吉富罗非鱼IRF9基因克隆及表达特征分析

【目的】明确吉富罗非鱼(Oreochromis niloticus)干扰素调节因子9基因(OnIRF9)的结构特征和组织表达模式,以及无乳链球菌感染和Poly(I:C)刺激后的免疫应答情况,为揭示IRF9在罗非鱼免疫应答中的作用机制提供理论依据,进而丰富鱼类的IRF免疫学知识。【方法】通过RACE扩增OnIRF9基因cDNA序列,通过ExPASy、SMART、SignalP-5.0、TMHMM-2.0和Euk-mPLoc 2.0等在线软件进行生物信息学分析,并采用实时荧光定量PCR检测OnIRF9基因在健康吉富罗非鱼组织中的表达特征及无乳链球菌感染和Poly(I:C)刺激后的表达变化。【结果】OnIRF9基因cDNA序列全长1828 bp,包含50 bp的5'端非编码区(5'-UTR)、485 bp的3'端非编码区(3'-UTR)和1293 bp的开放阅读框(ORF),共编码430个氨基酸残基。OnIRF9蛋白分子量为48.42 kD,理论等电点(pI)为6.23,含有IRF典型的DBD结构域和IAD结构域,不含信号肽和跨膜结构域。OnIRF9氨基酸序列与其他硬骨鱼类IRF9氨基酸序列的相似性为56.2%~95.7%,其中与美妊丽鱼IRF9氨基酸序列的相似性最高(95.7%);基于IRF9氨基酸序列相似性构建的系统发育进化树也显示,吉富罗非鱼与其他参考鱼类聚为一簇,尤其与美妊丽鱼的亲缘关系最近。OnIRF9基因在健康吉富罗非鱼脑、血液、肌肉、肝脏、皮肤、心脏、脾脏、头肾、肠道和鳃组织中均有表达,以脑组织中的相对表达量最高,显著高于其他组织(P<0.05),而鳃组织中的相对表达量最低。经无乳链球菌感染和Poly(I:C)刺激后,OnIRF9基因在吉富罗非脾脏、头肾和脑组织中的相对表达量在6 h内均极显著上升(P<0.01),但其相对表达量达到峰值的时间并不一致,提示OnIRF9基因在各组织中响应免疫应答时可能具有互补协调性。【结论】OnIRF9具有IRF典型的结构域(DBD和IAD),尤其是DBD结构域的功能在脊椎动物中较保守;OnIRF9基因在中枢神经系统中发挥重要作用,且参与吉富罗非鱼抵御病原体入侵的免疫应答反应。

饲料EPA和ALA激活PPARα在吉富罗非鱼脂代谢中的降脂作用

为探讨脂肪酸激活过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARα)在吉富罗非鱼脂代谢中的降脂效应,实验采用离体和在体试验相结合的方法进行研究。实验初期选用7种单体脂肪酸[油酸(OA)、棕榈酸(PA)、亚油酸(LA)、α-亚麻酸(ALA)、花生四烯酸(AA)、二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳六烯酸(DHA)]孵育罗非鱼原代肝细胞,并采用荧光定量PCR检测脂代谢相关指标。结果显示,与对照组相比,ALA、AA和EPA显著上调PPARα、肉碱棕榈酰基转移酶(CPT1)、脂酰辅酶A氧化酶(ACO)等脂肪酸分解代谢关键基因表达,ALA还分别上调脂肪水解脂肪甘油三脂脂肪酶(ATGL)、激素敏感脂肪酶(HSL)和脂肪酸转运相关基因脂蛋白酯酶(LPL)的表达,EPA则同时抑制脂合成基因乙酰辅酶A羧化酶(ACC)的表达,ALA、EPA和AA均能降低细胞内甘油三酯(TG)含量。PA和OA则使细胞内TG含量显著上升。综合数据,筛选出2种不同基因激活模式效应脂肪酸EPA和ALA设计在体实验,分别设置正常脂(7%)组、高脂(12%)组以及高脂分别含ALA(0.6%、1.2%)、EPA(0.6%、1.2%)的6组半纯化饲料,饲喂初始体重为(3.53±0.03)g的吉富罗非鱼8周。结果显示,各组间生长无显著差异,与高脂组相比,4个处理组均能显著降低罗非鱼体脂,且随着ALA和EPA含量增加,肥满度、肝体脂数、肠系膜脂肪指数逐渐降低,血清和肝脏TG和胆固醇含量降低。血清谷草转氨酶、谷丙转氨酶、超氧化物歧化酶各组间无显著差异。EPA(1.2%)组肝脏丙二醛含量显著升高,还可显著提高肝脏脂代谢相关基因(PPARα、CPT1、ACO、ATGL、HSL)的表达,促进脂分解代谢及降脂。研究表明,饲料含0.6%的EPA或ALA即可上调PPARα及其脂分解代谢相关靶基因表达,发挥降脂效应。本研究结果为饲料配制与脂肪源筛选提供参考。

