圣草酚对角质形成细胞和黑色素瘤细胞共培养体系中黑色素合成的促进作用

为了研究圣草酚对角质形成细胞(HaCaT)与黑色素瘤细胞(B16)共培养体系中细胞增殖、酪氨酸酶活性、黑色素含量以及酪氨酸酶(TYR)、酪氨酸相关蛋白1(TRP-1)、酪氨酸相关蛋白2(TRP-2)mRNA表达的影响,建立了HaCaT细胞与B16细胞体外共培养体系模拟“表皮黑色素形成单位”,分别采用MTT法测定细胞增殖率、多巴氧化速率法测定细胞酪氨酸酶激活率、氢氧化钠裂解法测定细胞黑色素合成率、实时荧光定量PCR法测定TYR、TRP-1、TRP-2的基因相对表达量。结果表明,圣草酚在低浓度下对共培养体系中的细胞无毒性作用,而且有明显的促增殖作用;12.5~50μmol·L^(-1)圣草酚对共培养体系中细胞酪氨酸酶活性有激活作用(P<0.001),并呈剂量依赖性;12.5~50μmol·L^(-1)圣草酚能显著提高共培养体系中细胞黑色素合成率(P<0.01或P<0.0001);12.5~50μmol·L^(-1)圣草酚能显著提高共培养体系中TYR的基因相对表达量(P<0.01或P<0.001),25~50μmol·L^(-1)圣草酚能显著提高共培养体系中TRP-1、TRP-2的基因相对表达量(P<0.01)。圣草酚可能通过促进TYR、TRP-1、TRP-2的mRNA表达来促进共培养体系中细胞酪氨酸酶活性提升和黑色素合成。

小分子化合物I942在UVB照射诱导人黑素细胞树突形成及黑色素合成的促进作用

目的:探究小分子化合物I942在UVB照射诱导人黑素细胞树突形成及黑色素合成的促进作用。方法:使用浓度为0、3.125、6.25、12.5、25、50μmol/L的小分子化合物I942处理正常永生化人表皮黑素细胞系PIG1,采用CCK-8法检测各组24、48、72 h时的细胞活力。将PIG1细胞分为对照组、UVB组、UVB+2.5μmol/L I942组、UVB+5μmol/L I942组、UVB+10μmol/LI942组,按照分组名称进行相应处理。多巴染色观察各组细胞形态,免疫荧光染色观察黑素小体及骨架蛋白F-actin分布情况,氢氧化钠裂解法测定黑色素含量,多巴氧化反应法测定酪氨酸酶活性。qRT-PCR、WB检测树突形态相关、黑色素合成相关mRNA与蛋白表达水平。结果:浓度为0、3.125、6.25、12.5、25、50μmol/L的小分子化合物I942对PIG1细胞活力无明显影响(P>0.05)。与对照组相比,UVB组、UVB+2.5μmol/L I942组、UVB+5μmol/L I942组、UVB+10μmol/L I942组细胞树突数量、gp100、F-actin、黑色素含量、酪氨酸酶活性、MITF、TYR、TRP-1、TRP-2、Rac1mRNA与蛋白水平均升高(P<0.05),RhoAmRNA与蛋白水平降低(P<0.05)。结论:小分子化合物I942结合UVB照射诱导能够增加黑素细胞的树突数量,提高细胞黑色素含量,提升酪氨酸酶活性,促进黑色素合成。

美白玉容汤对黑色素瘤细胞与角质形成细胞培养体系中细胞增殖与黑色素合成的影响

目的探讨不同浓度美白玉容汤对人黑色素瘤细胞A375与人永生化角质形成细胞(HaCaT)共培养体系下不同时间点细胞增殖的影响,同时观察其对共培养体系下黑色素合成的影响。方法建立人黑色素瘤细胞A375与HaCaT共培养体系,以不同浓度美白玉容汤处理共培养体系0、24、48、72 h,采用噻唑蓝(MTT)法在相应的时间测定细胞增殖比例,同时在共培养24 h后采用氢氧化钠(NaOH)裂解法测定细胞黑色素含量。结果与阴性对照组相比较,2.5、5、7.5、10、25、50 mg/mL美白玉容汤处理过后的抑制细胞增殖率均有明显上升(P<0.01),且表现出一定的时间梯度依赖性。在1~25 mg/mL的浓度范围内,各剂量美白玉容汤抑制黑色素合成率均明显上升(P<0.01)。结论美白玉容汤可有效抑制黑色素细胞与HaCaT共培养体系下细胞增殖及黑色素合成。

