长链非编码RNA同源异型基因簇A远端转录本在肿瘤中的研究进展

长链非编码RNA(lncRNA)是一种转录本长度超过200个核苷酸,没有蛋白质编码功能的特殊RNA分子。长期以来,lncRNA被当作基因组的"垃圾序列",但随着研究的不断深入,人们发现lncRNA广泛参与细胞的生物学过程。lncRNA与多种恶性肿瘤的发生、发展密切相关。而同源异型基因簇A远端转录本(HOTTIP)属于lncRNAs中的一种,其在多种恶性肿瘤中异常表达,所以了解HOTTIP在调节肿瘤细胞生命活动中的具体作用具有十分重要的意义。对其在肿瘤细胞发生、发展中的潜在分子机制进行分析,可为今后肿瘤的预防和治疗提供新思路。

无远端同源盒2基因在口腔颌面部畸形发生中的作用及作用机制研究进展

口腔颌面部畸形是口腔颌面外科常见疾病,根据畸形发生的部位可分为牙齿发育畸形、颌骨发育畸形。无远端同源盒(distal-less homeobox,DLX)基因参与调控细胞周期与凋亡、器官形态发育等过程,DLX2基因作为DLX基因家族中的一员,其表达变化或功能调节机制的紊乱都将导致牙齿发育畸形、颌骨发育畸形等口腔颌面部畸形的发生。DLX2基因导致口腔颌面部畸形的作用机制与DLX2基因参与成骨细胞分化和细胞周期的调控有关,可影响颌面部骨骼及牙齿的形态和功能;DLX2基因还可通过调控下游基因的效应表达,影响相关细胞因子的相互作用从而影响软骨生成,导致口腔颌面部畸形。

微小RNA539通过调控远端同源异型盒2基因表达介导MC3T3-E1细胞成骨矿化过程

目的研究在成骨细胞分化中微小RNA(miRNA)调节成骨细胞矿化的机制。方法用β-甘油磷酸钠和抗坏血酸诱导MC3T3-E1细胞矿化过程。将MC3T3-E1细胞分为2组:对照组(α-MEM培养基)和矿化组(α-MEM培养基+50 mg·L^-1抗坏血酸+10 mmol·L^-1β-甘油磷酸钠)。用实时荧光定量聚合酶链反应和蛋白质印迹法检测2组细胞的miRNA-539和Dlx2 mRNA表达水平和蛋白表达水平。结果第14天,对照组和矿化组的miRNA-539表达水平分别为0. 97±0. 08,0. 43±0. 08;对照组和矿化组的Dlx2 mRNA表达水平分别为1. 14±0. 13,4. 30±0. 42。第21天,对照组和矿化组的miRNA-539表达水平分别为1. 21±0. 03,0. 34±0. 05;对照组和矿化组的Dlx2 mRNA表达水平分别为0. 90±0. 21,4. 67±0. 73。矿化组与对照组相比,上述指标的差异均有统计学意义(均P <0. 05)。Dlx2蛋白结果的趋势与基因一致。结论 miRNA-539在成骨细胞矿化过程中起负调控作用,而且是通过作用于Dlx2基因来达到这一效果的。