益生菌制剂对吉富罗非鱼生长性能的影响

为研究饲料中添加不同水平益生菌制剂对吉富罗非鱼生长性能的影响,设A组、B组、C组3个试验组和1个对照组(D组),分别按0.2%、0.4%、0.6%和0%四个水平在基础饲料中添加益生菌制剂。试验周期为6周。试验结束,测定分析各组吉富罗非鱼主要生长指标。结果显示,吉富罗非鱼末重B组显著高于对照组(P<0.05);增重率和特定生长率各试验组均高于对照组(P<0.05);饲料系数B组显著低于对照组(P<0.05)。

饲料中添加刺五加对吉富罗非鱼脂质沉积、抗氧化能力及肠道消化酶和微生物的影响

为明确饲料中添加刺五加(Acanthopanax senticosus)超微粉对吉富罗非鱼(Oreochromis niloticus)脂质沉积、抗氧化能力及肠道消化酶和微生物的影响,通过为期8周的饲养试验,在饲料中添加4‰的刺五加超微粉(中草药添加剂),对比研究饲料添加刺五加后吉富罗非鱼肠道消化酶、肝脏生化指标和肠道微生物组成的变化。结果表明:(1)饲料添加4‰的刺五加超微粉可以显著提高肠道消化酶(淀粉酶、脂肪酶和胰蛋白酶)含量,罗非鱼生长速度和饲料利用效率均显著升高;(2)饲料添加4‰的刺五加超微粉可以显著降低肝脏甘油三酯(Triglyceride,TG)和总胆固醇(Total cholesterol,TC)水平,同时肝脏丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量降低、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)活性升高;(3)饲料添加4‰的刺五加超微粉可以显著影响肠道微生物组成,提升肠道微生物alpha多样性,部分多样性指数与淀粉酶、脂肪酶、SOD显著正相关,与TC、TG显著负相关;(4)变形菌门(Proteobacteria)、梭杆菌门(Fusobacteria)和厚壁菌门(Firmicutes)是吉富罗非鱼肠道优势菌门。筛选出的核心差异菌属是显著富集于对照组的肠弧菌属(Enterovibrio)、鲸杆菌属(Cetobacterium)和霍氏弧菌属(Grimontia),显著富集于刺五加添加组的劳森氏菌属(Lawsonia)、不动杆菌属(Acinetobacter)、假单胞菌属(Pseudomonas)和短螺旋体属(Brevinema),在吉富罗非鱼肠道内存在着一定丰度的潜在致病菌。(5)PICRUSt2功能预测表明代谢(Metabolism)在一级功能层显著富集,对照组疾病(Human diseases)代谢通路相对丰度显著高于刺五加添加组,两个处理组在二级功能层有相似的分布特征,肠道菌群的多样性功能将在代谢中发挥重要作用。综上,饲料中添加刺五加超微粉可以影响吉富罗非鱼的肠道酶活、肝脏生化指标和肠道菌群组成和功能,促进罗非鱼的健康生长。

