目的从1例中国女性肺癌患者的胸腔积液中分离建立原代低分化肺癌细胞系,并进行生物学特征分析。方法收集1例肺癌患者胸腔积液,取沉淀物,在含有10%胎牛血清、1%青霉素-链霉素溶液和1%非必需氨基酸的DMEM/F12培养液中培养。待细胞长满后,...目的从1例中国女性肺癌患者的胸腔积液中分离建立原代低分化肺癌细胞系,并进行生物学特征分析。方法收集1例肺癌患者胸腔积液,取沉淀物,在含有10%胎牛血清、1%青霉素-链霉素溶液和1%非必需氨基酸的DMEM/F12培养液中培养。待细胞长满后,使用胰蛋白酶梯度消化法传代使肿瘤纯度达>95%。进一步分析已建立细胞系(命名为ZLC-001)的核型、短串联重复序列(short tandem repeats,STR)、细胞增殖、肿瘤标志物检测和成瘤性等生物学特征。肿瘤原代细胞三维立体培养法药敏检测技术(collagen gel droplet-embedded culture drug sensitivity test,CD-DST)用于评估ZLC-001对吉非替尼、舒尼替尼、索拉非尼、拉帕替尼和伊马替尼的药物敏感性。结果成功建立来自低分化肺癌患者(女性,44岁,pStageⅣ)的原代细胞系ZLC-001。ZLC-001细胞可贴壁生长,并可稳定传代>30代。生物学特征分析中核型分析表明染色体数目主要分布在60~69。免疫组织化学结果显示,细胞角蛋白(cytokeratin,CK)和乳腺癌相关蛋白1(breast cancer associated protein 1,BRAP1)为阳性,波形蛋白、Wnt-1和钙结合蛋白(calretinin,CR)个别阳性,Napsin A、MOC-31、甲状腺转录因子1(thyroid transcription factor 1,TTF1)和D2-40均为阴性。ZLC-001细胞在裸鼠中成瘤能力强。ZLC-001对吉非替尼、舒尼替尼、索拉非尼和伊马替尼耐药,但对拉帕替尼中度敏感。结论成功建立来自中国患者的新型低分化肺癌细胞系。这种功能齐全的细胞系为开展肺癌生物学和药物反应研究提供理想的模型与工具。展开更多
目的:探讨CXC趋化因子受体4(CXCR4)高表达诱导肺腺癌细胞产生吉非替尼耐药的潜在机制。方法:检测含EGFR-19del点突变的肺腺癌细胞中CXCR4的表达情况,以siRNA干扰或慢病毒感染调控细胞CXCR4的表达,通过克隆形成、CCK-8、流式细胞凋亡术...目的:探讨CXC趋化因子受体4(CXCR4)高表达诱导肺腺癌细胞产生吉非替尼耐药的潜在机制。方法:检测含EGFR-19del点突变的肺腺癌细胞中CXCR4的表达情况,以siRNA干扰或慢病毒感染调控细胞CXCR4的表达,通过克隆形成、CCK-8、流式细胞凋亡术、细胞凋亡相关蛋白测定、裸鼠皮下成瘤等实验鉴定细胞的吉非替尼敏感性。采用免疫共沉淀结合质谱分析法筛选CXCR4的相互作用蛋白。检测细胞的有氧糖酵解水平,并检测细胞在糖酵解抑制剂处理下的吉非替尼敏感性。结果:PC9/GR细胞存在显著的吉非替尼耐药性,PC9/GR细胞的吉非替尼IC50是PC9细胞的近100倍(19.15μmol/L vs 0.195μmol/L)。CXCR4在PC9/GR细胞中高表达(>4倍高于PC9细胞),抑制CXCR4可显著逆转PC9/GR细胞的耐药性。过表达CXCR4可诱导PC9细胞产生耐药,使吉非替尼IC50由0.89μmol/L升高至10.10μmol/L。乳酸脱氢酶A(lactate dehydrogenase A,LDHA)是新型CXCR4底物:CXCR4过表达通过促进LDHA磷酸化,从而增强细胞的有氧糖酵解功能;糖酵解抑制剂可显著逆转CXCR4高表达所诱导的吉非替尼耐药。结论:CXCR4高表达通过促进LDHA磷酸化使有氧糖酵解功能增强,从而诱导肺腺癌细胞产生吉非替尼耐药,是潜在的吉非替尼耐药治疗靶点。展开更多
