合欢皮总皂苷对雄性小鼠的抗生育作用研究

目的探讨合欢皮总皂苷对雄性小鼠的抗生育作用。方法将60只健康的雄性性成熟昆明小鼠随机分成3个试验组和1个对照组,各试验组小鼠灌胃540 mg·(kg·d)-1,270 mg·(kg·d)-1和135 mg·(kg·d)-1的合欢皮总皂苷水溶液,对照组自由饮水,灌胃1周后按雌雄比2∶1合笼,继续对雄鼠灌胃至19 d,采集雄性小鼠的血液并测定血液生化指标,剖检灌胃雌性小鼠,统计雌性小鼠的怀孕率,测定雄性小鼠睾丸与附睾的脏器系数及附睾精子活力,并固定睾丸和附睾,研究其组织学变化。结果与对照组相比较,雄性小鼠灌胃合欢皮总皂苷后,导致雌性小鼠的怀孕率降低,睾丸脏器系数和附睾精子活率极显著降低(P<0.01),精子畸形率极显著升高(P<0.01)。光学显微镜下,试验组小鼠睾丸和附睾均有一定程度的损失,睾丸生精细胞排列疏松,间质减少,可见曲细精管内有多核巨噬细胞浸润,各级生精细胞脱落。附睾具正常的管腔结构,但能明显观察到管腔内精子几乎消失。结论合欢皮总皂苷对雄性小鼠具有抗生育作用,主要通过影响精子的生成及破坏生精组织而达到。

合欢皮总皂苷对小鼠神经系统的SOD、GSH-PX活性及COX-2、CaN表达的影响

目的通过观察合欢皮总皂苷对小鼠神经系统的SOD、GSH-PX活性及COX-2、Ca N表达的影响,研究其毒性机制。方法实验分为正常对照组、合欢皮总皂苷小剂量致毒组(7.5 mg/kg)及合欢皮总皂苷大剂量致毒组(750mg/kg),一次性灌胃给药,观察给药前及给药14 d时小鼠自主活动次数,比色法检测脑组织超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性,链霉亲和素-生物素复合物(SABC)免疫组化试剂盒检测环氧化酶-2(COX-2)、钙调神经磷酸酶(Ca N)的表达。结果合欢皮总皂苷致毒剂量可降低小鼠自主活动次数;与正常对照组比较,给药组脑组织中Ca N表达降低;COX-2表达增高,有显著差异性,与合欢皮总皂苷小剂量致毒组比较,合欢皮总皂苷大剂量致毒组脑组织中Ca N表达降低,COX-2表达增高,有显著差异性。与正常对照组比较,给药组脑组织中SOD和GSH-PX活性均降低,有显著差异性;与合欢皮总皂苷小剂量致毒组比较,合欢皮总皂苷大剂量致毒组脑组织中SOD活性降低,GSH-PX活性增高,但无差异性。结论合欢皮总皂苷致毒剂量对神经系统有毒性作用,可能与总皂苷降低SOD、GSH-PX活性,同时增高COX-2表达、降低Ca N表达有关。

合欢皮总皂苷对人微血管内皮细胞增殖的影响

目的:研究合欢皮总皂苷对人微血管内皮细胞(HMEC-1)增殖的影响。方法:采用人脐静脉微血管内皮细胞作为研究模型,经不同剂量合欢皮总皂苷作用24、48 h后,应用SRB法、HE染色法观察合欢皮总皂苷对HMEC-1细胞增殖、形态的影响;应用Hoechst染色法、扫描电镜、流式细胞仪PI单染方法分析合欢皮总皂苷对HMEC-1细胞生长的影响。结果:合欢皮总皂苷提取物具有抑制血管内皮细胞增殖的作用,其与时间、剂量均存在依赖关系,作用48 h的IC50为1.5μg/mL;合欢皮总皂苷使HMEC-1细胞周期阻滞在亚G0/G1期,高剂量作用48 h后可能引起细胞产生坏死。结论:合欢皮总皂苷通过影响细胞周期,部分引起细胞坏死,从而抑制人微血管内皮细胞增殖及血管形成。

合欢皮总皂苷对人微血管内皮细胞体外增殖的影响

研究合欢皮总皂苷对人微血管内皮细胞增殖的药效学影响。采用人脐静脉微血管内皮细胞HMEC-1作为研究模型,经不同剂量合欢皮总皂苷作用48、72 h后,应用SRB法、光学显微镜观察合欢皮总皂苷对HMEC-1细胞增殖、形态的影响;应用台盼蓝染色法、DNA梯形条带法、流式细胞仪PI单染方法分析合欢皮总皂苷对HMEC-1细胞生长的影响。实验结果发现合欢皮总皂苷提取物具有抑制血管内皮细胞增殖的作用,其与时间、剂量均存在依赖关系,作用48 h的IC50为1.5μg/mL;合欢皮总皂苷使HMEC-1细胞周期阻滞在亚G0/G1期,高剂量作用48 h后可能引起细胞产生坏死。因此,合欢皮总皂苷可能通过改变细胞周期,部分引起细胞坏死,从而抑制人微血管内皮细胞的增殖。

