S-烯丙基巯基半胱氨酸促进CD8+T细胞杀伤功能的机制研究

目的探究S-烯丙基巯基半胱氨酸(S-allylmercaptocysteine,SAMC)对CD8^(+)T细胞杀伤鼻咽癌细胞功能的影响及机制。方法将人鼻咽癌细胞HK-1和C666-1与SAMC共培养,分为0、25、50、100μmol/L SAMC组,Western blot检测肿瘤细胞程序性死亡配体-1(programmed cell death-ligand 1,PD-L1)表达。CD8^(+)T细胞分别与HK-1和C666-1细胞以10∶1的比例共培养并加入0、25、50、100μmol/L SAMC,检测CD8^(+)T对HK-1和C666-1的杀伤能力,酶联免疫法(ELISA)检测干扰素(INF-γ)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)浓度,构建鼻咽细胞HK-1的小鼠皮下移植瘤模型,分为对照组、CD8^(+)T细胞组、SAMC组、SAMC+CD8^(+)T细胞组,各组小鼠治疗期间测量瘤体积,治疗结束后取小鼠肿瘤组织,Western blot检测肿瘤组织中PD-L1表达,ELISA检测小鼠血清INF-γ和TNF-α浓度。结果相比于0μmol/L SAMC组,25、50、100μmol/L SAMC组HK-1和C666-1细胞PD-L1表达均显著下调(P<0.05),相比于0μmol/L SAMC+CD8^(+)T细胞组,25、50、100μmol/L SAMC+CD8^(+)T细胞组HK-1和C666-1细胞培养上清中INF-γ和TNF-α浓度均能显著增加,HK-1和C666-1细胞裂解率显著增加(P<0.01)。相比于对照组,CD8^(+)T细胞组和SAMC+CD8^(+)T细胞组小鼠瘤体积和瘤重显著下降(P<0.05),小鼠血清INF-γ和TNF-α浓度显著增加,相比于CD8^(+)T细胞组,SAMC+CD8^(+)T细胞组小鼠瘤体积和瘤重显著下降(P<0.05),小鼠血清INF-γ和TNF-α浓度显著增加(P<0.05),肿瘤组织PD-L1表达显著下调(P<0.01)。结论SAMC可通过抑制人鼻咽癌细胞PD-L1表达而促进CD8^(+)T细胞的杀伤功能。

大蒜辣素在大鼠体内转化产物S-烯丙基巯基-L-半胱氨酸的鉴别

目的鉴别大鼠给药后大蒜辣素体内转化产物S-烯丙基巯基-L-半胱氨酸,探讨血浆和皮肤组织中S-烯丙基巯基-L-半胱氨酸的变化情况。方法取SD大鼠,雌雄各半,体重(200±20)g,随机分为8组,分别为空白组及给药后不同时间组,每组每个时间点采用6只大鼠,涂抹大蒜软膏于大鼠背部,分别于0、5、10、15、20、25、30、60 min依次取血液和皮肤组织,UPLC-MS/MS鉴定血液和皮肤组织中大蒜辣素的转化产物S-烯丙基巯基-L-半胱氨酸及变化情况。结果大蒜辣素与半胱氨酸反应产生S-烯丙基巯基-L-半胱氨酸,30 min即可反应90%以上。血浆中转化产物S-烯丙基巯基-L-半胱氨酸在4 h内稳定。UPLC-MS/MS鉴定并确定了皮肤组织和血浆样品大蒜辣素与内源性半胱氨酸的反应产物S-烯丙基巯基-L-半胱氨酸,给予大蒜软膏30 min内血浆和皮肤中S-烯丙基巯基-L-半胱氨酸的浓度逐步增大,60 min时含量降低。结论大蒜辣素可与血浆和组织中的内源性半胱氨酸快速反应,本研究将为大蒜辣素的后续研究提供重要依据。

