来自噬菌体抗体库识别KG1a细胞的scFv5C1的高效表达、纯化及其生物学特性

目的 为深入研究源于噬菌体抗体库特定单链抗体 (scFv)的功能和其识别抗原的分子特征 ,将识别KG1a细胞的单链抗体 5C1scFv高效表达、纯化 ;用scFv测定未知抗原的相对分子质量 (Mr) ;并研究 5C1scFv对KG1a部分细胞生物学特性的影响。方法 基因重组构建表达 5C1scFv的载体pSTE 5C1,在大肠杆菌中诱导表达 ,金属离子螯和亲和层析法纯化 ,获得高纯度的活性 5C1scFv ;借助生物素 链亲和素的高亲和力和高灵敏度的显色系统 ,用Westernblot分析其识别的KG1a细胞膜蛋白的Mr;用聚集实验分析 5C1scFv对KG1a细胞同型聚集的影响。结果 5C1scFv在大肠杆菌中获高效表达 ,纯化后活性蛋白产量可达每升培养物 5 0～ 6 0mg ,纯度大于 95 % ;成功地测定了其识别抗原的Mr 为 (85 .0 /12 4.5 )× 10 3;并确认 5C1scFv以浓度依赖方式抑制KG1a细胞的同型聚集。结论 高效表达纯化的 5C1scFv特异性识别Mr 为 (85 .0 /12 4.5 )× 10 3 的KG1a细胞膜表面分子 ,此分子可能是一种在KG1a细胞表面表达的参与细胞同型聚集的分子或受体。