饲料中添加辅酶Q10对吉富罗非鱼幼鱼生长、抗氧化能力和组织结构的影响

以含辅酶Q10(CoQ10)分别为0、40、80和120 mg/kg的4种饲料饲喂平均初始体重为(19.97±0.13) g的吉富罗非鱼(Oreochromis niloticus, GIFT)幼鱼56d,探讨辅酶Q10对吉富罗非鱼幼鱼生长性能、体成分、抗氧化能力、组织结构和基因表达的影响。结果显示,各辅酶Q10组吉富罗非鱼幼鱼的终末体重、摄食率、特定生长率和饲料效率与对照组均无显著差异, 120 mg/kg辅酶Q10组终末体重、特定生长率和饲料效率均为最高;辅酶Q10含量为120 mg/kg时,吉富罗非鱼幼鱼的干物质消化率显著升高;各辅酶Q10组血清过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性均显著高于对照组;各辅酶Q10组肝脏CAT和GSH-Px活性均显著高于对照组, 80和120 mg/kg辅酶Q10组肝脏总超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽S转移酶(GST)活性均显著升高,丙二醛(MDA)含量显著降低;各实验组去内脏全鱼的水分、粗蛋白和灰分含量均无显著性差异, 120 mg/kg辅酶Q10组去内脏全鱼粗脂肪显著低于对照组;各实验组内脏团水分、粗蛋白、粗脂肪和灰分含量均无显著性差异;各实验组肝脏组织学观察未发现明显的结构变化, 120 mg/kg辅酶Q10组肠道绒毛长度、绒毛密度和肌层厚度显著增加;120 mg/kg辅酶Q10组的肝脏sod、cat、gsh-px、gst和igm基因表达量显著上调,各辅酶Q10组的il-1β和il-8基因表达量均显著低于对照组;在嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)腹腔注射攻毒实验中, 80与120 mg/kg辅酶Q10组吉富罗非鱼幼鱼累计存活率均显著高于对照组。结果表明,饲料中添加辅酶Q10≤120 mg/kg对吉富罗非鱼幼鱼无不良损伤,饲喂120 mg/kg辅酶Q10能提高吉富罗非鱼幼鱼的消化率、抗氧化能力、肝脏抗氧化相关基因的表达和对嗜水气单胞菌的抗病力。

硫酸铜、敌百虫、聚维酮碘对吉富罗非鱼的急性毒性及组织病理学研究

为评估水产养殖中常用药物——硫酸铜、敌百虫、聚维酮碘的合理给药量及其安全性,以及对吉富罗非鱼(Oreochromis niloticus)的毒害作用,采用静态急性毒性试验法,研究了这3种药物对吉富罗非鱼鱼苗的急性毒性及组织病理影响。结果表明,硫酸铜对吉富罗非鱼24、48和96 h的半致死浓度(LC50)分别为13.715、10.351和5.896 mg∙L^(−1),安全浓度(SC)为1.769 mg∙L^(−1);敌百虫对吉富罗非鱼24、48和96 h的LC50分别为43.036、25.887和16.689 mg∙L^(−1),SC为2.810 mg∙L^(−1);聚维酮碘对吉富罗非鱼24、48和96 h的LC50分别为10.509、9.301和8.674 mg∙L^(−1),SC为2.190 mg∙L^(−1)。组织病理学研究结果显示,硫酸铜暴露可造成鳃丝轮廓模糊不清、鳃组织空泡化,肝组织空隙变大、空泡化、细胞核萎缩,脑组织神经纤维出现破损、细胞凋亡,肾小管结构破坏、核膜破损;敌百虫暴露可造成鳃组织破坏、细胞凋亡,肝组织无核化、线粒体肿胀及空泡化,脑组织神经纤维破损、核固缩,肾间质出血;聚维酮碘暴露可造成鳃丝萎缩、线粒体双层膜结构不完整,肝组织空泡化、细胞出现凋亡,神经纤维轻微破损。研究表明,硫酸铜、敌百虫、聚维酮碘对于该研究规格的吉富罗非鱼是较为安全的药物,但需谨慎控制使用剂量,以免造成不可逆的组织损伤。

