16SrRNA基因序列分析用于诊断病原性细菌感染初步研究

目的建立一种可适用于多种病原菌检测的方法,以提高病原学诊断率,有利于传染病的病原学监测。方法细菌16SrRNA基因通用引物对直接从血液、尿液、脑脊液标本中提取的细菌DNA进行PCR扩增,并对16SrRNA基因扩增产物进行克隆和序列分析。结果检测了28份临床标本,16SrRNA基因序列分析与尿液细菌培养结果不完全吻合;血液和脑脊液的16SrRNA的检出率均高于细菌培养。结论16SrRNA基因检测分析和细菌培养均具有良好的诊断效果,而针对16SrRNA基因的PCR直接扩增核酸并进行序列分析可对分离培养阴性的标本进行有效的补充诊断,可检测到多种病原菌如肠球菌,大肠杆菌,表皮葡萄球菌,牛链球菌,猪链球菌,布鲁氏菌,表皮葡萄球菌和脑膜炎球菌等,为疾病的诊断提供良好的线索。

细胞色素P450BM3进化酶3D结构模建与分析

通过动力学参数测定、同源序列比较以及三维结构的模建,对三个能够羟基化吲哚生成靛蓝的高活力P450BM3进化酶E435T,D168H,D168NA225VK440N所导致的酶分子结构变化和可能的活力提高机制进行了初步分析。同源序列比较表明P450BM3晶体蛋白的氨基酸序列与同源的能够羟基化吲哚生成靛蓝的动物P450等同率只有13%～16%,并且这些突变位点均在同源的P450中没有发现。三维结构模建表明进化酶E435T高活力可能是该突变破坏了E435侧链羧基和K434赖氨酸侧链胍基之间强的氢键相互作用,使K434胍基这个带正电荷基团侧链的柔韧性增加;而进化酶D168H高活力可能是通过影响P450BM3空间结构来影响酶催化活性的改变。