固相萃取-同位素稀释液相色谱-串联质谱法测定橄榄油中4种交链孢霉毒素含量及其分布状况

目的:建立固相萃取-同位素稀释液相色谱-串联质谱法测定橄榄油中4种交链孢霉毒素含量的方法并描述其在橄榄油中的分布状况。方法:将橄榄油混匀后取5 g(精确至0.001 g),经乙腈-磷酸二氢钠溶液混合溶液提取,固相萃取柱净化,收集净化液经水浴氮吹浓缩后,采用超高效液相色谱质谱仪测定,内标法定量。结果:交链孢菌酮酸(tenuazonic acid, TeA)在0~50 ng/mL、交链孢酚(alternariol, AOH)在0~20 ng/mL、腾毒素(tentoxin, TEN)在0~10 ng/mL、交链孢酚单甲醚(alternariol methyl ether, AME)在0~2 ng/mL范围内线性良好(R>0.99)。TeA、AOH、TEN、AME的检出限在0.20~2.00μg/kg范围之间。4种生物毒素加标回收率为92.25%~124.66%,精密度范围3.79%~10.58%,表明本方法样本检测量小、灵敏度高、准确度高、精密度高,重现性好,是检测橄榄油中交链孢霉毒素的理想方法。结论:橄榄油普遍受到交链孢霉毒素污染,检出率93.33%(28/30),AME毒素是橄榄油中最主要的检出毒素。

同位素稀释液相色谱-串联质谱法准确测定猪肉中的氯霉素

建立了同位素稀释质谱测定猪肉中氯霉素残留的方法,对影响溶剂提取、萃取净化、液相色谱-质谱检测方法准确度的因素进行了量化与优化。猪肉样品经液氮冷冻粉碎,加入氯霉素-D5同位素内标和0.1 mol/L醋酸钠缓冲溶液(pH5),用乙酸乙酯提取4次,正己烷脱脂,HLB固相萃取小柱净化后采用负离子多反应监测模式下的液相色谱-质谱技术检测。方法的线性范围为0.01～0.5 ng/g,相关系数r2大于0.999;检出限和定量限分别为0.004ng/g和0.02 ng/g;在0.02 ng/g和1.0 ng/g加标水平的回收率(n=3)分别为95.2%～109.1%和99.7%～102.5%;日内和日间相对标准偏差均小于2%。研究了氯霉素及氯霉素-D5的基体效应,测得不同流动相和稀释溶剂组成时基体效应因子k的范围在0.950～1.015之间。研究结果对同位素稀释质谱痕量残留检测结果准确度的控制、方法的建立与验证具有参考意义。

同位素稀释液相色谱-串联质谱法测定小麦粉中黄曲霉毒素B1的不确定度评定

对同位素稀释液相色谱-串联质谱法测定小麦粉中黄曲霉毒素B 1的含量进行不确定度评定,为建立有效的质量控制方法提供参考。依据CNAS—GL06《化学分析中不确定度的评估指南》和JJF 1059.1—2012《测量不确定度评定与表示》,建立数学模型,分析液相色谱-串联质谱法测定小麦粉中黄曲霉毒素B 1各个不确定度来源,并对数学模型中各不确定度分量的进行分析、量化和合成,得出黄曲霉毒素B 1的合成不确定度和扩展不确定度。当小麦粉中黄曲霉毒素B 1的含量为4.30μg/kg,扩展不确定度为0.72μg/kg(k=2)。结果表明,影响测量结果不确定度的主要因素为标准溶液的稀释配制、最小二乘法标准曲线拟合以及提取效率和免疫亲合柱的回收率。