活血通窍汤辅助治疗对动脉瘤性蛛网膜下腔出血并发脑血管痉挛临床疗效及对血清基质金属蛋白酶-9同型半胱氨酸和可溶性细胞间黏附分子-1水平的影响

目的分析活血通窍汤辅助治疗对动脉瘤性蛛网膜下腔出血(SAH)并发脑血管痉挛(CVS)挛患者临床疗效及对血清基质金属蛋白酶(MMP)-9、同型半胱氨酸(Hcy)和人可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1)的影响。方法选择浙江省义乌市中心医院2021年4月至2022年4月收治的SAH并发CVS患者78例,运用随机数字表法分为对照组(39例)与治疗组(39例)。对照组给予盐酸法舒地尔注射液治疗,治疗组在对照组基础上服用活血通络汤。2组均治疗2周。比较2组治疗疗效,治疗前后中医证候积分、血流动力学、神经功能和认知功能、MMP-9、Hcy和sICAM-1水平变化。结果治疗组总有效率高于对照组(P<0.05)。2组治疗后患者头痛、恶心呕吐和颈项抵抗积分较治疗前降低(P<0.05),治疗组低于对照组(P<0.05)。2组治疗后颈内动脉颅外段平均注速(VICA-Vm)和大脑中动脉平均注速(MCA-Vm)较治疗前降低(P<0.05),治疗组治疗后低于对照组(P<0.05)。2组治疗后mRS评分较治疗前降低,MoCA评分较治疗前升高(P<0.05);治疗组治疗后改良Rankin量表(mRS)评分低于对照组,蒙特利尔认知评估量表(MoCA)评分高于对照组(P<0.05)。2组治疗后MMP-9、Hcy和sICAM-1水平较治疗前降低(P<0.05);治疗组治疗后MMP-9、Hcy和sICAM-1水平低于对照组(P<0.05)。结论活血通窍汤辅助治疗SAH并发CVS患者疗效良好,患者血流动力学改善,神经功能改善,可降低MMP-9、Hcy和sICAM-1水平。

同型半胱氨酸硫内酯-同型半胱氨酸致血管病变的基础

同型半胱氨酸硫内酯是氨基酰-tRNA合成酶在编辑或校正过程中形成的同型半胱氨酸反应产物,它可直接或通过蛋白质同型半胱氨酸化损伤内皮细胞。而内皮细胞同型半胱氨酸硫内酯的合成及蛋白质同型半胱氨酸化程度取决于同型半胱氨酸/蛋氨酸、叶酸、高密度脂蛋白等。同型半胱氨酸硫内酯解酶作为体内降解同型半胱氨酸硫内酯的惟一酶类,其活性的高低在与同型半胱氨酸相关的血管病变中可能起重要作用。

缬沙坦对老年原发性高血压伴轻度认知障碍病情改善及血清同型半胱氨酸、基质金属蛋白酶-9水平的影响

目的探讨缬沙坦对老年原发性高血压伴认知功能障碍患者病情改善及对血清同型半胱氨酸(Hcy)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)水平的影响。方法选取2019年1月至2022年12月联勤保障部队第九二一医院收治的142例老年原发性高血压伴轻度认知功能障碍患者为研究对象,采用随机数字表法将其分为观察组(n=71)和对照组。观察组给予缬沙坦胶囊降压治疗,对照组给予苯磺酸左氨氯地平降压治疗,观察并比较两组患者治疗前后的心率、血压、认知功能、血清Hcy和MMP-9水平变化情况。结果两组患者治疗前后组间、组内的心率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。两组治疗前的收缩压、舒张压水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);观察组治疗后的收缩压低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);但治疗后两组的舒张压比较,差异无统计学意义(P>0.05)。两组患者治疗前的认知功能各项评分及总分比较,差异无统计学意义(P>0.05);观察组治疗后的延迟回忆、抽象、注意、语言4项维度和认知功能总分高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),两组治疗后的命名、定向、视空间与执行功能评分比较,差异无统计学意义(P>0.05)。两组患者治疗前血清Hcy及MMP-9水平比较,差异无统计学意义(P>0.05),观察组治疗后的血清Hcy及MMP-9水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论老年原发性高血压伴轻度认知功能障碍的患者采用缬沙坦和苯磺酸左氨氯地平均可降低血压、改善认知功能障碍、降低血清Hcy、MMP-9水平,相比之下,缬沙坦的作用效果更为明显,值得在临床上推广实施。