三肽D-Trp-Arg-Leu-NH2抑制B16黑色素瘤细胞黑色素合成的机制

为了研究三肽D-Trp-Arg-Leu-NH2(dWRL)对小鼠B16细胞的酪氨酸酶(TYR)活性、黑色素合成及相关基因和蛋白表达的影响,探讨dWRL抑制黑色素生成的可能机制,我们体外培养小鼠B16细胞,采用MTT法测定细胞增殖情况、L-多巴氧化法测定TYR活性、氢氧化钠裂解法测定细胞黑色素含量、qRT-PCR和Western Blot法分别检测药物作用后B16细胞中小眼畸形相关转录因子(MITF)、TYR的mRNA和蛋白表达水平。结果显示三肽dWRL在试验浓度范围内可明显抑制α-黑色素细胞刺激素(α-MSH)诱导的B16细胞内TYR活性、黑色素合成量及MITF、TYR基因及蛋白的表达量,且呈浓度依赖性。所以三肽dWRL在体外能抑制B16细胞黑色素的合成,上述变化可能是通过下调MITF和TYR的基因转录和蛋白表达作用来完成。

绵羊黑色素合成相关基因的研究进展

毛色是一种可利用的遗传标记。在确定杂交组合、品种纯度和亲缘关系以及评价产品质量等方面均有一定的用途。哺乳动物毛色是由黑色素细胞产生的真黑素和褐黑素二者的分布和比例决定的。控制哺乳动物毛色色素的基因有很多,着重对黑色素合成相关基因酪氨酸酶基因(TYR)、黑素皮质激素受体1基因(MC1R)、鼠灰信号蛋白基因(Agouti)、酪氨酸酶相关蛋白1基因(TYRP1)的生物学功能及其遗传变异机制进行了综述。

2种咖啡酸吗啉胺的合成及其对酪氨酸酶的激活和对黑色素合成的调控

合成了2种新型咖啡酸衍生物咖啡酸-2-氨乙基吗啉胺(C-1)和咖啡酸-N-氨丙基吗啉胺(C-2),并通过质谱、核磁共振以及红外光谱技术鉴定其结构.2种化合物对蘑菇酪氨酸酶具有良好的激活效果,其对于酪氨酸酶活性的半激活质量浓度(EC_(50))分别为0.06和0.12 mmol/L,且2种化合物的激活类型均为混合型激活.通过紫外-可见光谱法验证了C-1和C-2对酪氨酸酶的激活作用.通过荧光猝灭和分子模拟进一步分析了2种化合物与酪氨酸酶之间的相互作用,结果表明两者对酪氨酸酶的影响可能是基于化合物的碳链长度.2种化合物对人体正常肝细胞LO2无毒性,并能够增强人体黑色素瘤细胞M14中的酪氨酸酶活力.进而对M14细胞中黑色素合成相关蛋白的研究发现,2种化合物对酪氨酸酶蛋白(TYR)、酪氨酸酶家族相关蛋白(TRP-1和TRP-2)以及α-促黑色素激素(α-MSH)的表达量均起上调作用.综上所述,该化合物有望提供一种有效治疗酪氨酸酶失调的新方法.

葡萄籽提取物对B16细胞内黑色素合成的抑制作用

为探讨葡萄籽提取物(GSE)对细胞内黑色素合成的抑制作用以及可能的作用机制,为GSE作为美白化妆品的天然添加剂提供实验依据,采用高表达黑色素的小鼠黑素瘤细胞(B16)为细胞模型,观察在细胞培养液中添加不同质量浓度的GSE后,黑色素生成量的变化,黑色素生成的关键酶——酪氨酸酶的表达量及活性的变化以及对B16细胞增殖的影响。结果表明,GSE在质量浓度为100 mg·L-1时,对B16细胞内黑色素合成的抑制率为(50.05±0.21)%,对细胞内酪氨酸酶活性的抑制率为(34.89±0.17)%,细胞内酪氨酸酶表达量受到抑制,且均呈质量浓度依赖性抑制作用;在培养过程中,B16细胞的增殖没有受到影响。说明GSE对B16细胞内黑色素的合成具有显著的抑制作用,其抑制机制可能是GSE抑制了酪氨酸酶蛋白的表达以及降低该酶的活性。GSE是一种高效的黑色素合成抑制剂,可作为美白化妆品的天然添加剂。