健骨颗粒对去卵巢小鼠miR-141及成骨基因Dlx5/Msx2/Runx2的影响

目的:观察健骨颗粒对去卵巢小鼠骨组织中miR-141、Dlx5、Msx2、Runx2表达的影响,探讨健骨颗粒防治绝经后骨质疏松的作用机制。方法:30只C57小鼠按照随机数字表法分为假手术组、生理盐水组和健骨颗粒组,每组10只。假手术组只切除卵巢周围脂肪,不切除卵巢;生理盐水组和健骨颗粒组均手术切除双侧卵巢,并分别灌服生理盐水和健骨颗粒。干预8周后处死取材,采用micro CT观察胫骨形态并计量;realtime PCR检测骨组织miR-141、Dlx5、Msx2、Runx2等mRNA的表达;Western blot法检测骨组织Dlx5、Msx2、Runx2等蛋白含量。结果:与生理盐水组比较,健骨颗粒组骨小梁数量、宽度、长度、形态和分布部分恢复,密度和联结性有所增加,仍无法恢复到假手术组水平,但皮质骨面积增加,骨髓腔缩小,基本恢复到假手术组水平;骨矿物质含量(BMC)、骨密度(BMD)、骨体积分数(BV/TV)、骨表面积和骨组织体积比值(BS/TV)、骨小梁数量(Tb.N)均明显升高;骨小梁分离度(Tb.Sp)、结构模型指数(SMI)指标均明显降低;小鼠骨组织miR-141、Msx2相对含量明显降低;骨组织Runx2、Dlx5相对含量明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:健骨颗粒可以有效降低miR-141的表达,并通过影响骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化BMP信号通路Dlx5/Msx2/Runx2信号轴来提高Dlx5、Runx2等成骨关键因子的表达,提高成骨能力,达到预防和治疗骨质疏松的目的。

lncRNA HOTTIP通过miR-637/KLK4轴促进肺癌SPC-A-1细胞的恶性生物学行为

目的:探讨lncRNA HOTTIP对肺癌细胞增殖、凋亡及EMT的影响及其作用机制。方法:利用qPCR检测lncRNA HOTTIP、miR-637和KLK4在肺癌SPC-A-1、正常肺上皮BEAS-2B细胞中的表达量;siRNA干扰SPC-A-1细胞中lncRNA HOTTIP的表达后,分别通过CCK-8、Transwell、流式细胞术和WB法检测SPC-A-1细胞增殖、侵袭、凋亡和EMT能力的变化。miRanda软件和双荧光素酶报告基因实验分析lncRNA HOTTIP和miR-637之间的靶向关系,RNA pull-down实验检测lncRNA HOTTIP和miR-637的吸附作用,检测lncRNA HOTTIP通过miR-637对SPC-A-1细胞增殖、侵袭、凋亡和EMT的调控。利用TargetScan软件分析miR-637与KLK4的相关性,双荧光素酶报告基因实验检测miR-637与KLK4 mRNA之间的相互作用;检测miR-637通过KLK4 mRNA对SPC-A-1细胞增殖、侵袭、凋亡和EMT的调控。下调lncRNA HOTTIP和miR-637表达后,利用qPCR和WB检测KLK4 mRNA和蛋白表达水平的变化。结果:与BEAS-2B细胞比,在SPC-A-1细胞中lncRNA HOTTIP呈高表达(P<0.01),miR-637呈低表达(P<0.01),KLK4呈高表达(P<0.01)。下调lncRNA HOTTIP后,SPC-A-1细胞增殖、侵袭与EMT能力显著减弱,细胞凋亡率显著上升(P<0.01);lncRNA HOTTIP与miR-637具有靶向关系;下调miR-637表达后,SPC-A-1细胞增殖、侵袭与EMT能力显著上升,细胞凋亡率显著降低(P<0.01)。miR-637与KLK43’UTR特异性结合。miR-637通过KLK4显著促进了SPC-A-1细胞增殖、侵袭与EMT,细胞凋亡率显著上升(P<0.01)。下调lncRNA HOTTIP使KLK4表达显著降低,而下调miR-637可促进KLK4表达(P<0.05)。结论:上调lncRNA HOTTIP可通过miR-637/KLK4轴促进肺癌SPC-A-1细胞的增殖、侵袭与EMT而抑制癌细胞凋亡。