同型半胱氨酸硫内酯致血管内皮功能损伤机制与过氧化体增殖物激活型受体γ的相关性

目的探讨同型半胱氨酸硫内酯所致血管内皮功能损伤机制与过氧化体增殖物激活型受体γ活化的关系。方法以血管内皮依赖性和非内皮依赖性及血管组织和血清的生化参数为观察指标,采用与血管环直接孵育法和在体动物灌胃给药法,观察硫内酯对大鼠血管内皮功能的损伤作用,并探讨其机制。结果硫内酯(10mmol/L)与离体大鼠胸主动脉共孵60 min能显著降低乙酰胆碱引起的内皮依赖性舒张反应,降低血管组织中一氧化氮含量,升高超氧化物歧化酶活性和丙二醛含量(P<0.01)。血管环与硫内酯共孵之前先与罗格列酮(1mmol/L)预孵30 m in,能显著改善被硫内酯降低的血管环内皮依赖性舒张反应,恢复血管环组织中一氧化氮含量,抵抗硫内酯诱导的超氧化物岐化酶活性和丙二醛含量的升高(P<0.05或P<0.01)。卡托普利(0.03 mmol/L)和夹竹桃麻素(0.03 mmol/L)有与罗格列酮相似的作用。在体实验表明,大鼠接受硫内酯[50 mg/(kg.d)]灌胃8周,导致血管内皮依赖性舒张反应明显降低,血清丙二醛含量显著升高,对氧磷酶1活性和一氧化氮含量显著降低(P<0.01),但血清中总一氧化氮合酶活性、内皮型一氧化氮合酶活性、诱导型一氧化氮合酶活性、红细胞超氧化物岐化酶活性与正常对照组比无明显改变(P>0.05)。同时给予罗格列酮[10、20和40 mg/(kg.d)]灌胃8周,可剂量依赖性地保护硫内酯损伤的内皮依赖性舒张反应,降低血清丙二醛含量,升高血清一氧化氮含量和对氧磷酶1活性(P<0.05或P<0.01)。卡托普利[20 mg/(kg.d)]和夹竹桃麻素[200 mg/(kg.d)]灌胃8周,也能保护硫内酯所损伤的血管内皮依赖性舒张反应和恢复硫内酯所改变的生化指标(P<0.05或P<0.01)。在离体和在体实验中,各处理因素对硝普钠引起的非内皮依赖性舒张反应无明显影响(P>0.05)。结论同型半胱氨酸硫内酯在体内和体外均可引起血管内皮功能损伤,其机制可能与抑制过氧化体增殖物激活型受体γ的活性或下调其表达,继而诱发体内氧化应激反应有关。

同型半胱氨酸对大鼠血管平滑肌细胞基质金属蛋白酶2表达的影响

目的 观察同型半胱氨酸对大鼠血管平滑肌细胞基质金属蛋白酶2表达的影响，探讨其致动脉粥样硬化可能的机制。方法 体外培养大鼠主动脉平滑肌细胞，加入不同浓度的同型半胱氨酸分别作用24、48和72h，采用免疫印迹法和明胶酶谱分析法检测细胞培养基中基质金属蛋白酶2的表达。结果 同型半胱氨酸浓度在0．5～1．0mmol／L时促进血管平滑肌细胞基质金属蛋白酶2的表达；浓度在5．0mmol／L以上时抑制血管平滑肌细胞基质金属蛋白酶2的表达。同一浓度同型半胱氨酸作用72h明显强于24h和48h。结论 同型半胱氨酸可影响血管平滑肌细胞基质金属蛋白酶2的表达，在动脉粥样硬化中可能起着一定的促进作用。

归龙丸方对0级糖尿病足血清基质金属蛋白酶-9、血清同型半胱氨酸的影响研究

目的观察归龙丸方早期干预0级糖尿病足(DF)的临床疗效及对周围神经传导速度、血管功能的影响。方法将80例0级DF患者按随机数字表随机分为治疗组和对照组各40例。在基础治疗(口服降糖药或胰岛素注射降糖等)的基础上,治疗组加用归龙丸方治疗,对照组加用西洛他唑口服治疗,观察两组患者治疗前后临床症状评分、踝/肱动脉比(ABI)、双下肢腓总神经传导速度、血清基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、血清同型半胱氨酸(Hcy)的变化。结果两组患者临床症状评分治疗后与治疗前比较,差异均有统计学意义(P<0.05);治疗组优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗组治疗后ABI评分与治疗前比较,差异有统计学意义(P<0.05);对照组患者治疗前后ABI评分间差异无统计学意义(P>0.05);治疗组治疗后ABI评分与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后两组患者腓总神经感觉神经传导速度(SCV)、运动神经传导速度(MCV)与治疗前相比,差异均有统计学意义(P<0.05);治疗组与对照组比较,差异亦有统计学意义(P<0.05)。两组患者治疗后血清MMP-9、Hcy水平与治疗前比较,差异有显著统计学意义(P<0.01),治疗组与对照组比较,差异亦有统计学意义(P<0.05)。结论归龙丸方具有温阳养血、活血通络的作用,可以提升ABI评分,提高神经传导速度,降低血清MMP-9、Hcy水平,改善0级DF患者的临床症状,疗效优于西洛他唑。

