蒲公英中黄酮的响应面法优化提取和同步荧光法检测研究

本试验应用响应面法优化超声-微波协同萃取蒲公英中黄酮的提取工艺,并建立测定黄酮含量的同步荧光法。在单因素试验结果的基础上,以提取溶剂乙醇浓度、微波功率、萃取时间和料液比为自变量,提取液的荧光强度为响应值,设计4因素3水平响应面试验,优化蒲公英中黄酮的提取工艺;单因素试验确定同步荧光法的测定条件。结果表明:1)判定系数R^(2)=0.9648,说明模型与实际结果拟合程度好,所得模型能解释96.48%的响应值改变,校正判定系数(R_(Adj)^(2)=0.9295)与预测判定系数(R_(Pred)^(2)=0.8860)接近。2)响应面法优化超声-微波协同萃取技术提取蒲公英中的黄酮,其最佳提取条件为乙醇浓度50%,微波功率250 W,萃取时间30 min,料液比1∶30(g∶mL)。3)同步荧光法的最佳测定条件为波长差值(Δλ)=55 nm,Al(NO_(3))_(3)浓度0.2%,加入pH=6的醋酸-醋酸钠缓冲液1 mL,室温条件下反应50 min。在最佳测定条件下,测得蒲公英中黄酮的含量为3.52 mg/g。由此可见,响应面法优化提取工艺能较好地用于蒲公英中黄酮的提取,同步荧光法测定黄酮含量的方法干扰少、准确度高。

基于导数-恒基体同步荧光的纺织品中萘胺同分异构体快速定量检测

2-萘胺是纺织品中禁用的一种致癌芳香胺,其与同分异构体1-萘胺(非禁用)的结构、性质相似,传统检测方法在检测纺织品实际样品时可能会造成阳性结果的误判,因此相关检测标准要求采用多种方法对阳性结果进行复查确认。目前常规的复查方法为气相色谱-质谱联用法和高效液相色谱法,存在操作复杂、耗时长等弊端,因此开发一种简单、快速的方法用于鉴别和定量纺织品中的致癌芳香胺及其异构体具有重要意义。导数-恒基体同步荧光法具有灵敏度高、选择性好、可消除背景干扰等特点,已广泛地应用于复杂基质中物质的测定。为了实现纺织品中1-萘胺(1-NA)和2-萘胺(2-NA)的快速鉴别定量,建立了一种导数-恒基体同步荧光分析法。研究确立了一条合适的恒基体同步荧光扫描路径,提高1-NA和2-NA的光谱分辨率;结合一阶导数技术消除背景干扰,得到1-NA和2-NA的净信号。以上两种技术的结合,能够保持较高的灵敏度和选择性,同时避免了耗时的物理分离过程且无需多次扫描。整个光谱的扫描过程可在2分钟内完成。实验结果表明,1-NA和2-NA的检出限分别为0.001 mg/L(相当于纺织品中的0.1 mg/kg)和0.006 mg/L(相当于纺织品中的0.6 mg/kg),远远低于国家标准中规定的限量(20 mg/kg);1-NA的加标回收率在89.1~122.1%之间,2-NA的加标回收率在88.5~111.0%之间,相对标准偏差均小于9.3%;将所提出的方法与HPLC法作统计比较,得到的测试结果之间无显著差异。因此,所提出的方法具有较高的选择性、灵敏度,能够准确、可靠地鉴别和定量2-NA及其同分异构体1-NA,可应用于纺织品中禁用芳香胺的实际检测。

同步荧光法对三种芳香族氨基酸的测定

建立同时测定混合体系中色氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸的同步荧光分析方法。以波长差Δλ=70nm进行同步荧光扫描,色氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸的同步特征峰(以激发波长表示)分别位于280、228、206nm。酪氨酸和苯丙氨酸可直接由同步特征峰的信号强度进行定量;色氨酸的同步特征峰略受酪氨酸的弱峰影响,采用一阶导数处理后,即可消除干扰,实现定量分析;检出限分别为6.9×10-9、3.8×10-8、4.2×10-7mol/L。该方法无需预分离过程,用于啤酒及氨基酸注射液样品的测定,结果满意。

肌红蛋白的同步荧光光谱

首次对肌红蛋白的同步荧光光谱进行了研究，并对肌红蛋白的荧光峰予以归属。当 为８０ ｎｍ时，３３５ｎｍ处的荧光峰来自肌红蛋白分子中色氨酸残基； 为２０ｎｍ时，３０８ｎｍ处的荧光峰主要为酪 氨酸残基的贡献，很小一部分是由色氨酸残基贡献的； 为４０ｎｍ时，分别在３２２和５９６ｎｍ处观察到两 个荧光峰，３２２ｎｍ的荧光峰为酪氨酸和色氨酸残基的共同贡献，５９６ｎｍ的荧光峰则归属为肌红蛋白分子 中血红素的贡献。