黄芪多糖对吉富罗非鱼生长和免疫功能的影响

试验旨在研究黄芪多糖(APS)对吉富罗非鱼生长性能和免疫功能的影响。选取外观正常、体质健壮、平均体重(19.32±0.23) g的吉富罗非鱼450尾,随机分为5组,每组3个重复,每个重复30尾鱼。对照组鱼投喂基础饵料,试验组在基础饵料中添加0.05%(0.05%组)、0.10%(0.10%组)、0.15%(0.15%组)和0.20%(0.20%组) APS。试验期28 d。结果显示,与对照组相比,0.10%组、0.15%组吉富罗非鱼的增重率显著提高(P<0.05),饵料系数显著降低(P<0.05)。试验第7 d,试验组吉富罗非鱼血清中的溶菌酶(LSZ)、超氧化物歧化酶(SOD)和碱性磷酸酶(ALP)活性均显著高于对照组(P<0.05)。使用无乳链球菌攻毒10 d后,0.20%组罗非鱼的免疫护率最高(61.25%),0.15%组次之(56.41%)。研究表明,从生长性能、免疫指标和经济角度综合考虑,吉富罗非鱼生产中建议添加0.15%的APS。

饲料磷水平对吉富罗非鱼营养代谢和肠道微生物的影响

为研究饲料不同磷水平对吉富罗非鱼营养代谢及肠道微生物的影响,实验以磷酸二氢钙作为磷源,配制成总磷含量为0.26%(低磷组)、0.81%(适磷组)和1.51%(高磷组)的3组等氮等能饲料,每种饲料为一个处理,每个处理设置4个重复,每个重复30尾鱼,用3种饲料分别饲喂初始体重为(8.42±0.09)g的吉富罗非鱼8周。结果显示,适磷组吉富罗非鱼的增重率和特定生长率显著高于低磷组和高磷组,饲料系数在适磷组最低。脏体比、肝体比和肥满度随饲料磷水平的升高呈逐渐下降趋势。随着饲料磷水平的增加,吉富罗非鱼干物质、粗蛋白、粗脂肪、磷的表观消化率显著降低。对筛选到的差异代谢物进行KEGG注释和富集分析发现,饲料磷缺乏时下调的差异代谢物主要富集的代谢通路为氰胺酸代谢、葡萄糖酸酯的生物合成、丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢,上调的差异代谢物主要富集的代谢通路为脂肪酸合成;当饲料磷过量时下调的差异代谢物主要富集代谢通路为精氨酸和脯氨酸代谢、苯丙酸的生物合成,上调的差异代谢物主要富集代谢通路为氨基糖和核苷酸糖的代谢。Ace、Chao1和Shannon指数表明,吉富罗非鱼肠道菌群丰度和多样性随着饲料磷水平的升高呈现升高趋势。厚壁菌门、放线菌门、变形菌门和拟杆菌门为吉富罗非鱼肠道菌群中的优势菌门。罗姆布茨菌属、鲸杆菌属等有益菌属的丰度在适磷组最高,分枝杆菌属和拟杆菌属的丰度随饲料磷含量的增加呈下降趋势。本研究表明,饲料中适量的磷能提高吉富罗非鱼对饲料的表观消化率,磷缺乏和过量会抑制吉富罗非鱼的氨基酸代谢,磷缺乏会加快脂肪酸合成进程;饲料中适量磷可以提高菌群丰度和多样性,有利于肠道健康。