合欢皮总皂苷治疗旋毛虫感染小鼠的疗效观察

目的研究合欢皮总皂苷对感染旋毛虫小鼠的治疗效果。方法将36只感染旋毛虫的ICR小鼠随机分为6组(每只小鼠感染300条旋毛虫),每组6只。组Ⅰ-Ⅲ为成虫组:组Ⅰ为感染对照组,组Ⅱ为合欢皮总皂苷治疗组,组Ⅲ为阿苯达唑治疗组;组Ⅳ-Ⅵ为肌幼虫组:组Ⅳ为感染对照组,组Ⅴ为合欢皮总皂苷治疗组,组Ⅵ为阿苯达唑治疗组。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组于感染后第2d开始给药,连续给药3d,于感染后第7d处死,计数小肠内成虫;Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ组于感染后第7d开始给药,连续给药14d,于感染后第40d处死,计数肌幼虫并计算减虫率,HE染色计数肌幼虫,免疫组化检测膈肌中IL-1β,IL-6,TNF-α,COX-2因子的表达。结果合欢皮总皂苷和阿苯达唑治疗组成虫数和肌幼虫数均少于感染对照组(P<0.01),成虫减虫率分别为71.60%和81.24%,肌幼虫减虫率分别为65.70%和89.94%;HE染色结果表明两个治疗组囊包幼虫均减少,炎症细胞表达均明显减轻;免疫组化结果显示治疗组IL-1β,IL-6,TNF-α,COX-2的表达降低。结论合欢皮总皂苷对旋毛虫成虫和囊包幼虫均有较好的杀虫效果,虽然效果略次于阿苯达唑,但其作为中药提取物毒性较低。

合欢皮总皂苷对小鼠呼吸系统的毒性及机制研究

目的:研究合欢皮总皂苷对小鼠呼吸系统的毒性及机制。方法:以昆明小鼠为受试对象,实验随机分为生理盐水对照组、合欢皮总皂苷低剂量致毒组(7.5 mg/kg)、合欢皮总皂苷高剂量致毒组(750 mg/kg),灌胃给药14d后,气管插管术,生物信号记录系统记录呼吸的频率和幅值。取肺组织,HE染色观察病理形态的变化,生化法测定肺组织SOD和GSH-Px活性,末端标记法(TUNEL法)检测肺组织细胞凋亡,免疫组织化学法检测肺组织COX-1、COX-2基因蛋白的表达。结果:合欢皮总皂苷致毒剂量对小鼠呼吸频率和幅值无显著影响;肺组织病理变化明显,其SOD、GSH-Px活性与生理盐水组比较致毒组肺组织SOD和GSH-Px的活性显著降低,与低剂量致毒组比较高剂量致毒组SOD活性显著降低而GSH-Px活性无显著差异;与对照组比较,致毒组肺间质及支气管黏膜上皮细胞凋亡数目增多,COX-2表达增加,COX-1表达无显著改变。结论:致毒剂量合欢皮总皂苷对小鼠呼吸频率和肺通气量无明显影响,对呼吸系统的毒性主要表现在促使支气管黏膜上皮细胞凋亡、肺组织的氧化损伤及炎症反应。

合欢皮总皂苷对H22荷瘤小鼠细胞免疫功能的影响

目的:观察合欢皮总皂苷对H22荷瘤小鼠CD4+和CD8+T淋巴细胞亚群、细胞因子白细胞介素-2(IL-2)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,凋亡诱导因子(Fas),凋亡诱导因子配体(Fas L)和增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达的影响,探讨其对细胞免疫功能的干预机制。方法:昆明种小鼠60只随机分为正常组、模型组、环磷酰胺组、合欢皮总皂苷高、中、低剂量组,建立小鼠H22荷瘤模型。给药组分别按环磷酰胺20 mg·kg-1·d-1,合欢皮总皂苷4,2,1 mg·kg-1·d-1ip,连续治疗11 d后,检测抑瘤率,血清IL-2,TNF-α水平,免疫组化染色检测肿瘤细胞Fas,Fas L和PCNA蛋白的表达;苏木素-伊红(HE)染色观察肿瘤组织形态。结果:与模型组比较,合欢皮总皂苷高、中、低剂量组小鼠移植瘤的平均质量均显著下降(P<0.05,P<0.01),合欢皮总皂苷中剂量组能明显提高CD4+T细胞,CD8+T细胞数量(P<0.05,P<0.01),对CD4+/CD8+无影响,合欢皮总皂苷中、高剂量组IL-2水平明显上升(P<0.05),TNF-α水平无变化,合欢皮总皂苷各剂量组Fas L,PCNA蛋白表达显著降低(P<0.01),中、高剂量组Fas表达水平显著升高(P<0.01)。结论:合欢皮总皂苷能够调节细胞免疫功能,其机制可能与其上调CD4+,CD8+T细胞亚群,促进IL-2分泌,提高Fas蛋白表达并抑制Fas L,PCNA蛋白表达有关。