和厚朴酚对小鼠黑色素瘤B16细胞增殖以及黑色素合成的影响

目的探讨和厚朴酚对小鼠黑色素瘤B16细胞增殖以及细胞内黑色素合成的影响。方法体外培养小鼠B16细胞,MTT法检测和厚朴酚对B16细胞增殖的影响;DAPI染色法观察和厚朴酚对B16细胞细胞形态的影响;NaOH裂解法检测和厚朴酚对黑色素含量的影响。结果和厚朴酚浓度为51、0、204、0、80μmol/L作用B16细胞,在不同的用药时间122、4和48 h,和厚朴酚对B16细胞增殖的IC50分别为23.41、3.1和11.4μmol/L;同时和厚朴酚作用B16细胞12 h后,经DAPI染色,B16细胞呈现典型的凋亡形态;另外采用204、0、80μmol/L的和厚朴酚分别作用B16细胞,B16细胞内黑色素合成量也呈现降低的趋势。结论和厚朴酚能有效地抑制B16细胞增殖,且其抑制作用具有时间和浓度依赖性;药物作用后的B16细胞呈现凋亡形态并出现凋亡小体;和厚朴酚对B16细胞内黑色素合成也呈现抑制作用但不明显。

微生物来源的黑色素生物合成抑制剂H7264的研究

通过建立的用链霉菌 X5 9为鉴定菌的黑色素生物合成抑制剂筛选模型 ,从 4 0 0 0余个微生物代谢产物中找到一株活性化合物产生菌。该菌从四川省宜宾地区土壤中分离 ,编号 SIIA- H72 6 4。该菌种经鉴定为链霉菌 ,其代谢产物 H72 6 4 A和 H72 6 4 B结构论证与化合物 Enopeptin A,B同质 ,但 Enopeptin尚未发现其有抑制黑色素生物合成活性。

三叶青脂溶性提取物对A375细胞增殖及黑色素合成的影响

目的探讨三叶青三氯甲烷提取物对人恶性黑色素瘤A375细胞增殖、酪氨酸酶活性及黑色素合成的影响。方法采用MTT比色法,测定不同浓度三叶青三氯甲烷提取物对A375细胞体外抑制作用;比色法测定酪氨酸酶活性和黑色素含量;采用光学显微镜法观察其对细胞形态的影响。结果三叶青三氯甲烷提取物在6～500μg/ml浓度范围内对A375细胞增殖有显著的抑制作用(P<0.01),且呈时间-剂量依赖性;浓度小于50μg/ml时,对酪氨酸酶活性和黑色素合成抑制有增加趋势;在100～500μg/ml时,对A375肿瘤细胞有较强的抑制作用;光学显微镜下可见典型凋亡细胞形态学改变。结论三叶青三氯甲烷提取物对A375细胞增殖、酪氨酸酶活性及黑色素合成具有抑制作用。

三叶青提取物对A375细胞增殖、酪氨酸酶活性及黑色素合成的影响

目的探讨三叶青乙醇提取物对人恶性黑色素瘤A375细胞增殖、酪氨酸酶活性及黑色素合成的影响。方法 采用MTT比色法,测定不同浓度三叶青乙醇提取物对A375细胞体外抑制作用;比色法测定酪氨酸酶活性和黑色素含量。结果在质量浓度为1～625μg/ml范围内,随着三叶青乙醇提取物浓度增大可抑制A375细胞的增殖(P<0.01);三叶青乙醇提取物浓度在1～5μg/ml时,对酪氨酸酶活性和黑色素合成抑制有增加趋势;而在25～625μg/ml时,对A375细胞有一定毒性。结论三叶青乙醇提取物在一定浓度范围内(1～625μg/ml)能抑制A375细胞的增殖,且呈剂量依赖关系。

黑色素的合成与美白产品的研究进展

随着环境污染对大气臭氧层的不断破坏,越来越多的紫外线照射到地球表面,加重了人类皮肤色素沉积异常.本文将介绍黑色素的合成过程,并综述黑色素合成过程中的关键限速酶——酪氨酸酶(TYR)的调控方式和相关信号通路的最新研究进展,还介绍了影响黑色素合成的重要因素,为黑色素抑制剂的研发提供理论依据.此外,本文还综述了目前市场上常见的几类美白产品及其特点,旨在让人们重视肌肤色素沉着问题,并关注对皮肤黑色素产生进行科学护理.

