吉马酮抑制JAK2/STAT3信号通路对食管癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

目的 探讨吉马酮抑制蛋白酪氨酸激酶2(Janus kinase 2,JAK2)/信号转导子与激活子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)信号通路对食管癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法 甲基噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测不同浓度(0、10、20、40、80、160和320μmol/L)的吉马酮分别处理人食管癌细胞Eca109和KYSE450以及人食管上皮细胞Het-1A后的细胞存活率。将Eca109细胞分为对照组(常规培养)、吉马酮低剂量组(40μmol/L吉马酮干预24 h)、吉马酮中剂量组(80μmol/L吉马酮干预24 h)、吉马酮高剂量组(160μmol/L吉马酮干预24 h)、Coumermycin A1组(10μmol/L JAK2激活剂coumermycin A1+160μmol/L吉马酮干预24 h)和AG490组(50μmol/L JAK2抑制剂AG490+160μmol/L吉马酮干预24 h)。Transwell检测细胞迁移和侵袭能力。平板克隆实验检测细胞克隆能力。流式细胞术检测细胞凋亡和周期。Western blot检测JAK2、磷酸化JAK2(phos-JAK2,p-JAK2)、STAT3、p-STAT3、Ki-67、Bax、Bcl-2和p53表达情况。结果 与0μmol/L比较,10、20、40、80、160和320μmol/L的吉马酮处理下,Eca109和KYSE450细胞存活率均呈浓度依赖性降低(均P<0.05),半抑制浓度(half-inhibitory concentration,IC_(50))分别为(98.18±2.12)μmol/L和(154.77±2.32)μmol/L,而Het-1A细胞存活率差异无统计学意义(均P>0.05)。由于吉马酮对Eca109细胞效果更明显,后续选择Eca109细胞并采用40、80和160μmol/L吉马酮浓度进行作用机制研究。与对照组比较,吉马酮低、中和高剂量组Eca109细胞迁移、侵袭、克隆个数以及p-JAK2、p-STAT3、Ki-67和Bcl-2蛋白表达均降低(均P<0.05),Eca109细胞G_(0)/G_(1)期比例、早期凋亡率和总凋亡率以及Bax和p53表达均升高(均P<0.05)。与吉马酮高剂量组比较,Coumermycin A1组Eca109细胞迁移、侵袭、克隆个数以及p-JAK2、p-STAT3、Ki-67和Bcl-2蛋白表达均增加,Eca109细胞G_(0)/G_(1)期比例、早期凋亡率和总凋亡率以及Bax和p53表达均降低(均P<0.05);AG490组Eca109细胞迁移、侵袭、克隆个数以及p-JAK2、p-STAT3、Ki-67和Bcl-2表达均降低,Eca109细胞G_(0)/G_(1)期比例、早期凋亡率和总凋亡率以及Bax和p53表达均升高(均P<0.05)。结论 吉马酮可通过抑制JAK2/STAT3通路抑制食管癌细胞的增殖和侵袭能力,并促进细胞凋亡。

吉马酮调节FAK/YAP信号通路对非小细胞肺癌细胞顺铂耐药性的影响

目的 探讨吉马酮(GMC)调节局部黏着斑激酶(FAK)/Yes相关蛋白(YAP)通路对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞顺铂(DDP)耐药性的影响。方法 将A549/DDP细胞分为CK组、低剂量GMC组(GMC-L组,5μmol/L)、中剂量GMC组(GMC-M组,10μmol/L)、高剂量GMC组(GMC-H组,20μmol/L)、GMC-H+pcDNA组(20μmol/L+转染pcDNA)、GMC-H+pcDNA-FAK组(20μmol/L+转染pcDNA-FAK)。检测各组细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭情况;检测多药耐药基因1(MDR1)、增殖细胞核抗原(PCNA)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、磷酸化的FAK(p-FAK)、YAP蛋白表达情况。结果 与CK组比较,GMC-L组、GMCM组、GMC-H组A549/DDP细胞OD450值、克隆形成率、划痕愈合率、侵袭细胞数、MDR1、PCNA、Bcl-2、MMP-2、MMP-9、p-FAK蛋白及核YAP蛋白表达降低,细胞凋亡率升高,且呈浓度依赖性(P<0.05);与GMC-H组、GMC-H+pcDNA组比较,GMC-H+pcDNA-FAK组A549/DDP细胞OD_(450)值、克隆形成率、划痕愈合率、侵袭细胞数、MDR1、PCNA、Bcl-2、MMP-2、MMP-9、p-FAK蛋白及核YAP蛋白表达升高,细胞凋亡率降低(P<0.05)。结论 GMC可能通过抑制FAK/YAP信号通路减弱NSCLC细胞DDP耐药性。