文摘目的从1例中国女性肺癌患者的胸腔积液中分离建立原代低分化肺癌细胞系,并进行生物学特征分析。方法收集1例肺癌患者胸腔积液,取沉淀物,在含有10%胎牛血清、1%青霉素-链霉素溶液和1%非必需氨基酸的DMEM/F12培养液中培养。待细胞长满后,使用胰蛋白酶梯度消化法传代使肿瘤纯度达>95%。进一步分析已建立细胞系(命名为ZLC-001)的核型、短串联重复序列(short tandem repeats,STR)、细胞增殖、肿瘤标志物检测和成瘤性等生物学特征。肿瘤原代细胞三维立体培养法药敏检测技术(collagen gel droplet-embedded culture drug sensitivity test,CD-DST)用于评估ZLC-001对吉非替尼、舒尼替尼、索拉非尼、拉帕替尼和伊马替尼的药物敏感性。结果成功建立来自低分化肺癌患者(女性,44岁,pStageⅣ)的原代细胞系ZLC-001。ZLC-001细胞可贴壁生长,并可稳定传代>30代。生物学特征分析中核型分析表明染色体数目主要分布在60~69。免疫组织化学结果显示,细胞角蛋白(cytokeratin,CK)和乳腺癌相关蛋白1(breast cancer associated protein 1,BRAP1)为阳性,波形蛋白、Wnt-1和钙结合蛋白(calretinin,CR)个别阳性,Napsin A、MOC-31、甲状腺转录因子1(thyroid transcription factor 1,TTF1)和D2-40均为阴性。ZLC-001细胞在裸鼠中成瘤能力强。ZLC-001对吉非替尼、舒尼替尼、索拉非尼和伊马替尼耐药,但对拉帕替尼中度敏感。结论成功建立来自中国患者的新型低分化肺癌细胞系。这种功能齐全的细胞系为开展肺癌生物学和药物反应研究提供理想的模型与工具。
文摘目的:探讨CXC趋化因子受体4(CXCR4)高表达诱导肺腺癌细胞产生吉非替尼耐药的潜在机制。方法:检测含EGFR-19del点突变的肺腺癌细胞中CXCR4的表达情况,以siRNA干扰或慢病毒感染调控细胞CXCR4的表达,通过克隆形成、CCK-8、流式细胞凋亡术、细胞凋亡相关蛋白测定、裸鼠皮下成瘤等实验鉴定细胞的吉非替尼敏感性。采用免疫共沉淀结合质谱分析法筛选CXCR4的相互作用蛋白。检测细胞的有氧糖酵解水平,并检测细胞在糖酵解抑制剂处理下的吉非替尼敏感性。结果:PC9/GR细胞存在显著的吉非替尼耐药性,PC9/GR细胞的吉非替尼IC50是PC9细胞的近100倍(19.15μmol/L vs 0.195μmol/L)。CXCR4在PC9/GR细胞中高表达(>4倍高于PC9细胞),抑制CXCR4可显著逆转PC9/GR细胞的耐药性。过表达CXCR4可诱导PC9细胞产生耐药,使吉非替尼IC50由0.89μmol/L升高至10.10μmol/L。乳酸脱氢酶A(lactate dehydrogenase A,LDHA)是新型CXCR4底物:CXCR4过表达通过促进LDHA磷酸化,从而增强细胞的有氧糖酵解功能;糖酵解抑制剂可显著逆转CXCR4高表达所诱导的吉非替尼耐药。结论:CXCR4高表达通过促进LDHA磷酸化使有氧糖酵解功能增强,从而诱导肺腺癌细胞产生吉非替尼耐药,是潜在的吉非替尼耐药治疗靶点。