关基因(cps loci)进行研究。方法采用多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)技术,对25株6群肺炎链球菌进行分型;依据Gen Bank中收录的6群肺炎链球菌cps loci设计合成引物,以25株肺炎链球菌基因组DNA作为模板进行PCR扩增,并对扩增产物进行基因测定及分析;采用相邻合并分析(neighbour-joining analysis),根据MLST的7个管家基因和wciP、wzy、wzx这三个cps loci的代表基因分别绘制出系统发育树。结果根据MLST技术分析发现7株新的ST型菌株。25株6群肺炎链球菌cps loci的G+C含量为35.4%~35.5%,均属于I类;所有6C型wzy基因均有6个碱基的缺失。根据MLST的7个管家基因绘制的系统发育树,并根据cps loci的3个代表基因wciP、wzy和wzx绘制的系统发育树,差异很大。3个代表基因绘制的系统发育树,6C型为进化距离比较远的分枝,6A型和6B型的分枝进化距离相对较近;6D型与6B型在同一分枝内。结论获得了25株6群肺炎链球菌ST型和全长cps loci,完善了6群肺炎链球菌的菌种档案。

保加利亚乳杆菌胞外多糖合成及生物学特性研究

影响保加利亚乳杆菌胞外多糖合成的因素较多,选取培养温度、pH、接种量及碳源作为影响的主要因素进行探讨,当乳杆菌的培养温度为40℃、pH值为6、接种量为2%、添加葡萄糖作为碳源时,能够得到得率较高的胞外多糖。该胞外多糖具有一定的生物学功能,灌胃小鼠胞外多糖能使小鼠具有较强活动耐力且耐缺氧,同时胞外多糖可以促进嗜酸乳杆菌的生长。

铁皮石斛多糖合成相关基因在不同组织及低温胁迫下的表达分析

为探讨多糖合成基因对铁皮石斛生长发育的调控作用及低温胁迫对多糖合成基因的影响,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术对铁皮石斛多糖合成途径中UAM、UGP、RHM、SPS、CSLA和PGM基因在不同组织(根、茎、叶、花)及0℃胁迫24 h的表达水平进行定量分析。结果显示:GAPDH基因在5个候选基因中稳定性最高,可作为本研究的内参基因;7个多糖合成相关基因在铁皮石斛根、茎、叶、花中均有表达,且在花和根中的表达量高于成熟茎和叶;低温胁迫下,PGM基因呈持续下调表达,RHM和SPS基因呈先下调后上调至正常表达水平,UGP、UAM和CSLA基因则呈现先下调后上调再下调表达的波动。研究结果提示,GAPDH基因可作为内参基因用于铁皮石斛不同组织及低温胁迫基因表达水平研究中;7个与多糖合成相关的基因在铁皮石斛生长发育中也起到一定的调控作用;夜间0℃低温对铁皮石斛多糖合成相关基因的表达有显著的影响。

茶中儿茶素影响细胞外多糖合成和变形链球菌附着的实验研究

通过菌斑量的测定,胞外多糖的提取和测定,对受儿茶素作用后,降低了酶活性的变形链球菌附着能力进行了体外观察。结果显示,儿茶素浓度在0.125～1％时,细菌附着能力下降,菌斑形成量减少,细菌总蛋白也下降,菌斑中胞外葡聚糖含量降低。由此可见,儿茶素的抗菌斑作用主要表现在抑制胞外葡聚糖产生。