反相HPLC法测定莪术油葡萄糖注射液中莪术醇和吉马酮的含量

目的:建立莪术油葡萄糖注射液中莪术醇和吉马酮的含量测定方法。方法:高效液相色谱法。大连依利特HypersilODS2色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),乙腈水梯度洗脱:乙腈:0～3min,45;3～30min,45→65;30～38min,65;38～45min,65→90;45～55min,90→100;55～65min,100。流速:1.0mL·min-1,柱温:25°C,检测波长:214nm。结果:莪术醇在0.26μg～6.5μg范围内线性良好(r=0.9999),吉马酮在0.1125μg～2.8125μg范围内线性良好(r=1.0000),两者的加样回收率分别为102.1、98.8(n=5)。结论:反相HPLC法能同时测定莪术油葡萄糖注射液中莪术醇和吉马酮的含量,方法简便,结果准确,可用于其质量控制。

不同来源莪术中莪术醇、吉马酮、莪术二酮GC-MS定量分析

目的:测定并比较不同来源莪术中莪术醇、吉马酮、莪术二酮的含量。方法:采用甲醇超声提取,GC-MS选择离子监测法测定3种成分含量。色谱条件:HP-5MS毛细管柱(30 m×0.25 mm×0.25μm);柱流速为1 mL·min-1,柱温:100℃(2 汽化室温度250℃;载气为高纯He(99.999%)。质谱条件:EI离子源,电子能量70 eV;四极杆温度150℃;EM电压2165 V;接口温度280℃;溶剂延迟 3 min;m/z范围40-550 amu。结果:莪术醇、吉马酮和莪术二酮分别在12.4-124.0,12.4-82.3,13.0-86.7 ng线性关系良好;r值分别为0.9990,0.9981,0.9989。不同来源莪术中莪术醇含量均极低,大多数样品均未检出;所有样品中均可检出吉马酮,但含量差异较大(5.479 mg·g-1vs0.459 mg·g-1);莪术二酮在部分样品中未检出。结论:不同来源莪术中莪术醇、吉马酮和莪术二酮的含量差异显著。

广西不同产地莪术中吉马酮的含量比较

目的建立以高效液相色谱法测定桂莪术中吉马酮含量的方法,并检测广西不同产地桂莪术中吉马酮的含量。方法采用Shim-pack CLC-ODS柱（6.0 mmID×15 cm,5μm）,流动相为乙腈-水（60∶40）,流速：l ml/min,检测波长215 nm。结果吉马酮在5.825～582.5μg/ml范围内样品浓度与峰面积呈良好的线性关系（r=0.999 92）,平均回收率为101.41%,RSD=2.82%（n=6）。结论福绵、港江、兴业3个产地吉马酮含量最高;不同产地桂莪术中吉马酮的含量存在较大差异。

HPLC法测定莪术饮片中莪术二酮、莪术醇、吉马酮

目的建立一种同时测定莪术饮片中3种成分含量的高效液相色谱法。方法固定相为依利特Hypersil ODS柱(4.6mm×250mm,5μm);乙腈-水为流动相,梯度洗脱;流速:1mL/min;柱温25℃;检测波长:216nm;进样量为10μL。结果在上述色谱分离条件下,莪术二酮、莪术醇、吉马酮的浓度在0.008 1～0.257 4、0.006 7～0.213 6、0.001 6～0.050 0mg/mL时,各成分浓度与色谱峰面积之间线性关系良好,平均回收率分别为:99.1%、98.6%、98.2%,回收率RSD分别为:2.3%、1.4%、2.0%。结论本实验研究所建立的方法可靠、灵敏、简便、专属性强,能比较全面反映不同产地莪术饮片的内在质量,为供临床使用的莪术饮片的安全使用及其质量控制提供了科学依据。