植物性蛋白质饲料中添加不同类型的复合诱食剂对吉富罗非鱼生长、免疫及肠道消化酶活性的影响

本试验旨在研究植物性蛋白质饲料中添加复合诱食剂A(由大蒜素、二甲基-β-丙酸噻亭、氧化三甲胺组成)和复合诱食剂B(由牛磺酸、精氨酸、谷氨酸、丙氨酸、甘氨酸、核苷酸组成)对吉富罗非鱼生长、免疫及肠道消化酶活性的影响。选用健康吉富罗非鱼375尾,随机分为5组,每组3个重复,每个重复25尾鱼。对照组饲喂基础饲料,A1和A2组分别在基础饲料中添加0.1%和0.2%的复合诱食剂A,B1和B2组分别在基础饲料中添加0.1%和0.2%的复合诱食剂B。试验期40 d。结果表明:1)A2组的平均日采食量、特定生长率和增重率显著高于对照组(P<0.05),B2组的饲料系数显著低于对照组(P<0.05)。2)A2和B2组的脏体比显著低于对照组(P<0.05)。3)A1、A2、B1和B2组的全鱼粗蛋白质含量显著高于对照组(P<0.05)。4)A1、A2、B1和B2组的血清甘油三酯含量显著高于对照组(P<0.05),A1和A2组的血清总胆固醇含量显著高于对照组(P<0.05),A2组的血清溶菌酶活性显著高于对照组(P<0.05),A2组的血清超氧化物歧化酶活性显著高于B1和B2组(P<0.05)。5)B2组采食后1和3 h的前肠蛋白酶活性显著高于对照组(P<0.05),采食后3 h的中肠和后肠蛋白酶活性显著高于对照组(P<0.05)。B1和B2组采食后1 h的中肠淀粉酶活性显著高于其他各组(P<0.05)。B2组采食后3 h的前肠脂肪酶活性显著高于A1和B1组(P<0.05)。由此可见,植物性蛋白质饲料中添加0.2%复合诱食剂A可以提高吉富罗非鱼的平均日采食量、特定生长率和增重率,提高血清溶菌酶和超氧化物歧化物酶活性,提高肠道消化酶活性;植物性蛋白质饲料中添加0.2%复合诱食剂B降低了吉富罗非鱼的饲料系数,提高了肠道消化酶活性和全鱼粗蛋白质含量。综合以上指标,复合诱食剂A对吉富罗非鱼健康生长的作用效果优于复合诱食剂B。

茶渣蛋白提取物对吉富罗非鱼生长性能和生化指标的影响

为评价茶渣蛋白提取物(tea residue protein extract,TRPE)作为新型植物源蛋白在水产饲料中的可应用性,以TRPE替代基础饲料中的鱼粉或豆粕,分析其对吉富罗非鱼的生长性能、代谢状态和非特异性免疫的影响.研究结果表明:当TRPE替代的鱼粉质量分数为15%时,吉富罗非鱼可正常生长;当TRPE替代的鱼粉质量分数超过30%时,吉富罗非鱼的生长性能下降20%以上,转氨酶活力升高10%以上,溶菌酶活力提升约2倍;当TRPE替代的豆粕质量分数为50%时,吉富罗非鱼生长性能和生化指标均无明显变化,但其溶菌酶活力提升约1.5倍.TRPE可提升鱼体的非特异性免疫能力,但过量取代鱼粉会导致基础饲料中必需氨基酸水平下降,对鱼体生长不利;TRPE可取代基础饲料中50%的豆粕,且能保证鱼体在正常生长代谢下免疫能力增强.

大米干全酒精糟替代饲料中豆粕对吉富罗非鱼生长性能、体组成、血清生化指标及肠道菌群的影响

试验旨在研究大米干全酒精糟(Rice dried distillers grains with solubles,Rice DDGS)替代饲料中豆粕对吉富罗非鱼生长性能、体组成、血清生化指标及肠道菌群的影响。以大米干全酒精糟按不同水平等量替代罗非鱼饲料中0、20%、40%、60%、80%、100%的豆粕制作成6组试验饲料(分别记为:DRDG0、DRDG20、DRDG40、DRDG60、DRDG80、DRDG100组),于室内循环水养殖系统中饲养初始体重为(39.27±0.23)g的吉富罗非鱼幼鱼8周,每个处理组3个重复,每个重复18尾鱼。结果显示:①随着大米干全酒精糟替代饲料中豆粕比例的提高,增重率、特定生长率以及采食量均呈先上升后下降的趋势,DRDG60组增重率、特定生长率与对照组(DRDG0组)无显著差异(P>0.05);各组间脏体指数(VSI)、肝体指数(HSI)以及肥满度(CF)无显著差异(P>0.05)。②各组间粗蛋白含量无显著差异(P>0.05);粗灰分含量呈上升的趋势,水分含量呈先下降后上升的趋势,粗脂肪含量呈先上升后下降的趋势。③各组间血清过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)活性无显著差异(P>0.05);谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性呈上升趋势;丙二醛(MDA)含量呈逐渐下降的趋势。④各组间肠道菌群Ace、Chao、Shannon、Simpson指数无显著差异(P>0.05);与DRDG0组相比,DRDG20、DRDG40、DRDG60组和DRDG80组变形菌门的相对丰度显著降低(P<0.05)。综上,在60%水平内,用大米干全酒精糟等量替代饲料中的豆粕能有效提高吉富罗非鱼的生长性能,并能有效提高抗氧化能力和改善肠道菌群结构,同时对体组成造成不同程度的影响。