导数同步荧光光谱法同时测定食品中的合成色素

建立了测定食品中胭脂红和日落黄的一阶导数同步荧光光谱法。研究了胭脂红和日落黄在不同pH值溶液中的同步荧光光谱特征，确定了同步荧光光谱的最佳波长差。当Δλ＝130 nm时，胭脂红和日落黄导数同步荧光光谱的零交点位于313.6和302.8 nm ，可分别测定日落黄和胭脂红的含量。胭脂红在0.1～4.0 mg·L -1、日落黄在0.1～2.0mg·L -1范围内浓度与导数同步荧光值呈线性，相关系数（R2）为0.9992和0.9966；检出限为0.041和0.019 mg· L -1；相对标准偏差（RSD ）为4.8％和4.6％。回收率在91.0％～110％之间。测定结果与导数-分光光度法的结果相一致，具有简便、快捷等特点，能够同时测定食品中胭脂红和日落黄的含量。

竹红菌甲素与肌红蛋白和血红蛋白相互作用的同步荧光光谱研究

利用同步荧光光谱方法研究了竹红菌甲素(HA)对肌红蛋白和血红蛋白构象的影响。结果表明,HA能够使肌红蛋白和血红蛋白的构象发生改变,导致蛋白质分子中色氨酸和酪氨酸残基所处微环境由原来的疏水环境不同程度地向亲水环境转变。

同步荧光分析法的应用及其新进展

同步荧光技术是解决多组分荧光物质同时测定的良好手段之一。本文从恒波长同步荧光法、恒能量同步荧光法、可变角同步荧光法、恒基体同步荧光法以及它们与导数技术、低温技术、化学计量学方法的联用等方面对同步荧光技术领域出现的新技术及应用作一评述。

同步荧光光谱分析法在海面溢油鉴别中的应用研究

为了实现海面溢油快速筛选和鉴别,文章提出了应用同步荧光光谱技术结合系统聚类分析方法鉴别海面溢油的方法,并应用于不同原油样品及风化油样的分析。结果表明,选择波长差为25nm,采用300～500nm范围内数据进行聚类分析,可以将原油样品和风化样品完全区分开,不同海区、不同采集时间的原油样品可大致分开。作为溢油鉴别的一种辅助方法,同步荧光光谱分析法能够对可疑油源及溢油样品实现初步筛选。

应用同步荧光光谱和支持向量机快速鉴别油茶籽油真伪

为快速鉴别油茶籽油真伪,采用同步荧光光谱和支持向量机建立油茶籽油真伪鉴别模型。结果表明,原始同步荧光光谱通过标准归一化(SNV)预处理,经过主成分分析提取5个主成分,选用径向基函数(RBF)作为核函数,采用经网格搜索和交叉验证优化得到的两个建模参数惩罚因子C=0.5和核参数γ=0.0313,建立的模型最佳。该模型对训练集和预测集的判别率均可达到100%。说明采用同步荧光光谱结合支持向量机可以快速、准确地鉴别油茶籽油真伪。

同步荧光光谱法研究丹参素-牛血清白蛋白体系的荧光增强效应

采用紫外光谱法和同步荧光光谱法研究了丹参素与牛血清白蛋白的结合特性。体系的紫外光谱显示,丹参素与牛血清白蛋白(BSA)之间发生了相互作用并生成新的复合物,同步荧光光谱则表明,丹参素对BSA存在荧光增强效应。随着丹参素浓度的增加,Δλ=15 nm时体系荧光强度明显增强,最大发射波长为285 nm,且不随浓度增加而发生变化。Δλ=60 nm时发射光谱出现蓝移,体系荧光强度无明显增强,说明丹参素的加入改变了BSA酪氨酸残基附近的微环境,BSA腔内疏水环境的极性增大,肽链的伸展程度可能有所增加。该文首次以体系的同步荧光光谱为源数据对小分子药物与血清白蛋白的结合参数进行计算。求得25、35、45℃时丹参素与BSA体系的结合常数分别为1.43×106、1.25×106、5.00×105 L/mol;热力学参数ΔH=-10.28 kJ/mol,ΔS>0,表明丹参素与BSA之间的相互作用主要是静电作用力。

卟啉全内反射同步荧光法测定蛋白质

应用全内反射与同步荧光相结合的技术,建立了利用蛋白质吸附在液-固界面上的同步荧光信号来 测定本体蛋白质溶液浓度的新方法。其原理为mesi-四(4-磺酸基苯基)卟啉(TPPS)标记牛血清蛋白(BSA)在 石英界面的吸附后信号强度随本体溶液浓度的增加呈线性关系。方法的检出限是94 ng·mL-1。用于实际人 血清蛋白样品的测定,结果令人满意。

稀土金属离子及pH诱导牛血清白蛋白构象变化的同步荧光光谱研究

用同步荧光法并辅以普通荧光法对不同浓度稀土离子及pH诱导的牛血清白蛋白 (BSA)构象变化进行了详细研究 ,发现稀土离子使色氨酸 (Trp)残基的荧光蓝移 ,荧光强度降低 ;酪氨酸 (Tyr)残基荧光峰位置不变 ,稀土离子浓度较低时 ,荧光峰强度降低 ,而当浓度较高时 ,Tyr残基荧光峰强度反而增强。据此推断了稀土离子与BSA结合反应中Trp残基微环境和Tyr残基微环境及构象的变化并与pH引起的变化进行了比较。