吉马酮对人非小细胞肺癌NCI-H1770细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的调节作用

目的:探索吉马酮对人非小细胞肺癌NCI-H1770细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响。方法:非小细胞肺癌细胞分为4组:对照组(NCI-H1770)、吉马酮(5、10、20μmol/L)组。CCK-8检测细胞增殖。流式细胞术检测细胞凋亡。Transwell检测细胞侵袭。划痕实验检测细胞迁移。蛋白印迹检测细胞增殖核抗原-67(Ki67),Cleaved Caspase-3和血管内皮细胞生长因子(VEGF)的蛋白水平。结果:低浓度(<20μmol/L)的吉马酮不会对非小细胞肺癌细胞产生毒性,高浓度(≥20μmol/L)的吉马酮会急剧减弱非小细胞肺癌细胞活力。与对照组相比,吉马酮(10、20μmol/L)组细胞增殖倍数下降(P <0. 01)。吉马酮(5、10、20μmol/L)组细胞凋亡率高于对照组(P <0. 01)。吉马酮(5、10、20μmol/L)组每个视野下的侵袭细胞数目低于对照组(P <0. 01)。与对照组相比,吉马酮(5、10、20μmol/L)组划痕愈合率降低(P <0. 01)。吉马酮(5、10、20μmol/L)组Ki67和VEGF的相对蛋白水平低于对照组(P <0. 01)。与对照组相比,吉马酮(5、10、20μmol/L)组Cleaved Caspase-3的相对蛋白水平上升(P <0. 01)。结论:吉马酮可降低人非小细胞肺癌NCI-H1770细胞增殖、侵袭及迁移,促进细胞凋亡。

莪术挥发油中莪术二酮、吉马酮在大鼠体内的药动学研究

目的研究莪术挥发油中莪术二酮、吉马酮在大鼠体内的药动学特征。方法采用水蒸汽蒸馏法提取莪术中挥发油灌胃大鼠并采集血样。选用EliteHypersilODS2色谱柱（4．6mm×250mm，5μm），乙腈一水为流动相进行梯度洗脱，体积流量1．0mL／min，检测波长214nm。结果血浆样品中莪术二酮、吉马酮无干扰，分别在1．073—68．64μg／mL、0．1972—12．62μg／mL范围内呈现良好的线性关系，精密度、稳定性、回收率均符合生物样品测定要求。结论所建测定方法操作，适用于莪术二酮、吉马酮在大鼠体内血药浓度的测定及药动学两者均符合二室模型。

高效液相色谱法测定莪术中吉马酮的含量

目的 :建立以高效液相色谱法测定莪术中吉马酮含量的方法。方法 :色谱柱为C18,流动相为乙腈 -水 (梯度洗脱 ) ,流速为1 .0ml/min ,检测波长为214nm。结果 :吉马酮检测浓度在0. 95～285μg/ml范围内线性关系良好 (r=0 .9999) ,平均回收率为97.89 % (RSD=2.52 % ,n=5)。结论 :本方法简便、可靠 ,可用于莪术药材的含量测定和质量控制。

HPLC测定郁金类药材中的吉马酮和莪术二酮

目的测定郁金类药材中的吉马酮、莪术二酮。方法采用HPLC法，色谱柱为C18柱，提取溶剂为甲醇，流动相为乙腈-水（75-25），流速0．8ml·min^-1，检测波长244nm。结果加样回收率95％～105％，RSD分别为1．34％、1．87％（n=5）。结论所建方法简便、准确，为郁金类中药材吉马酮、莪术二酮的测定提供了参考依据。