同位素稀释液相色谱-串联质谱法和量子点荧光免疫层析法快速测定花生油中黄曲霉毒素B_(1)的比较

采用同位素稀释液相色谱-串联质谱法(国标法)和量子点荧光免疫层析法检测花生油中黄曲霉毒素B;的含量。样品经提取、净化后,采用国标法和量子点荧光免疫层析法进行检测比较。结果表明,这2种检测方法的回收率分别为83.2%~94.6%和78.6%~88.3%,精密度为1.5%~3.5%和1.6%~3.8%,满足GB/T 27404—2008中附录F对回收率的要求,两种方法的相对偏差为0.05%~9.76%,将量子点荧光免疫层析法的检测结果与国标法的结果进行T检验,结果无显著性差异,准确度高。量子点荧光免疫层析法的灵敏度为92.1%,假阴性率为7.9%。可见量子点荧光免疫层析法可应用到花生油中黄曲霉毒素B;现场监管中,且有益于提高其检测效率和监管效率。

同位素稀释液相色谱-串联质谱法和量子点荧光免疫层析法快速测定谷物中呕吐毒素的比较研究

采用同位素稀释液相色谱-串联质谱法和量子点荧光免疫层析法检测玉米粉和小麦粉中呕吐毒素的含量。样品经提取、净化后,采用国标方法和量子点荧光免疫层析法检测比较。结果表明,2种检测方法的回收率分别为92.9%~98.0%及85.5%~101.1%,精密度为1.3%~3.4%及0.4%~3.0%,满足GB/T 27404—2008中附录F对回收率的要求,两种方法的相对偏差为0.16%~4.75%,检测结果与国标方法的结果进行T检验,结果无显著性差异,准确度高。量子点荧光免疫层析法的灵敏度为98.1%,假阴性率为1.9%。通过与同位素稀释高效液相色谱法的比较研究,确定量子点荧光面应层析法测量呕吐毒素的可靠性及可行性,可见量子点荧光免疫层析法应用到现场监管中,有益于提高检测效率和监管效率。

同位素稀释液相色谱-串联质谱法同时测定贝类产品中5种硝基呋喃代谢物

目的建立贝类产品中呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃西林、呋喃妥因和硝夫索尔代谢物的同位素稀释液相色谱-串联质谱(liquid chromatography-tandem mass spectrometry, LC-MS/MS)检测方法。方法样品中加入同位素内标,经盐酸水解及邻硝基苯甲醛衍生,调节pH为7.2±0.2,乙酸乙酯提取,氮吹浓缩,正己烷去脂净化,色谱柱分离,电喷雾电离(electronic spray ion, ESI)正负离子多反应(multiple reaction monitoring, MRM)模式检测,同位素内标稀释法定量。结果 5种硝基呋喃代谢物的方法定量限为0.1～0.2μg/kg;方法的线性范围为0.2～20μg/kg;相关系数均大于0.999;方法平均回收率为88.7%～112.1%,相对标准偏差为3.9%～13.7%。应用该方法对280份贝类产品进行检测,其中45份样品中检出了含量较低的氨基脲,范围值在0.21～1.86μg/kg。结论方法灵敏准确,适合贝类产品中硝基呋喃代谢物的检测。

同位素稀释液相色谱-串联质谱法检测血清睾酮候选参考方法的建立及应用

目的建立基于液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)技术的血清睾酮候选参考方法,并采用该方法对临床常规检测方法(微粒子化学发光法)的正确性进行评价。方法采用睾酮-2,3,4-^(13)C_(3)作为内标,以等体积比的正己烷-乙酸乙酯溶液对样本进行液液萃取,上清液采用氮气吹干后用流动相复溶,进行LC-MS/MS分析。采用五点包括法计算血清睾酮浓度。参考美国临床实验室标准化协会(CLSI)C62-A文件和EP15-A3文件对建立的同位素稀释液相色谱-串联质谱(ID-LC-MS/MS)方法进行性能评价(方法残留、特异性、线性范围、精密度、准确度),参考CLSI EP9-A3文件对微粒子化学发光法的正确性进行评价。结果建立的ID-LC-MS/MS方法检测血清睾酮的分析时间为5min,特异性好,无残留,线性范围为0.034~22.00ng/mL,批内不精密度≤2.3%,批间不精密度≤2.2%,测定有证参考物质SRM971(Level male)的相对偏移为0.2%,测定2017 RELA-A、2017 RELA-B样本的相对偏移分别为-2.9%、-3.3%,测定2017 RELA-A样本的不确定度为0.11 ng/mL。微粒子化学发光法与ID-LC-MS/MS的相关性较好(r=0.963),但偏差较大[总平均偏差为-24.4%,低浓度样本(≤1 ng/mL)平均偏差为-62.4%,高浓度样本(>1 ng/mL)平均偏差为6.3%]。结论成功建立了检测血清睾酮的ID-LC-MS/MS候选参考方法。该方法的精密度、准确度均较好,且操作简单,分析时间短。