黑色素生物合成和黑色素抑制剂

本文概述了黑色素生物合成及常见调控黑色素形成的信号通路,并介绍了黑色素抑制剂的研究进展及其抑制机理,为黑色素抑制剂在医疗及化妆品领域的研究及潜在应用提供参考.

去甲斑蝥素对抑制人A375黑素瘤细胞增殖、黑色素合成及酪氨酸酶活性的研究

目的以人A375黑素瘤细胞为实验模型,研究去甲斑蝥素对黑素瘤细胞的增殖、黑色素含量及酪氨酸酶活性的影响。方法培养人A375黑素瘤细胞,采用10、20、40、80μmol/L的去甲斑蝥素预处理,培养24 h和48 h后,四甲基偶氮唑蓝比色法测定细胞增殖活性;Na OH裂解法测定细胞黑色素含量;加入左旋多巴液法测定细胞酪氨酸酶活性。结果 10μmo/L去甲斑蝥素作用在人A375黑素瘤细胞24 h后,去甲斑蝥素明显的抑制该细胞的增殖活性(P<0.05)。但是对该细胞黑色素含量以及酪氨酸活性没有明显的作用(P>0.05)。20~80μmol/L的去甲斑蝥素作用在人A375黑素瘤细胞24 h后,明显抑制该细胞增殖活性、黑色素合成以及酪氨酸酶活性(P<0.05或<0.01)。20~40μmo/L的去甲斑蝥素处理人A375黑素瘤细胞24 h和48 h后,该细胞的增殖活性、黑色素含量以及酪氨酸酶活性出现不同程度降低,差异有统计学意义(P<0.05或<0.01)。结论低浓度(10μmol/L)去甲斑蝥素仅有抑制人A375黑素瘤细胞增殖的作用,而高浓度(20~80μmol/L)的去甲斑蝥素不仅具有抑制人A375黑素瘤细胞增殖的作用,还具有抑制人A375黑素瘤细胞的黑色素合成以及酪氨酸酶活性的作用。

培养基诱导B16细胞黑色素合成及机理研究

研究不同培养基对B16细胞体外培养生物学特性的影响及其黑色素表达能力与相关分子作用机制.方法:利用不同培养基对B16细胞进行体外连续传代培养,考查培养基对细胞形态、细胞成活率、细胞周期和黑色素合成等方面的影响.同时,借助RT-PCR、Western Blot和双向电泳等技术,研究与黑色素生物合成相关蛋白质的表达水平.结果:B16细胞在Gibco-RPMI-1640-31800和Gibco-DMEM-12800这两种培养基中培养时,细胞外观形态良好、细胞活力强、传代周期短并且均可稳定连续传代培养,两者的细胞周期也一致;B16细胞在GibcoRPMI-1640-31800培养基中基本不合成黑色素,而在Gibco-DMEM-12800培养基能大量合成黑色素.分析B16细胞中三种黑色素合成相关蛋白质(Tyrosinase,Tyrosinase-related protein 1和Tyrosinase-related protein 2)在以上两种培养基中表达的差异,发现这三种蛋白质的m RNA转录水平基本没有差异,在Gibco-DMEM-12800培养基中这三种蛋白质的翻译水平均明显提高,总蛋白质组也更加多样.结论:Gibco-DMEM-12800培养基通过提高Tyrosinase、TRP1和TRP2等三种蛋白质的翻译水平使B16细胞黑色素大量合成.

铜肽PLGA纳米粒子对黑素细胞黑色素合成作用的研究

铜肽(GHK-Cu)是甘氨酰组氨酰赖氨酸三肽与铜的络合物,具有多种生物活性.以乳酸-乙醇酸共聚物(PLGA)为载药材料制备铜肽PLGA纳米粒子,并研究其对黑素细胞酪氨酸酶活性和黑色素合成的作用.实验结果表明:铜肽对蘑菇酪氨酸酶具有激活作用;PLGA纳米粒子中铜肽的包封率为40.12%,粒径大小为100～200nm,在透射电镜下为大小均匀的圆形粒子.铜肽PLGA纳米粒子可以将铜肽成功导入黑色素细胞内,激活酪氨酸酶的活性并增加黑色素的含量.研究结果为研究铜肽PLGA纳米粒子对色素减退或色素脱失性皮肤病的治疗作用提供了初步的实验依据.