LncRNA HOTTIP调节miR-615/IGF2分子轴促进肺癌细胞增殖和侵袭的实验研究

目的探讨长链非编码RNA同源异型基因簇A远端转录本(lncRNA HOTTIP)对肺癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及可能机制。方法体外培养A549细胞,构建HOTTIP敲降载体、miR-615 inhibitor转染A549细胞,分为空白对照组、阴性对照组、HOTTIP shRNA组、HOTTIP shRNA+无序序列组、HOTTIP shRNA+miR-615 inhibit表达ors组。采用MTT、Transwell、免疫荧光法检测下调HOTTIP表达对A549细胞增殖、侵袭和迁移的影响。采用双荧光素酶报告实验检测lncRNA HOTTIP、miR-615及IGF2的靶向调控关系。采用实时荧光定量PCR(qPCR)和Western blotting检测HOTTIP、miR-615和IGF的表达量。结果A549细胞中HOTTIP相对表达量为1.74±0.08,高于BEAS-2B细胞的1.00±0.05(P<0.001)。HOTTIP shRNA组,HOTTIP相对表达量为0.43±0.04,低于空白对照组和阴性对照组(P<0.05)。下调HOTTIP表达后,A549细胞增殖、侵袭和迁移活性低于空白对照组(P<0.05),细胞凋亡率相应增加(P<0.05)。双荧光素酶报告实验证实HOTTIP靶向作用miR-615,而miR-615可负调控IGF2的表达。HOTTIP shRNA组细胞miR-615表达量高于空白对照组,IGF2 mRNA表达量低于阴性对照组,而HOTTIP shRNA+miR-615 inhibitors组IGF2 mRNA和蛋白表达量较HOTTIP shRNA组升高(P<0.05)。结论敲除A549细胞中lncRNA HOTTIP表达后可通过上调miR-615并下调IGF2进而抑制肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭活性。

血清长链非编码RNA及HOTTIP在乳腺癌中的表达及新辅助化疗疗效的相关性研究

目的探讨乳腺癌新辅助化疗患者血清长链非编码RNA(LncRNA HOTAIR)及同源异型基因簇A远端转录本(HOTTIP)的表达以及在化疗疗效预测中的价值。方法前瞻性选取在苏州大学附属张家港医院行新辅助化疗的46例乳腺癌患者作为研究组,另外收集40例同院健康体检的正常人群作为对照组。采用反转录-实时定量聚合酶链式反应检测2组研究对象血清中LncRNA HOTAIR及HOTTIP的表达,并分析研究组中LncRNA HOTAIR及HOTTIP的表达与年龄、肿瘤大小、淋巴结情况、TMN分期,激素受体表达、HER-2表达的关系,并在3~4个化疗周期后评估其化疗疗效,采用受试者工作特征(ROC)曲线对LncRNA HOTAIR及HOTTIP的疗效预测效能进行评价。结果研究组血清LncRNA HOTAIR、HOTTIP的表达水平(2.58±1.32、3.52±1.50)较对照组表达水平(1.59±0.89、1.91±1.33)均显著增高,差异均有统计学意义(P<0.05)。高表达的外周血清乳腺癌的HOTAIR与肿瘤大小相关(P<0.05),与年龄、淋巴结是否转移、TNM分期、激素受体表达、HER-2表达无明显相关性(P>0.05);血清高表达HOTTIP与肿瘤分期有关(P<0.05),与年龄、肿瘤大小、淋巴结是否转移、激素受体表达、HER-2表达无明显相关性(P>0.05)。乳腺癌患者新辅助化疗后,化疗有效组22例,无效组24例,有效率47.8%。化疗有效组患者血清HOTAIR表达水平(2.18±1.32)明显低于化疗无效组(2.94±1.23),差异有统计学意义(P<0.05),而化疗有效组(3.10±1.46)与化疗无效组(3.90±1.47)患者的血清HOTTIP表达差异无统计学意义(P>0.05)。血清LncRNA HOTAIR单独预测化疗疗效的AUC、敏感度和特异度分别为0.688、59.1%、79.2%,血清LncRNA HOTTIP单独预测化疗疗效的AUC、敏感度和特异度分别为0.641、72.7%、70.8%,2者联合后的AUC、敏感度和特异度分别为0.708、60.5%、87.5%。结论血清LncRNA HOTAIR和HOTTIP在乳腺癌患者中高表达,2者联合可以作为乳腺癌新辅助化疗疗效的潜在循环预测因子。