同位素稀释液相色谱-串联质谱法测定牛奶中黄曲霉毒素M_1

建立了同位素稀释-液相色谱-串联质谱测定牛奶中黄曲霉毒素M_1的分析方法。样品中添加同位素内标13C17-黄曲霉毒素M_1,甲醇-水(体积比为8:2)提取分析物同时沉淀蛋白,上清液过弗罗里硅土柱净化,用5 mL丙酮-水-甲酸混合溶液(体积比为96∶3.5∶0.5)洗脱,氮吹近干后,1 mL甲醇定容。实验结果表明,在线性范围内标准品面积比与质量浓度线性关系良好,相关系数(r^2)大于0.999;检测限(信噪比为3)为0.005μg/kg,定量限(信噪比为10)为0.015μg/kg,平均回收率为94.4%~97.2%,相对标准偏差为4.7%~10.6%,均符合痕量分析的要求。

同位素稀释-液相色谱-串联质谱法测定4类水产品中甲霜灵的残留量

提出了同位素稀释-液相色谱-串联质谱法测定鱼、虾、蟹、贝4类水产品中甲霜灵残留量的方法。取样品(5±0.05)g,加入10 ng的内标甲霜灵-d 6,静置10 min,用10 mL含1%(体积分数)乙酸的乙腈溶液涡旋混合、离心。取上清液,于45℃氮吹至0.5 mL以下,加入7.5 mL 20%(体积分数,下同)乙腈溶液混匀,用7.5 mL正己烷去脂,Agela Cleanert S C_(18)固相萃取柱富集净化。所得溶液于45℃氮吹至干,用1 mL 20%乙腈溶液复溶,混匀后过0.22μm针式水相尼龙滤膜,滤液收集至进样小瓶中。以SHISEIDO CAPCELL PAK C_(18)色谱柱为固定相,以不同体积比的0.1%(体积分数)甲酸溶液和乙腈的混合液为流动相进行梯度洗脱,内标法定量。结果表明,甲霜灵标准曲线的线性范围为1.0~100.0μg·L^(-1),检出限(3S/N)为0.5μg·kg^(-1)。以不同品种水产品为空白基质,在1.0,2.0,10.0μg·kg^(-1)等3个浓度水平下,甲霜灵的回收率为93.8%~105%,测定值的相对标准偏差(n=6)均小于13%。

同位素稀释液相色谱-串联质谱法测定血清睾酮的能力评定

目的 通过组织人血清中睾酮同位素稀释液相色谱-串联质谱法(ID-LC-MS/MS)能力验证活动,了解各参加实验室睾酮的检测能力和水平,发现并识别实验室间存在的差异,促进实验室检测技术和管理水平的提高。方法 收集外观透明、清澈,无溶血、黄疸和乳糜,无传染病的健康人体血清,根据血清中睾酮的浓度水平,制备A、B 2种浓度水平的睾酮能力验证样品。能力验证活动依据CNAS-CL03:2010《能力验证提供者认可准则》(等同采用ISO/IEC 17043:2010)及相关指南文件要求运行。单因素方差分析用于均匀性评估,t检验用于稳定性评估。采用稳健算法A计算稳健均值作为指定值,稳健标准差作为能力评定标准差,考虑指定值不确定度,采用z′比分数用于结果评定。结果 能力验证样品通过均匀性及稳定性检验,满足能力验证计划使用要求。共16家实验室报名参加,14家参加实验室结果为“满意”,满意率为87.5%。结论 本次能力验证活动中大部分实验室ID-LC/MS/MS测定血清睾酮能力可靠,结果“可疑”或“不满意”的参加实验室可通过本次技术建议内容查找和分析问题原因,及时采取纠正措施。