吉马酮对人肺鳞癌LK2细胞系增殖和凋亡的影响

目的观察吉马酮对人肺鳞癌LK2细胞的抑制作用,并对其作用机制进行探讨。方法体外培养LK2细胞,采用MTT法观察吉马酮对LK2细胞增殖的影响,采用吖啶橙染色法观察吉马酮作用前后细胞形态学上的差异及凋亡程度,采用流式细胞术检测细胞凋亡率变化。结果吉马酮对LK2细胞体外增殖有抑制作用,且呈明显的剂量依赖性,差异有统计学意义(P<0.05);吖啶橙染色结果表明:吉马酮处理细胞可见核碎裂等典型的凋亡改变;流式细胞仪检测结果显示:LK2细胞凋亡率随吉马酮作用浓度增加而增加,呈剂量依赖性。结论吉马酮可以抑制人肺鳞癌LK2细胞的增殖并诱导细胞凋亡。

血浆中莪术醇和吉马酮的测定及其大鼠体内的药代动力学研究

目的建立大鼠血浆中莪术醇和吉马酮的HPLC测定方法,研究莪术提取物中莪术醇和吉马酮在正常大鼠血浆中的药物代谢动力学特征。方法 SD大鼠经灌胃莪术提取物后,采取不同时间点血样,血浆样品经乙腈沉淀处理后供HPLC分析,其色谱参数为Hypersil ODS柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈(0～20 min:63%～66%)-水,体积流量1 mL/min,柱温25℃,检测波长210 nm。结果莪术醇和吉马酮的线性范围分别为0.025～5μg/mL和0.025～2.5μg/mL,最低检测限均为0.025μg/mL,高、中、低3个质量浓度的质控样本的方法回收率在95.2%～105.3%间,日内、日间精密度(RSD)均小于5%。莪术醇和吉马酮的消除半衰期分别为5.745 h和22.002 h;AUC(0-t)分别为8.814μg.h/L和0.739μg.h/L,两者的血药浓度—时间曲线符合二室模型。结论建立的血浆中同时测定莪术提取物中莪术醇和吉马酮的RP-HPLC测定方法能用于莪术在大鼠体内的药代动力学研究。

GC-MS法分析有氧和充氮加热条件下吉马酮和莪术二酮的化学变化

目的分析吉马酮和莪术二酮在有氧和充氮保护条件下加热过程中的化学成分变化以寻找温莪术炮制理论依据。方法采用GC-MS技术并结合NIST软件分析莪术二酮和吉马酮在这一过程中的变化。结果吉马酮性质不稳定,在有氧条件下吉马酮会完全分解,在充氮保护下吉马酮会部分分解。莪术二酮在充氮保护或有氧条件下都表现出较好的化学稳定性,只有部分被转化为其他成分。结论本实验推测温莪术的传统加工方法可以部分避免吉马酮降解。

吉马酮对人肺癌A549细胞系增殖、凋亡的影响

目的研究吉马酮对人肺癌A549细胞增殖及凋亡的影响。方法用MTT比色法检测吉马酮对A549细胞增殖的抑制作用;采用流式细胞仪AnnexinV/PI双染法检测细胞凋亡率;采用电子显微镜观察吉马酮作用细胞后亚细胞结构的变化。结果吉马酮对人肺癌A549细胞的增殖有明显的抑制作用,并呈剂量效应关系;流式细胞仪结果显示,吉马酮可以诱导A549细胞凋亡,凋亡率与药物呈剂量效应关系;电子显微镜下经吉马酮处理后的细胞可见染色质浓聚、染色质边集等典型的凋亡改变,而空白对照组没有变化。结论吉马酮可以抑制肺癌A549细胞的增殖、诱导细胞凋亡。