假单胞菌TS-1138 L-半胱氨酸脱巯基酶的纯化和性质研究

假单胞菌TS-1138L-半胱氨酸脱巯基酶经DEAECellulose-52阶段洗脱、SephadexG-100柱层析被纯化了80.3倍,SDS-PAGE鉴定为单一条带,该酶的相对分子质量为53.0kDa;酶反应的最适pH为7.5,最适反应温度为35℃,该酶的米氏常数为2.37μmol/L,最大反应速度为0.11μmol/mL·min·Pb2+对该酶有很强的激活作用,Zn2+对该酶有较强的抑制作用,羟胺为该酶特异性的抑制剂.

益肾活血胶囊对高同型半胱氨酸血症兔平滑肌细胞增殖及MMP-9基因表达的影响

目的探讨益肾活血胶囊对高同型半胱氨酸(Hcy)血症兔平滑肌细胞增殖及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)基因表达的影响。方法40只新西兰兔,随机平分为正常组、模型组、益肾活血胶囊小剂量组、益肾活血胶囊大剂量组及西药(叶酸、维生素B6、维生素B12)组,除正常组外,其他组建立高Hcy血症及动脉粥样硬化(AS)动物模型,然后分别给予相应的药物治疗。高效液相色谱技术检测血浆Hcy浓度,HE染色观察血管形态学变化,透射电镜观察血管中膜平滑肌细胞超微结构,实时定量PCR检测动脉壁MMP-9基因表达。结果益肾活血胶囊和叶酸等维生素均可明显降低血浆Hcy水平,减轻血管内膜增度,抑制平滑肌细胞增生,下调腹主动脉MMP-9基因表达。益肾活血胶囊大剂量组疗效明显优于小剂量组和西药组。结论益肾活血胶囊可明显降低血浆Hcy水平,抑制Hcy诱导的动脉粥样硬化形成,其机制可能与抑制平滑肌细胞增殖,下调MMP-9基因表达有关。

黄酒对同型半胱氨酸诱导的大鼠血管内皮细胞基质金属蛋白酶2表达的影响

目的:观察黄酒和红葡萄酒是否能抑制同型半胱氨酸(Hcy)诱导的大鼠血管内皮细胞(VECs)中基质金属蛋白酶2(MMP-2)的表达。方法:大鼠原代主动脉VECs经分离培养及纯化鉴定后,取第3～4代细胞用于实验。将Hcy(0、50、100、500、1 000μmol/L)与VECs共同孵育48 h及100μmol/L Hcy与VECs共同培养24、48、72 h,分别用免疫印迹和明胶酶谱法检测Hcy对MMP-2蛋白表达和活性的影响,确定Hcy最佳干预的浓度和时间。每种酒(1.0%、1.2%、1.4%、1.6%、1.8%、2.0%)与100μmol/L Hcy共同孵育VECs 48 h,MTT法检测酒类对细胞活性的影响,确定最佳干预浓度后处理分control组、Hcy组、Hcy+黄酒组、Hcy+红酒组和Hcy+酒精组5组。培养48 h后收集样品,免疫印迹法检测VECs中MMP-2的表达量,明胶酶谱法测定VECs上清液中MMP-2的活性。结果:Hcy在50～500μmol/L呈浓度依赖性地促进MMP-2蛋白表达和活性的增强(P<0.05或P<0.01),Hcy在100μmol/L时干预24、48、72 h MMP-2蛋白表达和活性的增强呈时间依赖性,48 h时最明显(P<0.01)。与Hcy组相比,黄酒组和红酒组VECs MMP-2蛋白表达及上清液中MMP-2活性显著下降(P<0.05),酒精组MMP-2蛋白表达及上清液中MMP-2活性下降,但差异均无统计学意义(P>0.05)。与酒精组相比,黄酒组和红酒组VECs MMP-2表达及上清液中MMP-2活性的差异有统计学意义(P<0.05),黄酒组和红酒组之间无显著差异(P>0.05)。结论:Hcy能增强血管内皮细胞MMP-2蛋白表达及酶的活性,小剂量的黄酒和红葡萄酒均能抑制Hcy诱导的MMP-2表达及活化。