同位素稀释-液相色谱-串联质谱法测定蜂蜜中的葫芦巴碱

为建立蜂蜜中葫芦巴碱测定的高效液相色谱-串联质谱法。本研究将蜂蜜样品中葫芦巴碱用0.1%甲酸水溶液(V/V)提取后,经混合型阳离子交换固相萃取柱(MCX)净化,高效液相色谱法(HILIC)色谱柱分离,以乙腈-5 mmol·L^(-1)乙酸铵水溶液为流动相进行梯度洗脱,液相色谱-串联质谱仪测定,同位素内标法定量。结果表明,目标物在10~500 ng·mL^(-1)的浓度范围内线性良好,相关系数(R^(2))为0.9999。方法检出限为0.075 mg·kg^(-1),定量限为0.25 mg·kg^(-1)。在空白样品中进行0.25、0.5和2.5 mg·kg^(-1)3个浓度水平的添加测试,本方法的平均回收率为97.8%~101.8%,相对标准偏差(RSD)范围为0.5%~4.3%(n=6)。综上,该方法具有良好的准确度和精密度,适用于蜂蜜中葫芦巴碱含量的测定,可以为蜂蜜的品种鉴别与品质评价提供技术支撑。

同位素稀释超高效液相色谱-串联质谱法同步快速测定热加工肉类中7种杂环胺

目的建立同位素稀释超高效液相色谱-串联质谱法同步快速测定热加工肉类中7种杂环胺含量的分析方法。方法样品经甲醇水溶液(3:7,V:V)均质提取,低温高速离心后上清液采用聚苯乙烯-二乙烯苯固相萃取净化。经ACQUITY UPLC■BEH C18(150 mm×3.0 mm,1.7μm)反相色谱柱分离,三重四极杆串联质谱仪在可编程多反应监测正离子模式下同位素内标法定量测定。结果在质量浓度0.1~100.0 ng/mL范围内,各杂环胺标准品均呈现良好线性关系,相关系数(r^(2))均大于0.999,检出限和定量限范围分别在0.02~0.04ng/g和0.06~0.14 ng/g之间。在低、中、高3种当量水平下加标回收率范围为84.62%~111.97%,日内精密度和日间精密度范围分别为0.83%~6.17%(n=6)和1.84%~9.78%(n=18)。结论本方法稳定、灵敏、高效,适用于不同热加工肉类中多种杂环胺的日常痕量检测分析。

QuEChERS EMR Lipid净化结合同位素稀释-超高效液相色谱-串联质谱法同时测定畜肉中17种β-受体激动剂

目的:建立了一种采用QuEChERS EMR Lipid净化结合同位素稀释-超高效液相色谱-串联质谱技术同时测定畜肉中17种β-受体激动剂药物残留的检测方法。方法:样品加入pH为5.2的乙酸铵缓冲溶液,以β-葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶酶解,经5%甲酸乙腈提取,QuEChERS EMR Lipid净化,采用CORTECS^(™)UPLC®C_(18)柱(3.0 mm×100 mm,1.6μm),0.1%甲酸水和甲醇梯度洗脱,在分时段多反应监测(scheduled MRM,sMRM)模式下测定,内标法定量。结果:17种β-受体激动剂在0~20 ng/mL浓度范围内线性相关系数均大于0.99,方法检出限为0.01~0.09μg/kg,定量限为0.05~0.31μg/kg。在0.5、2.0、5.0μg/kg 3个加标浓度水平下的平均回收率为81.7%~111.8%,RSD为0.8%~10.3%(n=6)。100批市售生鲜畜肉中未检出β-受体激动剂。结论:该法前处理步骤简便,净化效果良好,缩短酶解时间,提高了样品检测效率,内标法定量精准可靠,适用于大批量畜肉样品中多种β-受体激动剂药物残留的同时检测。