饲料中添加蚕豆对吉富罗非鱼生长性能的影响

为了解饲料中添加蚕豆对吉富罗非鱼生长性能的影响,共设置2个试验组(ND和VFSD70组),ND组投喂正常罗非鱼饲料,VFSD70组投喂含70%蚕豆添加量的饲料;采用质构测试,开展对吉富罗非鱼肌肉品质的影响试验,为期60 d。结果表明,在吉富罗非鱼成长初期,投喂70%蚕豆添加量的饲料,对吉富罗非鱼生长性能与成活率均无影响,且从15 d起,对其肌肉品质产生影响,使其硬度增加,弹性降低。

网箱养殖模式下投喂率对吉富罗非鱼生长性能的影响

为了解吉富罗非鱼养成中期和后期最适投喂率,于吉富罗非鱼养成中期设置6个试验组(1.50%,2.00%,2.50%,3.00%,3.50%和4.00%),于养成后期设置4个试验组(1.50%,2.00%,2.50%和3.00%)开展养殖试验。周期分别为60和72 d。结果显示,养成中期,吉富罗非鱼的体质量增加率随投喂率的增加而增大;饲料系数随投喂率的增加则呈现先降低后升高的趋势,投喂率为2.00%组最低;投喂率对罗非鱼的肥满度、肝体比和脂体比有显著影响(P<0.05)。养成后期,吉富罗非鱼的体质量增加率随投喂率的增加呈先升高后降低的趋势;饲料系数随着投喂率的增加而增大,投喂率为1.5%时最低,投喂率为3.0%时最高。指出,在网箱养殖模式下,分别以获得最大体质量增加率和最低的饲料系数为评价指标,养成中期吉富罗非鱼适宜投喂率分别为4.02%和1.96%,养成后期分别2.56%和1.50%。

湖北吉富罗非鱼源Ⅰa无乳链球菌毒力分析及药敏特性

为探明湖北荆州某养殖场吉富罗非鱼(Genetic Improvement of Farmed Tilapia,GIFT)致病原因,对感染的罗非鱼精准施治,本研究从湖北荆州某养殖场患病吉富罗非鱼脑组织分离到一株优势菌。结果显示:该菌在BHI平板上生长出光滑、圆形、白色菌落,显微镜观察发现细菌呈单个、成对或球形短链状,长短不一,且革兰氏染色为阳性。经16S rRNA序列、PCR鉴定和生理生化特性鉴定,确定分离菌株为罗非鱼无乳链球菌,命名为JZ-202108。分离菌株JZ-202108血清型为Ⅰa型,携带gapC、sodA、bac、bca和hly等5种毒力基因。分离菌株JZ-202108人工感染吉富罗非鱼的症状与自然发病症状类似,出现神经症状和严重的内脏出血现象,并从脑组织中分离到强毒株,其LD_(50)为3.4×10^(5)CFU/尾,对吉富罗非鱼致病性较强。药物敏感性实验表明,分离菌株JZ-202108对β-内酰胺类、头孢类药物敏感,对氨基酸糖苷类药物耐药;乌梅、黄连、朱砂、野菊花等中药对JZ-202108菌株有明显抑制作用,乌梅和野菊花在菌株JZ-202108感染吉富罗非鱼的体内治疗效果最佳。生产中可考虑用β-内酰胺和头孢类抗菌药物,以及中药乌梅和野菊花等药物进行治疗。