干旱胁迫对猪苓菌丝生长及多糖合成相关酶活性的影响

为探讨干旱胁迫对猪苓( Polyporus umbellatus )菌丝生长与多糖物质积累的影响,采用不同质量浓度(0、50、100、150、200、250 g/L)PEG-6000处理,分析干旱胁迫下猪苓菌丝生长相关指标及多糖合成相关酶活性的变化。结果表明,100 g/L PEG-6000处理下,猪苓菌丝生物量、多糖合成相关酶活性及多糖质量分数最高,其中猪苓菌丝生物量、己糖激酶(HK)活性、磷酸葡萄糖异构酶(GPI)活性、α-磷酸葡萄糖变位酶(α-PGM)活性及多糖质量分数分别较对照组增加60.40%、27.88%、19.89%、28.73%和106.00%。当PEG-6000质量浓度>150 g/L时,猪苓菌丝生物量、过氧化物酶(POD)活性、超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)质量摩尔浓度、可溶性蛋白质量分数及多糖质量分数均随胁迫程度增大显著降低。因此,适度干旱胁迫有利于猪苓菌丝生长和多糖合成。

尼罗罗非鱼无乳链球菌荚膜多糖合成基因的表达及其与荚膜唾液酸含量、菌株致病性的关系

为了解尼罗罗非鱼无乳链球菌(GBS)荚膜多糖合成基因的表达及其与荚膜唾液酸含量、菌株致病性的关系,本实验克隆了尼罗罗非鱼荚膜多糖合成基因cps E、cps K和neu A,通过q RT-PCR方法分析了这3个基因在不同培养温度下表达水平的变化,同时通过比色法测定了不同培养温度下GBS荚膜唾液酸含量的变化,通过人工感染实验分析了不同水温条件下GBS对罗非鱼的致病性。结果显示,cps E、cps K和neu A编码的氨基酸序列均具有保守的与荚膜多糖合成相关的酶活性位点,Cps E、Neu A与已知鱼源GBS(Ia和Ib型)和人源GBS(Ia、Ib和II^IX型)相应序列的同源性均达到97%以上,而Cps K与鱼源、人源的序列同源性则分别为56%~100%和27%~100%。在不同培养温度下GBS cps K和neu A基因表达水平的变化与荚膜唾液酸含量的变化一致;在较高温度(28和34°C)下培养的GBS荚膜唾液酸含量及菌株攻毒后罗非鱼的死亡率均随温度的升高而递增,而在22°C下培养的GBS唾液酸含量最高,攻毒后罗非鱼的死亡率却最低。本研究结果表明,GBS Cps K和Neu A在GBS荚膜多糖的唾液酸化中起重要作用,较低温度下GBS荚膜唾液酸的高含量有助于其在宿主体内的潜伏,而较高水温条件下细菌的强致病性可能还与除荚膜唾液酸外的某些重要的毒力因子的表达有关。

花脸香蘑荧光定量PCR内参基因筛选及多糖合成代谢相关基因表达量测定

对适用于花脸香蘑(Lepista sordida)荧光定量PCR内参基因进行筛选,并检测花脸香蘑高产胞外多糖诱变菌株LS01_10_9及其出发菌株LS01_10多糖合成途径关键基因和多糖代谢途径基因表达量。结果表明:核糖体蛋白L4(ribosomal protein L4,rpl4)基因和3-磷酸甘油脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,gapdh)基因表达丰度高、扩增效率较好且稳定,是花脸香蘑荧光定量PCR理想的内参基因。与出发菌株LS01_10比较,高产胞外多糖诱变菌株LS01_10_9中5个参与多糖合成途径的关键基因GK、GMD-3、UGE、UGDG、PFK表达量显著增加,4个参与多糖代谢途径的基因GT-1、GT-2、NOX-3、NOX-4表达量显著增加。

烟曲霉多糖合成酶Cps1敲除菌株的构建及其鉴定

通过PCR获得左右同源臂和营养筛选片段,再经融合PCR获得特异性敲除cps1基因的线性整合片段,转化后得到的转化子通过诊断PCR鉴定菌株同源重组成功.菌落表型发现,烟曲霉cps1基因敲除后导致其菌落面积变小,形态呈褶皱状,孢子形成严重缺陷,产孢量只有野生型的2.9%,表明多糖合成酶Cps1参与了菌丝的生长和分生孢子的产生,使其致病性在一定程度上减弱.该发现将为临床控制曲霉病的感染和改进现有治疗策略提供新思路.