同型半胱氨酸和基质金属蛋白酶9与冠心病的相关性研究

目的通过观察不同类型冠心病(coronary heart disease,CHD)患者血浆高敏C反应蛋白(high sensitivity C-reactive protein,hsCRP)、同型半胱氨酸(homocysteine,HCY)及基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinases-9,MMP-9)的水平变化,探讨hsCRP、HCY和MMP-9与CHD的发生发展及与动脉粥样硬化斑块稳定性的相关性。方法选取我院心内科因胸痛症状入院且入院后行冠状动脉造影术的患者267例,其中CHD组202例,对照组(冠状动脉造影正常者)65例,CHD组又分为急性心肌梗死组(AMI)68例,不稳定型心绞痛组(UA)81例,稳定型心绞痛组(SA)53例。采用双抗体夹心酶联免疫吸附测定法(ELISA)检查血浆MMP-9的水平,hsCRP、HCY由检验科用免疫散射比浊法检测。结果①CHD组hsCRP、HCY、MMP-9水平均高于对照组(P<0.01)。②AMI组、UA组患者血浆hsCRP、HCY和MMP-9水平均显著高于对照组及SA组(P<0.05)。③AMI组与UA组hsCRP水平及HCY水平差异无统计学意义。④AMI组MMP-9水平显著高于UA组(P<0.01)。⑤CHD患者血浆hsCRP分别与HCY、MMP-9呈正相关(r=0.128、0.199,P<0.05),HCY和MMP-9之间亦成正相关(r=0.400,P<0.05)。⑥Logistic逐步回归分析显示:年龄、高血压史、总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、吸烟、hsCRP、MMP-9、HCY是冠心病的独立影响因素,且HCY、MMP-9及吸烟是急性冠状动脉综合征患者的独立相关因子。结论①hsCRP、HCY、MMP-9水平升高是CHD的独立危险因素;②急性冠状动脉综合征患者(AMI组和UA组)hsCRP、HCY、MMP-9水平升高可能提示动脉粥样硬化斑块的不稳定性。

联合运用晚期糖基化终产物和同型半胱氨酸诱导人脐静脉内皮细胞血管细胞黏附因子1 mRNA表达及机制

目的探讨联合运用晚期糖基化终产物和同型半胱氨酸对人脐静脉内皮细胞血管细胞黏附分子1表达的影响和氧化应激的机制。方法酶消化法获取人脐静脉内皮细胞。逆转录聚合酶链反应检测血管细胞黏附分子1基因的表达。活性氧检测试剂盒检测细胞内氧自由基的荧光信号强度。结果晚期糖基化终产物(10-4～10-1g/L)和同型半胱氨酸(1.35×10-3～1.35g/L)组呈浓度依赖性诱导人脐静脉内皮细胞血管细胞黏附分子1的表达,晚期糖基化终产物(10-4g/L)和同型半胱氨酸(1.35×10-3g/L)联合作用能进一步增加人脐静脉内皮细胞血管细胞黏附分子1基因的表达(1.09±0.18),与单独晚期糖基化终产物(0.14±0.07)和同型半胱氨酸组(0.18±0.06)相比其表达分别增加了7.78倍和6.05倍(P<0.01);还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶特异性抑制剂二亚苯基碘能显著抑制晚期糖基化终产物和同型半胱氨酸联合诱导的血管细胞黏附分子1基因的表达(0.20±0.09比1.19±0.23,P<0.01);晚期糖基化终产物组和同型半胱氨酸组均能增加人脐静脉内皮细胞内氧自由基的荧光信号强度,晚期糖基化终产物和同型半胱氨酸联合作用时,细胞内氧自由基的荧光信号强度水平进一步升高,且二亚苯基碘能明显抑制上述效应。结论晚期糖基化终产物和同型半胱氨酸能增加细胞内氧自由基的荧光信号水平,使血管细胞黏附分子1基因的表达上调,且两者存在协同效应;氧自由基水平的增加是导致血管细胞黏附分子1基因表达升高的重要因素;血管细胞黏附分子1可能是通过还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶途径实现的。