Dlx基因调控颌面部发育的研究进展

远端较小同源盒(Dlx)基因属于同源盒基因家族的一员,在脊椎动物生物学的各个方面发挥着重要的调节作用,包括控制肢体的形成、神经元亚群的分化及与神经嵴相关的各种功能。大量研究表明,Dlx基因可以通过调控成牙、成骨过程,影响上下颌骨、腭和牙等的发育,在颌面部发育中发挥至关重要的作用。本文就Dlx基因家族对颌面部发育的调控作用与机制的最新研究进展进行综述,以期为口腔医学领域组织工程再生的研究提供新思路。

血清LncRNA Dlx6os1、LncRNA TUG1水平与老年糖尿病肾病患者肾脏损伤及预后的相关性

目的探讨血清长链非编码RNA(LncRNA)无远端同源框6反义RNA 1(Dlx6os1)、LncRNA牛磺酸上调基因1(TUG1)水平与老年糖尿病肾病(DN)患者肾脏损伤及预后的相关性。方法选取2019年1月—2021年1月西安交通大学第一附属医院榆林医院肾病学科收治的老年DN患者201例作为DN组,同期单纯T2DM患者112例作为单纯T2DM组,同期体检健康的老年人105例作为健康对照组,随访3年根据预后将老年DN患者分为不良预后亚组(61例)和良好预后亚组(140例)。检测血清LncRNA Dlx6os1、LncRNA TUG1和肾脏损伤指标[计算肾小球滤过率(eGFR)、尿白蛋白肌酐比(UACR)]水平;采用Spearman相关系数分析血清LncRNA Dlx6os1、LncRNA TUG1水平与老年DN患者肾损伤的相关性;以老年DN患者预后为因变量,建立多因素非条件Logistic回归模型分析其影响因素,并绘制受试者工作特征(ROC)曲线评价血清LncRNA Dlx6os1、LncRNA TUG1水平对其的预测价值。结果健康对照组、单纯T2DM组、DN组血清LncRNA Dlx6os1和UACR水平依次升高,血清LncRNA TUG1和eGFR依次降低(F/P=870.484/<0.001、566.671/<0.001、271.117/<0.001、196.722/<0.001);Spearman相关性显示,老年DN患者血清LncRNA Dlx6os1水平与eGFR呈负相关、与UACR呈正相关(r/P=-0.816/<0.001、0.809/<0.001),血清LncRNA TUG1水平与eGFR呈正相关、与UACR呈负相关(r/P=0.832/<0.001、-0.806/<0.001);随访截至2024年1月,老年DN患者201例不良预后发生率为30.35%(61/201);多因素非条件Logistic回归显示,慢性肾脏病≥4期、UACR升高、LncRNA Dlx6os1升高为老年DN患者不良预后的独立危险因素[OR(95%CI)=5.758(1.480~22.401)、1.013(1.005~1.022)、1.426(1.201~1.693)],eGFR升高、LncRNA TUG1升高为保护因素[OR(95%CI)=0.958(0.939~0.978)、0.418(0.254~0.689)];ROC曲线显示,血清LncRNA Dlx6os1、LncRNA TUG1及二者联合预测老年DN患者不良预后的AUC分别为0.774、0.777、0.852,二者联合预测的AUC最大(Z/P=2.930/0.003、3.335/0.001)。结论老年DN患者血清LncRNA Dlx6os1水平升高、LncRNA TUG1水平降低,与肾脏损伤加重和不良预后风险增加有关,血清LncRNA Dlx6os1联合LncRNA TUG1水平预测老年DN患者不良预后的效能较高。