GC法测定莪术中吉马酮含量

目的：建立莪术中吉马酮的含量测定方法，为莪术质量评价和质量标准的研究提供依据。方法：采用sE-54（0．25mm×15m）石英弹性毛细管柱，进样口温度260℃，氢火焰检测器（FID）260℃，程序升温：柱初始温度为100℃，保持4min，以20℃／min升至135℃，保持15min，再以15℃／min升至200℃。进样量1μL，分流比1：5，柱流量imL／min。采用内标法定量，以水杨酸甲酯为内标物。结果：吉马酮的进样量在0．0661n0．3996mg内与峰面积比值（吉马酮／水杨酸甲酯）呈良好的线性关系，r=0．9991，平均回收率97．65％。经测定，广东连南、广东中山、浙江温州莪术样品中吉马酮的含量分别为4．40、5．14、1．92mg／g。结论：本方法准确可靠，重复性好，样品处理简单，可用作莪术质量控制的方法。

反相高效液相法测定莪术油凝胶剂中莪术醇和吉马酮含量

目的:建立反相-高效液相色谱法(RP-HPLC)测定莪术油凝胶剂中莪术醇和吉马酮的含量的方法。方法:在ODS-C18色谱柱上采用流动相乙睛-0.025mol/L磷酸(45:55)(三乙胺调节pH至4.5)溶液进行梯度洗脱:乙腈:0～5min,70%;5～30min,70%→90%;30～50min,90%。检测波长213nm,流速1.0ml/min。结果:在0.3～7μg范围内,莪术醇对照品的峰面积(Y)与其浓度(X)呈现良好的线性关系,r=0.9996,在0.3～7μg范围内,吉马酮对照品的峰面积(Y)与其浓度(X)呈现良好的线性关系,r=0.9997,平均回收率分别为98.37%和99.71%(n=9)。结论:本法专属性高,可同时测定凝胶剂样品中莪术醇和吉马酮的含量,可用于对莪术油凝胶剂的质量控制。

莪术油中吉马酮的分离、纯化及结构鉴定

以石油醚-乙酸乙酯为洗脱剂,从莪术油中分离天然活性成分吉马酮,采用硅胶色谱柱进行粗分,然后以甲醇-水为流动相,通过半制备液相制备得到高纯度吉马酮,13C NMR、1H NMR进行结构确认;可以成功制备得到吉马酮,纯度约为99.0%。结果表明该法可从莪术油中分离得到高纯度的吉马酮,得率高,有一定的应用价值。

RP-HPLC测定不同产地郁金中吉马酮的含量

目的:探讨不同产地郁金药材中吉马酮含量,为临床合理应用和质量评价提供科学依据。方法:采用高效液相色谱法测定,Agilent Extend-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);乙腈-水(75∶25)等度洗脱;流速为1.0 mL/min;柱温为25℃;检测波长为220 nm。结果:不同产地郁金中吉马酮的含量具有明显差异。温郁金中吉马酮含量远高于桂郁金,不同产地温郁金中吉马酮含量无明显差异。结论:该方法简单、准确,为郁金中吉马酮的测定提供了依据。

GC测定莪术残油中莪术醇、吉马酮和莪术二酮的含量

目的:建立以毛细管气相色谱法测定莪术残油中莪术醇、吉马酮和莪术二酮含量的方法。方法:采用气相色谱法:HP-5(0.32mm×30m)石英弹性毛细管柱,进样口温度250℃,氢火焰检测器(FID)280℃,进样量4μL,不分流进样,柱流量1mL/min;程序升温:柱初始温度为100℃,以4℃/min升至140℃,以13℃/min升至170℃,保持8min,以5℃/min升至200℃;以水杨酸甲酯为内标物。结果:莪术醇进样量在0.5490～2.745μg内与峰面积比值(莪术醇/水杨酸甲酯)呈良好的线性关系Y=0.4212X-0.0766,r=0.9997,平均回收率99.0%(RSD为1.0%);吉马酮进样量在0.1145～0.5725μg内与峰面积比值(吉马酮/水杨酸甲酯)呈良好的线性关系Y=0.2095X-0.0141,r=0.9993,平均回收率100.3%(RSD为1.4%);莪术二酮进样量在0.2715～1.3575μg内与峰面积比值(莪术二酮/水杨酸甲酯)呈良好的线性关系Y=0.2508X-0.0281,r=0.9995,平均回收率99.2%(RSD为2.2%)。结论:不同批号的莪术残油中3种成分的含量差异不显著。