假单胞菌TS1138 L-半胱氨酸脱巯基酶基因的克隆与表达

提取假单胞菌TS1138染色体基因,以自行设计的引物通过PCR方法扩增得到L-半胱氨酸脱巯基酶基因(cds),将其克隆至克隆载体pBluescript SKⅡ,并转化入大肠杆菌DH5α,测定了含有脱巯基酶基因(cds)的1．2 kb DNA片段的序列；同时,将其克隆至表达载体pETH,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,用SDS-PAGE方法对表达产物进行分析,重组蛋白量占菌体总蛋白的36．8%,经Ni-NTA柱亲合层析后,重组蛋白纯化率达88%以上．用非变性PAGE方法对基因表达的脱巯基酶进行了鉴定．

同型半胱氨酸硫内酯损伤血管内皮细胞的机制研究

目的:在体外培养的内皮细胞中探讨同型半胱氨酸硫内酯(HTL)致血管内皮细胞损伤作用及其机制。方法:体外培养的人脐静脉内皮细胞,与不同浓度的HTL孵育,用ELISA检测内皮细胞中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和可溶性细胞间黏附分子(sICAM)-1的浓度,荧光显微镜检测活性氧簇(ROS)的含量、核转录因子κB(NF-κB)的激活及IκBα蛋白表达,同时检测内皮细胞活力、乳酸脱氢酶(LDH)漏出量与一氧化氮(NO)水平。结果:HTL(1 mmol/L)孵育内皮细胞3 h后显著增加细胞ROS含量,刺激NF-κB转入胞核而活化,孵育细胞24 h后明显升高细胞上清液中sICAM-1和TNF-α浓度;降低细胞活力和NO的水平,增加LDH的漏出量。抗氧化剂NAC、NADPH氧化酶抑制剂Apocynin和NF-κB抑制剂PDTC可显著抑制HTL所致ROS含量的增加以及NF-κB激活,降低HTL刺激的培养液中sICAM-1和TNF-α的浓度,增加培养液中NO水平。结论:HTL诱导的血管内皮细胞功能损伤的机制可能与诱导氧化应激以及NF-κB活化有关。

S-烯丙基巯基半胱氨酸对乳腺癌细胞MCF-7增殖和凋亡的影响

目的观察S-烯丙基巯基半胱氨酸(SAMC)对人乳腺癌细胞MCF-7增殖和凋亡的影响。方法体外培养乳腺癌MCF-7细胞,分成4组,分别加入0、25、50、100μmol/L的SAMC。分别于给药24、48、72 h后采用MTT法测量吸光度值(OD值)并计算细胞增殖率,采用流式细胞仪测算细胞凋亡率,采用线性相关分析法分析SAMC浓度与细胞的关系。结果同一浓度组内,给药后24、48、72 h后MCF-7细胞增殖率依次下降(P均<0.01);相同培养时间下,0μmol/L组、25μmol/L组、50μmol/L组、100μmol/L组细胞增殖率依次下降(P均<0.01)。给药24、48、72 h后MCF-7细胞增殖率与SAMC浓度呈负相关(r分别为-0.17、-0.35、-0.71,P均<0.05)。同一浓度组内,给药后24、48、72 h后MCF-7细胞凋亡率依次增高(P均<0.01);相同培养时间下,0μmol/L组、25μmol/L组、50μmol/L组、100μmol/L组细胞凋亡率依次增高(P均<0.01)。MCF-7细胞凋亡率与SAMC浓度呈正相关(r=0.27,P<0.05)。结论 SAMC能够明显抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖,并促进细胞凋亡,作用与浓度呈一定相关性。