同位素内标稀释液相色谱-串联质谱法测定鱼贝类组织中残留的环丙氟哌酸

建立了不同鱼贝类肌肉组织中以氘代同位素为内标测定环丙氟哌酸残留量的液相色谱-串联质谱（LC—MS／MS）方法。样品加入内标环丙氟哌酸-D8和磷酸盐缓冲溶液（pH7．0）后进行匀质并用乙腈超声提取，经正己烷脱脂后采用Waters Oasis＇MAX小柱净化，在Cloversil—C18柱上，以乙腈-0．05％三氟醋酸（体积比为25：75）为流动相，采用多反应监测（MRM）模式，液相色谱-电喷雾质谱法测定。根据环丙氟哌酸和氘代内标物的定量离子质量色谱图的峰面积比值，采用内标法定量。结果表明，环丙氟哌酸和内标的定量离子峰面积比值与环丙氟哌酸浓度在0．1～50．0μg／kg范围内呈现良好的线性关系，相关系数为0．9991，方法的定量检测限为0．1μg／kg，回收率为92．5％～98．1％，相对标准偏差（RSD）小于4．3％。将该方法用于市场上10种鱼和贝类样品的检测，结果表明该法具有灵敏、准确的优点，完全满足残留分析的确证检测要求。

同位素稀释-气相色谱-串联质谱法同时测定肉制品中16种欧盟优控多环芳烃

目的基于分子印迹特异性净化及同位素稀释-气相色谱-串联质谱法建立同时检测肉制品中16种欧盟优控多环芳烃的分析方法。方法样品中加入氘代同位素内标,经正己烷-二氯甲烷(7:3,V:V)混合溶液提取,特异性分子印迹柱净化,采用DB-EUPAH色谱柱分离,在多反应监测(multiple reaction monitoring,MRM)模式下采集,内标法定量。结果为降低基质效应,采用基质匹配标准曲线的定量方法。在0.2~200.0 ng/mL范围内,16种欧盟优控多环芳烃均有良好的线性关系,线性相关系数(r2)均大于0.9990,在1.0、5.0、10.0μg/kg3个浓度水平下进行加标回收实验,16种欧盟优控多环芳烃的回收率在85.9%~118.3%之间,相对标准偏差(n=6)在0.4%~6.6%之间,方法的检出限为0.03~0.10μg/kg,定量限为0.10~0.30μg/kg。结论该方法前处理简便高效、灵敏度高、准确度高、抗干扰能力强,可同时实现肉制品中16种欧盟优控多环芳烃的测定。

基于液相色谱-同位素稀释质谱法测定氨基酸的蛋白质定量方法

为定量分析蛋白质,建立蛋白质水解液中氨基酸的液相色谱-同位素稀释质谱分析方法。蛋白质在6 mol/L盐酸溶液存在下130℃水解,经Hypercarb多孔石墨碳色谱柱、0.1%全氟戊酸水溶液/乙腈流动相体系分离,选择脯氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸5种较为稳定的氨基酸,以其相应的稳定同位素标记物为内标括号法定量,结合蛋白质的氨基酸序列信息实现对蛋白质的绝对定量。结果表明,5种氨基酸在10~1000 ng/mL范围内线性关系良好(R^(2)>0.995),检出限和定量限分别在0.02~0.07 ng/mL和0.06~0.2 ng/mL之间,3个不同质量水平下经水解处理的回收率在97.0%~102.4%之间、相对标准偏差在1.1%~3.0%之间。对新型冠状病毒(新冠病毒)N蛋白人源IgG单克隆抗体有证标准物质的分析结果和新冠病毒N蛋白国家计量比对的测量结果满意,证明该方法具有足够的准确度。

