基于荧光标记核酸探针及核酸染料SYBR GreenⅠ定量检测单链DNA

建立了同步双色荧光定量检测单链DNA的方法。利用氧化石墨烯将荧光标记核酸探针的荧光猝灭,而当其与待测液中的目标DNA发生杂交反应,生成的双链DNA脱离氧化石墨烯而使得染料荧光得以恢复,同时生成的双链DNA与核酸染料SYBR GreenⅠ结合,使荧光增强。在优化条件下,目标DNA浓度在1×10"10～2×10"9mol/L范围内时,两种荧光染料的荧光强度之和与目标DNA的浓度之间具有良好的线性关系,拟合的回归方程为y=63.388x+9.3862,R2=0.9954,检出限为85 pmol/L。本方法灵敏度高、准确性及选择性好。

荧光原位杂交技术检测聚磷菌方法的研究

研究通过正交实验和平行实验选择对纯培养的聚磷菌进行荧光原位杂交检测的最佳方法。经试验确定，聚磷菌探针杂交时间为2．5h，杂交温度为46℃，甲酰胺浓度为40％。在利用2种或2种以上探针进行荧光原位杂交时，用重复多色法比同步多色法效果要好，即分别用探针与样品杂交的效果好于同时用探针与样品杂交的效果。在用重复双色FISH法时，当两种探针的杂交温度，杂交液甲酰胺浓度等条件相近而杂交时间差异较大时可以在一种探针杂交完成后不经过洗涤就立刻进行再次杂交；而当两种探针杂交条件差异较大时，最好是一种探针杂交完成后洗涤再进行再次杂交。利用确定的实验方法，可以利用不同探针对活性污泥中不同种细菌进行同时检测，获取更多的活性污泥微生物信息。