美洲大蠊水提物对吉富罗非鱼生长性能、血清和肝脏生化指标的影响

试验旨在探究美洲大蠊水提取物对吉富罗非鱼生长性能、血清和肝脏生化指标的影响。选取平均体重为(22.18±0.03) g吉富罗非鱼450尾,随机分为5组,每组3个重复,每个重复30尾鱼,分别在基础饵料中添加0 (对照组)、0.10%(Ⅰ组)、0.15%(Ⅱ组)、0.20%(Ⅲ组)、0.25%(Ⅳ组)的美洲大蠊水提物。试验期45 d。结果显示,各试验组鱼的内脏指数均显著低于对照组(P<0.05)。Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组罗非鱼血清总胆固醇含量显著低于对照组(P<0.05)。各试验组罗非鱼肝脏甘油三酯含量显著低于对照组(P<0.05)。Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组罗非鱼血清过氧化氢酶、总超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶活性、总抗氧化能力显著高于对照组(P<0.05)。各试验组罗非鱼肝脏过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶活性、总抗氧化能力显著高于对照组(P<0.05)。研究表明,吉富罗非鱼饵料中添加0.15%美洲大蠊水提物较为适宜。

吉富品系尼罗罗非鱼的越冬技术

吉富品系尼罗罗非鱼（简称吉富鱼）生长速度快，体形好，深受广大养殖户的青睐。因其生态习性和生理特征与其他罗非鱼有所差异，按照常规饲养方法不能满足它对养殖条件的需要，越冬阶段尤其如此，一些地方反映吉富鱼存在越冬成活率较低的问题。近年来，笔者在淡水渔业研究中心的试验基地进行了养殖探索和抗逆性试验，取得较好的效果，2007年冬天，在严重雪灾的情况下吉富鱼的越冬成活率达到了96．0％。现将一些经验和方法介绍如下，供其他养殖户在吉富鱼的越冬保种过程中作参考。

饲料脂肪水平对吉富罗非鱼生产性能、营养物质消化及血液生化指标的影响

为探讨吉富罗非鱼对脂肪的适宜需求量,将630尾[(2.63±0.16)g]吉富罗非鱼随机分成6个脂肪组的饲料组(1.73%、3.71%、5.69%、7.67%、9.64%和16.55%),每组设置3个重复,每个重复35尾,第1组为对照组,投喂基础日粮(含脂肪1.73%),另外5组为试验组,在基础日粮中分别添加2%、4%、6%、8%、15%的鱼油,饲养90d后测定生长、饵料系数、营养物质表观消化率及血液常规生化指标。结果显示,随着饲料脂肪水平提高,增重率和特定生长率呈现一个先上升后下降的趋势(P<0.05),蛋白质效率极显著地提高(P<0.01),饵料系数极显著地下降(P<0.01)。增重率与饲料脂肪水平的二次多项式回归分析显示,吉富罗非鱼获得最高增长所需饲料的最佳脂肪水平为9.34%。饲料脂肪水平对粗蛋白表观消化率和饲料干物质表观消化率无显著影响(P>0.05),饲料脂肪水平增加显著提高了粗脂肪和磷的表观消化率(P<0.05)。未添加鱼油的1.73%组血液中白蛋白和白球比均显著高于其他组(P<0.05),随着饲料脂肪水平的提高,胆固醇的浓度及碱性磷酸酶的活性极显著地上升(P<0.01)。饲料脂肪水平对血糖浓度有显著影响(P<0.05),对甘油三酯浓度、谷丙和谷草转氨酶的活性无显著影响(P>0.05)。结果表明,饲料中的脂肪水平可以促进吉富罗非鱼对脂肪和磷的表观消化率,但是脂肪水平过高会对鱼体增重及血液生化参数产生负作用,从生产上来说吉富罗非鱼鱼种对脂肪的适宜需求量为7.67%—9.34%。