导数-同步荧光光谱法直接测定尿样中的洛美沙星

研究了洛美沙星在不同 pH值介质中的荧光特性 ,发现在 pH =3 3时 ,洛美沙星荧光波长有 4 0nm红移 ,据此建立了一种导数 同步荧光光谱法直接测定尿样中洛美沙星的新方法。经样品测定 ,其检测限为0 35mg·L- 1 ,平均回收率为 97%～ 10 4 % ,相对标准偏差为 0 83%～ 1 6 2 %。

西维因和蝇毒磷的同步荧光光谱解析及应用研究

研究了西维因、蝇毒磷的荧光行为，发现在pH3．0的Britton-Robinson缓冲介质中，两种农药均能产生较强的的荧光，但光谱相互重叠，当以波长差△λ=60nm进行同步荧光扫描，它们的同步荧光光谱得到较好的分离，同步荧光峰（以激发波长表示）分别位于280和322nm，可同时分别对其进行定量测定。西维因和蝇毒磷的线性范围分别为0．016-0．384μg·mL^-1和0．016～0．320μg·mL^-1；检出限分别为0．015和0．010μg·mL^-1。混合样本分析无需分离，方法简单、快速，用于蔬菜、水果、大米和水样等测定，结果满意。

硫酸氧化同步荧光法测定猪肉中的螺旋霉素残留

螺旋霉素被浓硫酸氧化后由非荧光物质转化为荧光物质,采用发射波长和激发波长相差25 nm的波长间隔扫描其400～600 nm内的同步荧光光谱,可于494 nm获得最强荧光发射.基于此,建立了一种测定螺旋霉素残留的新方法.在最优条件下,线性动态范围为0.02～4 mg/L;检出限为0.33μg/kg;样品的加标回收率100.31%～107.78%.该方法已用于猪肉中螺旋霉素残留的测定.

减压渣油组分中芳环数分布的同步荧光光谱研究

减压渣油组分的同步荧光光谱能够较好地反映出各极性和芳香度不同的组分的芳香环系大小。平均来说，减压渣油的芳香分中的芳香结构以２～４环为主，胶质中的芳香结构以３～５环为主。

二阶导数同步荧光光谱测定卷烟主流烟气中的苯并(a)芘

研究了卷烟主流烟气粒相物中苯并(a)芘(BaP)的同步荧光及其一阶和二阶导数光谱,发现二阶导数同步光谱可明显减少背景及BaP同系物对BaP测定的干扰.据此建立了一种固相萃取-二阶导数同步荧光光谱法测定卷烟主流烟气粒相物中BaP的新方法.方法检测限为0.2ng·mL-1,平均回收率为80.2%～86.2%,相对标准偏差为2.64%～3.02%.

导数同步荧光法快速检测香菇中的多菌灵

建立了香菇中多菌灵的导数同步荧光检测法。该方法快速、简便，不需要复杂的前处理。香菇中多菌灵的线性范围为0．05．2．5mg／kg，检出限为0．63μg／kg，回收率为96％～101％。

同步荧光光谱结合CARS变量优选预测猪肉中四环素残留含量

为快速检测猪肉中的四环素残留含量,采用同步荧光法结合竞争适应重加权采样(CARS)变量优选法建立了预测猪肉中四环素残留含量的支持向量回归(SVR)模型。从样本的三维同步荧光光谱中确定了最佳波长差为65nm,采用CARS方法从中挑选出与四环素相关的特征波长变量,并与连续投影算法(SPA)及遗传算法(GA)进行比较。最后,应用SVR算法对优选出的16个波长变量建立猪肉中四环素含量的预测模型。分析发现,多元散射校正(MSC)光谱预处理后的CARS方法优于SPA及GA变量选择方法,可以有效地筛选出全光谱中的特征波长变量。CARS-SVR建立的四环素预测模型优于原始光谱的SVR模型,其预测集的决定系数(R2)和预测均方根误差(RMSEP)分别为0.961 2和10.94mg/kg。研究结果表明,采用同步荧光法结合CARS-SVR模型可以预测猪肉中的四环素残留含量,且CARS-SVR能有效地简化模型并提高预测精度。

活体浮游植物同步荧光光谱特征分析研究

测量了东海五种常见浮游植物在3个温度(25,20,15℃)、3个光照(7000,4100,1100 Lx)下的不同生长期的同步扫描荧光光谱,对其进行了多项式平滑和归一化处理,考察了同种藻的光谱相似性,并运用主成分分析确立了其标准谱。分析结果表明,中肋骨条藻(Skeletonema costatuma,Sk)、等鞭金藻(Isochrysis galbana,Is)、岛国大扁藻(Platymonas helgolanidica,Pl)的特征光谱相似度高,塔玛亚历山大藻(Alexandrium tamarense)和裸甲藻(Gymnodiniumstein)的光谱相似度稍差。实验所用的硅藻中肋骨条藻与甲藻塔玛亚历山大藻、裸甲藻的标准光谱明显不同。