罗格列酮对同型半胱氨酸硫内酯所致内皮细胞损伤的保护作用与PPARγ介导的抗氧化相关

目的探讨罗格列酮对同型半胱氨酸硫内酯(HTL)所致血管内皮细胞损伤的保护作用及其机制。方法在培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC),用HTL与HUVEC共孵,用罗格列酮、卡托普利、夹竹桃麻素、过氧化体增殖物激活型受体γ(PPARγ)拮抗剂GW9662、核因子κB(NF-κB)信号传导通路抑制剂吡咯二硫代氨基甲酸乙酯(PDTC)进行预干预,MTT比色法检测细胞活力,逆转录聚合酶链反应检测PPARγm RNA的表达,荧光探针DCFADA检测细胞内活性氧簇(ROS),免疫荧光检测法测定NF-κB P65,酶标法检测可溶性细胞间黏附分子1(s ICAM-1)。结果 HTL与HUVEC共孵育24 h,明显降低内皮细胞活力,增加细胞内ROS水平和NF-κB的活化,升高细胞培养液中s ICAM-1的浓度(P<0.01)。罗格列酮(0.001、0.01、0.1 mmol/L)能浓度依赖性地拮抗HTL所致的内皮细胞活力降低,抑制细胞内ROS水平的增加和NF-κB的活化,降低细胞培养液中s ICAM-1的浓度,与单独HTL损伤组比较,差异有显著性(P<0.05或P<0.01)。上述保护作用可被选择性的PPARγ拮抗剂GW9662所拮抗。夹竹桃麻素、卡托普利、PDTC对HTL引起的上述指标改变也有明显改善作用。结论罗格列酮对HTL所致的HUVEC损伤有显著保护作用,其机制可能与PPARγ介导的氧化应激反应的抑制有关。

姜黄素对同型半胱氨酸硫内酯所致Eahy926细胞损伤的保护作用

目的研究姜黄素对同型半胱氨酸硫内酯(HTL)诱导融合内皮细胞株(eahy926)损伤的保护作用及其机制。方法以体外培养的eahy926细胞为研究对象,建立HTL损伤模型,检测LDH漏出量,SOD和MDA含量,通过RT-PCR法检测细胞中对氧磷酶1(PON1)mRNA,TNF-αmRNA水平。结果姜黄素可明显降低培养液中LDH活力,显著提高培养液中SOD含量,降低MDA含量;抑制HTL刺激的培养液中TNF-α浓度的升高,提高细胞中PON1mRNA水平,降低TNF-αmRNA表达。结论姜黄素对HTL诱导的eahy926细胞损伤具有一定保护作用。

同型半胱氨酸硫内酯对ECV-304细胞凋亡及ROS生成的影响

目的 探讨同型半胱氨酸硫内酯(HcyT)对人脐静脉内皮细胞株(HUVEC)的损伤作用及其可能机制。方法 采用倒置显微镜、四唑盐(MTT)比色法及碘化吡啶(PI)染色流式细胞仪检测HeyT对细胞毒性作用，以荧光标记流式细胞仪检测细胞内反应性氧类(ROS)的生成。结果 一定剂量HcyT刺激后，内皮细胞发生凋亡，且凋亡呈浓度时间依赖性。随着HcyT浓度的增加，ROS的生成逐渐增加。结论 HcyT通过ROS呈时间浓度依赖性地诱导内皮细胞凋亡，这可能是Hey致血管病变的机制之一。

基质金属蛋白酶-9、同型半胱氨酸及脂蛋白(a)在急性脑卒中患者中的水平及临床意义

目的探讨急性脑卒中患者血清中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、同型半胱氨酸(Hcy)及脂蛋白(a)[Lp(a)]水平检测的临床意义,分析各指标水平与急性脑卒中患者美国国立卫生研究所脑卒中量表(NIHSS)的相关性,以及与预后的关系。方法选取经影像学检查确诊的急性脑卒中患者203例纳入脑卒中组,其中缺血性脑卒中患者165例,出血性脑卒中患者38例。选择同期体检健康者100例纳入对照组。分别测定急性脑卒中患者入院第2天及健康体检者体检当日的MMP-9、Hcy、Lp(a)等指标水平,记录患者入院时的NIHSS评分,并根据NIHSS评分分为重度组、中度组、轻度组。对所有患者进行6个月的随访观察,记录患者发生不良事件的情况。结果脑卒中组与对照组有高血压史、吸烟史患者比例,空腹血糖、三酰甘油、D-二聚体、Hcy、载脂蛋白(a)、白细胞计数、C反应蛋白、降钙素原、MMP-9、Lp(a)水平比较,差异有统计学意义(P<0.05)。NIHSS评分重度组和中度组的患者血清中的MMP-9、Hcy、Lp(a)水平高于轻度组,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关分析结果显示,患者血清MMP-9、Hcy、Lp(a)与NIHSS评分呈显著正相关(r分别为0.572、0.475、0.590,P=0.001)。患者入院时的MMP-9、Hcy、Lp(a)的表达水平与6个月内的不良事件发生率密切相关,是影响脑卒中患者预后的独立危险因素。结论急性脑卒中患者血清MMP-9、Hcy、Lp(a)水平明显升高,且与病情的严重程度及不良事件发生率相关,可在一定程度上反映急性脑卒中严重程度,并用于评估预后。