饥饿胁迫对吉富罗非鱼生长及生理生化指标的影响

实验选取90吉富罗非鱼(GIFT,Oreochromis niloticus),平均体质量137.18g,随机分为6个平行组,饥饿处理0d、7d、14d、21d,测定饥饿对鱼体的生长、血液生化指标、应激蛋白HSP70基因表达以及鱼体组成的影响,结果表明,饥饿0～21d过程中,随着饥饿时间的延长,鱼体体质量、内脏质量、肝体比、内脏比、血清甘油三酯、血清一氧化氮浓度、血清超氧化物歧化酶活性、肝脏HSP70的mRNA水平、鱼体能量、肌肉粗脂肪、肝脏灰份、肠系膜脂肪含量等指标呈现下降的趋势,而血清丙二醛浓度呈现增加趋势,并且与饥饿前相比在饥饿21d时有显著性差异(P<0.05)。血清皮质醇与总蛋白浓度呈现先增加后降低趋势,并且与饥饿前相比在饥饿7d时有显著性差异。饥饿0～21d过程中,鱼体肌肉水份、肝脏水份、肌肉粗蛋白、肝脏粗蛋白与粗脂肪等含量没有较大的变化。因此饥饿时吉富罗非鱼先动用体内储存的脂肪来满足鱼体需要,长期的饥饿有可能降低鱼体免疫与抗氧化能力,直接影响鱼体健康。

饲料中添加重组抗菌肽对吉富罗非鱼生长性能及免疫力的影响

以吉富罗非鱼(genetically improved farmed tilapia,GIFT)幼鱼(体质量10.68 g±0.53 g)为研究对象,在实验饲料中分别添加0、5、10、20、50 mg/kg重组中国明对虾抗菌肽以及100 mg/kg氟苯尼考,并于实验结束时进行注射攻毒(嗜水气单胞菌)。通过8周的养殖实验,研究了饲料中添加抗菌肽对吉富罗非鱼幼鱼的生长性能、免疫指标以及攻毒实验的影响。结果显示,饲料中添加5～10 mg/kg抗菌肽可以显著提高罗非鱼的增重率、红细胞总数以及过氧化氢酶的活性,当添加量为5 mg/kg时,特定生长率最高;当添加量为50 mg/kg时,肝脏的超氧化物歧化酶与血清中溶菌酶活性较对照组显著降低(P<0.05);添加100 mg/kg氟苯尼考组较对照组能显著提高红细胞总数;当添加量为5～20 mg/kg时,嗜水气单胞菌攻毒后的死亡率显著降低(P<0.05),以5 mg/kg组存活率最高,氟苯尼考组差异不显著。结论认为,饲料中添加适量重组抗菌肽对幼鱼有一定的促生长作用,并能提高部分免疫指标以及攻毒后的存活率,但过高剂量的抗菌肽对幼鱼的生长与部分酶指标有一定的负面影响,因此建议抗菌肽的添加量不超过20 mg/kg。本研究旨为对虾抗菌肽在罗非鱼饲料中的合理应用提供实验依据。

低温应激对吉富罗非鱼血清生化指标及肝脏HSP70基因表达的影响

实验旨在探讨急性低温应激对吉富罗非鱼(GIFT,Oreochromis niloticus)血清生化、免疫指标以及肝脏HSP70 mRNA水平的影响。实验选取平均体重为(177±2.18)g左右的吉富罗非鱼作为实验对象,设定(25±1)℃对照组和低温(9±1)℃冷应激试验组,每组设定5个平行组,分别在0、2、6、12h随机采样,测定血清血糖(GLU)、胆固醇(CHOL)、甘油三酯(TG)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、补体3(C3)、补体4(C4)、溶菌酶(LSZ)、皮质醇(COR)、三碘甲腺原氨酸(T3)、甲状腺素(T4)以及肝脏HSP70mRNA水平。结果表明:与对照组相比,试验组GLU水平在冷应激后6h,TG水平在冷应激后2、6h,CHOL水平在冷应激后6、12h均有显著升高(P<0.05),ALT水平在冷应激后2、12h均有显著升高(P<0.05);试验组AST、COR、T3水平在冷应激2、6、12h时出现显著升高(P<0.05),C3、C4、LSZ水平在冷应激后2、6、12h均出现显著下降(P<0.05);与对照组相比,试验组HSP70mRNA水平在冷应激后的12h出现显著升高(P<0.05)。因此,急性低温应激可以提高吉富罗非鱼肝脏应激蛋白HSP70mRNA水平,影响该鱼的非特异免疫力和相关生理指标。