MC1R c.676A>G与山羊皮肤色素沉积的关系及其对黑色素合成的影响

为探讨山羊MC1R基因c.676A>G突变与山羊皮肤色素沉积的关系,及其对黑色素合成和cAMP信号通路下游色素相关基因表达的影响:一方面采用直接测序法检测酉州乌羊及其杂交后代群体(120个个体)MC1R基因c.676A>G的突变情况,用色差仪测量不同基因型个体的腹部皮肤色度值,分析c.676A>G突变与皮肤色素沉积的关系;另一方面,构建野生型(MC1R c.676A)和突变型(MC1R c.676G)真核表达载体,采用脂质体介导法转染到小鼠皮肤黑色素瘤细胞(B16-F10)中进行过表达,利用酶标仪检测各组细胞黑色素含量的差异,并通过实时荧光定量PCR方法检测各组细胞中cAMP信号通路下游色素相关基因(MITF、TYR、TYRP 1、DCT)的表达差异性。结果显示:酉州乌羊及其杂交后代群体中,c.676A>G位点均以GG基因型占优势,不同基因型群体的皮肤色度值差异不显著(P>0.05)。MC1R突变组(MC1R c.676G)细胞中的黑色素含量极显著(P<0.05)高于MC1R野生组(MC1R c.676A)。MITF、TYRP 1和DCT基因在MC1R突变组中的相对表达量极显著(P<0.01)高于野生组,TYR基因在MC1R突变组细胞中的相对表达量显著(P<0.05)高于野生组。综上,MC1R基因c.676A>G不直接影响山羊皮肤色素沉积,但MC1R c.676G能促进B16-F10细胞中黑色素的合成,也能促进cAMP信号通路下游MITF、TYR、TYRP 1和DCT等基因的表达,推测MC1R基因c.676A>G与黑色素合成密切相关。

黑色素生物合成抑制剂的初步研究

利用比基尼链霉菌筛选模型和急性细胞毒性试验从 170 0株放线菌中筛选出编号为MBI 3 9-2 4的菌株作为黑色素生物合成抑制剂研究的试验菌株 ,并初步鉴定为秃裸链霉菌 (Streptomycescalvus)。借鉴了一些天然药物的提取和分离方法 ,分离出 4种具有抑制黑色素生物合成活性的单峰物质 ,并将其对B16鼠黑素瘤细胞中黑色素合成的抑制效果进行了评价 ,确定了抑制效果最好的单峰物质MBI -3 # ,其对于B16鼠黑素瘤细胞中黑色素合成的抑制活性为 15 μg/mL ,细胞毒性与最小抑制浓度的比值为 16 67。

大黄粉虫幼虫体内黑色素合成相关蛋白的鉴定

目的鉴定大黄粉虫幼虫体内与酚氧化酶（PO）诱导的黑色素合成相关的蛋白（MAPs）。方法体外诱导大黄粉虫幼虫血淋巴中黑色素合成反应，对上清液中的蛋白质进行SDS-PAGE分析，比较黑色素合成前后、合成过程中及在苯硫脲存在下蛋白质的变化，对黑色素合成过程中消失的蛋白进行氨基端氨基酸序列分析。结果6条蛋白带（MAP-1～6）呈时间依赖性地从黑色素合成反应的上清液中消失。苯硫脲可阻断此反应而取消蛋白的消失；氨基端氨基酸序列分析表明MAP-1，2为已知的大黄粉虫卵黄素样蛋白，MAP-3，4，5为未知蛋白，MAP-6为已知的大黄粉虫干燥蛋白。结论大黄粉虫幼虫血淋巴中至少5种蛋白与PO诱导的黑色素合成反应特异性相关。

黑色素生物合成抑制剂产生菌株的筛选

采集了中国 1 1个省的土样和草样共 2 3 1份 ,分离出了 1 70 0株链霉菌 .筛选结果是 :3 9 2 4号菌株在比基尼链霉菌筛选模型中抑制圈的直径为 2 0mm ,属于直径较大者 ;其黑色素生物合成抑制剂初提物对CV 1细胞的急性细胞毒性 (致毒质量浓度 )为 1 0mg/mL ,属于毒性较小者 .根据以上试验结果 ,作者确定 3 9 2 4号菌株为黑色素生物合成抑制剂研究的试验菌株 .