同位素稀释-超高效液相色谱-串联质谱法测定化妆品中香兰素和乙基香兰素

建立同位素稀释-超高效液相色谱-串联质谱法同时测定化妆品中两种香兰素类香料的方法。取1g样品,加入50μL质量浓度均为1mg/L的香兰素-D3、乙基香兰素-D5混合同位素内标溶液,以甲醇为提取溶剂,溶解后定容至10mL,在室温下超声提取15min,离心分离后,取1mL上清液用氮气吹干,再用1mL0.1%甲酸水溶液-甲醇(体积比为80∶20)定容,过滤后上机分析。经RRHDEclipsePlusC18色谱柱分离后,使用ESI源对目标物进行电离,在多反应监测模式下绘制色谱图,内标法定量。在5~100μg/L范围内,香兰素、乙基香兰素与内标的质量浓度比与对应色谱峰面积的比线性关系良好,相关系数均大于0.999,方法检出限均为5μg/kg。空白样品加标回收率分别为87.8%~96.1%、80.1%~83.8%,测定结果的相对标准偏差分别为2.5%~3.8%、1.7%~4.6%(n=6)。该方法操作简便,可满足同时测定化妆品中两种香兰素类香料的要求。

气相色谱-串联质谱法测定菊花中29种农药残留量的不确定度评价

为建立菊花中29种农药残留的气相色谱-串联质谱测定方法及不确定度评价,采用气相色谱-串联质谱内标法测定菊花中29种农药残留的含量,并依据测量不确定度的相关评定标准与表示,通过建立数学模型,对检测过程中产生的不确定度进行分析与评价,包括标准溶液配制、标准曲线拟合、供试品测定3大方面.结果表明:菊花中29种农药质量浓度在0.002~0.1 mg/L内线性关系良好,回归方程决定系数R2为0.997 36~0.999 82,定量限0.002 03~1.18 963 mg/L,检出限0.000 64~0.356 89 mg/L,添加回收实验中测定平均回收率为69.85%~93.26%,29种农药测量数值为0.04、0.06、0.1 mg/kg时,得到扩展不确定度为0.004 787~0.058 935 mg/kg.测量结果不确定度显示标准工作液的配制和标准曲线拟合是本实验测定方法不确定度的主要影响因素,该实验结果可以为测定菊花中农药残留量的方法及不确定度评价提供参考.

固相萃取-同位素稀释-气相色谱-串联质谱法测定化妆品中的二甲苯麝香

建立了测定化妆品中二甲苯麝香的固相萃取-同位素稀释-气相色谱-串联质谱分析方法。膏霜、水剂、散粉、香波、唇膏等不同类型的化妆品样品加入甲醇经超声提取后,样品提取液高速离心处理,浓缩上清液,以Sep-Pak Silica固相萃取柱净化,收集二氯甲烷洗脱液,DB-5 MS(30 m×0.25 mm,0.25μm)石英毛细管色谱柱分离后经NCI-GC-MS/MS多反应监测技术进行定性及定量分析。二甲苯麝香的方法定量限为5μg/kg,在5～50μg/kg范围内的3个添加水平的平均回收率为81.1%～86.9%,日内精密度均小于10%,日间精密度均小于12%。本方法准确、快速、灵敏度高,可用于化妆品的实际检验工作。

同位素稀释液相色谱-串联质谱法测定花生中4种黄曲霉毒素

目的建立一种同位素稀释液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)测定花生中的黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2。方法用乙腈-水-甲酸(84:15:1,体积比)溶液直接对花生样品提取,提取液经稀释、离心、过滤后,在180.0μL滤液中加入20.0μL黄曲霉毒素同位素内标,用液相色谱-串联质谱仪多反应监测模式(正离子模式)测定,内标法定量。结果4种黄曲霉毒素的相关系数均大于0.9990,方法的检出限为0.1μg/kg,定量限为0.3μg/kg,平均回收率为88.3%~96.6%,RSD为2.1%~5.7%。结论该方法前处理简单,分析速度快,检出限及定量限低,检测结果准确可靠等优点,满足花生样品中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的同时测定。