人同源异型框Csx及其变体的克隆、在大肠杆菌中的表达及其DNA结合性能研究

人心脏同源异型框基因Csx是同源异型框基因家族NK2的成员之一 ,也是心脏早期发育必须的转录因子之一 .虽然目前关于Csx基因在发育中的作用及其与先天性心脏病的关系得到了广泛的关注 ,并研究得较为深入 ,然而Csx本身的结构与功能的关系仍不十分清楚 .Csx包含了 3个保守的结构域 :TN结构域、同源异型框结构域和NK2 SD结构域 .通过选择合适的酶切位点 ,构建了Csx的 5个变体 ,分别缺失了不同的结构域 ,并将Csx及这 5个变体克隆到pET32系列载体中 .将这 6个构建好的质粒转化E .coliBL2 1 (DE3) ,在IPTG的诱导下 ,得到了Csx基因及 5个变体在大肠杆菌中的可溶性表达 .凝胶阻滞实验显示 :同源异型框是Csx与DNA相互作用的区域 ,缺失了同源异型框结构域 ,Csx就无法和靶序列结合 .