肺腺癌中锌指E-盒结合同源异型盒蛋白-1、-2和增殖细胞核抗原表达及意义

目的检测肺腺癌中锌指E-盒结合同源异形盒蛋白(ZEB)-1、ZEB-2和增殖细胞核抗原(PCNA)标记的增殖指数的关系。方法 59例肺腺癌患者临床资料及术后蜡块组织作为观察组,同期肺肿物切除后距肿物边缘>3 cm肿瘤周围正常肺组织59例作为对照组,应用免疫组化方法检测两组中ZEB-1、-2和PCNA的表达。结果两组中ZEB-1、-2和PCNA的阳性率差别显著,观察组中ZEB-1、-2和PCNA表达的阳性率与肿瘤的最大径、肿瘤的胸膜累犯密切相关,PCNA表达的阳性率与淋巴结转移及是否伴有坏死密切相关。观察组中ZEB-1和PCNA的表达呈正相关。结论肺腺癌术后组织中ZEB-1、-2和PCNA高表达,不仅对肿瘤的形成有重要意义,还可以促进肿瘤的进展,尤其是PCNA高表达可能对肿瘤进展有多种生物学意义。

同源异型盒蛋白转录因子-2在前列腺癌中表达及临床意义

目的对前列腺癌中同源异型盒蛋白转录因子-2(EN2)表达状况进行检测,探讨EN2与前列腺癌临床、病理分期及五年生化复发和生存的关系。方法选取81例前列腺癌和45例前列腺增生症(BPH),采用免疫组织化学SP法检测组织中EN2表达。对实验结果结合前列腺癌临床病理资料进行K-M生存分析其五年生化复发和总体生存之间的关系。结果EN2在前列腺癌中增高表达,在前列腺癌中的表达阳性率为72.83%、在BPH中表达阳性率为11.11%,差异有统计学意义(P<0.05)。增高表达的EN2与前列腺癌Gleason分级和临床分期相关,对EN2表达与前列腺癌五年生化复发和总体生存之间的关系进行K-M分析,结果显示EN2表达与前列腺癌五年生化复发和总体生存相关(P<0.05)。结论EN2在前列腺癌增高表达可能参与了前列腺癌发生进展,联合检测有望提高前列腺癌的预后评估。

同源异型盒蛋白2B在外周神经母细胞性肿瘤中表达及临床意义

目的探讨同源异型盒蛋白2B(PHOX2B)在外周神经母细胞性肿瘤(pNT)中的表达情况,以及临床意义。方法收集2013—2019年徐州医科大学附属徐州儿童医院收治的30例经病理诊断明确、治疗规律、随访资料完整的pNT患儿的病理组织。另选取同期收治的27例非pNT的小圆细胞性肿瘤患儿的病理组织作为对照。采用免疫组织化学染色法检测pNT组织中PHOX2B蛋白的表达情况。分析PHOX2B与临床病理特征及预后之间的关系。结果 PHOX2B在肿瘤组织中阳性表达率为93.3%(28/30),对照组全部阴性。PHOX2B蛋白主要定位于细胞核内,并且其表达与pNT发病年龄、分化程度及预后均具有相关性(P<0.05)。结论 PHOX2B对pNT的诊断具有高度敏感性及特异性,可以作为pNT可靠的诊断标记物;PHOX2B表达高低与发病年龄、肿瘤细胞分化程度及病理预后均相关,动态检测PHOX2B变化,有望成为判断pNT病情进展的重要指标。

同源异型盒基因的研究进展

同源异型盒基因广泛存在于真核生物中 ,其结构中含有一个高度保守的同源异型盒 ,编码一类转录调控因子 :同源异型盒蛋白 ,并通过同源异型盒蛋白在生物的个体发育和细胞分化中起调控作用 .

昆明小鼠乳腺不同发育时期Hex蛋白的免疫组织化学定位

为了研究昆明小鼠乳腺发育4个时期即青春期、妊娠期、泌乳期和退化期的同源异型盒基因(Hex)蛋白表达规律及组织定位,试验采用免疫组织化学法进行检测。结果表明:昆明小鼠乳腺组织结构呈周期性变化,青春期至妊娠期Hex蛋白逐渐增加,泌乳期达到高峰,退化期逐渐下降至类似青春期水平;Hex蛋白主要定位于细胞质中,泌乳期在细胞核中也有少部分出现;昆明小鼠乳腺发育的4个阶段均有Hex蛋白表达,且与乳腺周期性的变化一致。说明Hex蛋白参与乳腺的发育和泌乳调控过程。

多发性骨髓瘤患者HOXB7 mRNA及其蛋白水平的临床意义

目的探讨多发性骨髓瘤患者同源异型盒基因B7(HOXB7)mRNA及其蛋白水平的临床意义。方法选取2012年2月至2017年2月该院收治的120例多发性骨髓瘤患者(病例组)和同期在该院体检的35名志愿者(健康组)为研究对象,比较两组研究对象HOXB7 mRNA及其蛋白水平,观察HOXB7 mRNA及其蛋白在不同分期多发性骨髓瘤患者以及伴有髓外浸润多发性骨髓瘤患者中表达情况,并分析HOXB7与多发性骨髓瘤患者临床分期、髓外浸润情况的关系。结果病例组HOXB7 mRNA及其蛋白水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);Ⅲ期组HOXB7 mRNA及其蛋白水平高于Ⅰ期组、Ⅱ期组,Ⅱ期组相比Ⅰ期组也明显较高,差异有统计学意义(P<0.05);伴有髓外浸润多发性骨髓瘤患者HOXB7 mRNA、HOXB7蛋白明显高于无髓外浸润者(P<0.05);多发性骨髓瘤患者临床分期和伴有髓外浸润与HOXB7表达水平呈正相关(r=0.352、0.298,P<0.05),但其与患者性别、年龄等均无明显相关性(P>0.05)。结论多发性骨髓瘤患者HOXB7 mRNA及其蛋白水平明显上调,HOXB7基因在多发性骨髓瘤疾病发生、进展和浸润过程中发挥重要作用。

结球甘蓝叶片卷曲相关7个同源异型盒基因的克隆与表达分析

以结球甘蓝(Brassica oleracea L.)‘519’品系为试材,通过结球期茎尖和叶片以及莲座期茎尖和叶片的转录组对比分析,筛选出4个显著差异表达HB类基因,分别为BoHAT2、BoHB12、BoHB7和BoHB27。进一步对上述4个基因以及调控拟南芥(Arabidopsis thaliana)叶片卷曲但在结球甘蓝转录组中未检测到表达差异的基因BoPHB、BoPHV和BoREV进行了同源克隆。序列分析表明上述7个基因都含有同源异型域(homeodomain,HD),具有同源异型盒(homeobox,HB)蛋白家族的典型结构特征。BlastP(蛋白序列与蛋白库做比对)表明它们与拟南芥的同源蛋白相似性高,来自结球甘蓝的BoHAT2、BoHB12、BoHB7、BoHB27、BoPHB、BoPHV、BoREV与拟南芥中的HAT2、ATHB12、ATHB 7、ATHB27、PHB、PHV、REV蛋白同源,同源性分别为86%、80%、79%、60%、94%、95%和96%。BlastP比对和进化树分析结果表明,BoHAT2属于HD-ZipⅡ类,BoHB12和BoHB7属于HD-ZipⅠ类,BoHB27属于ZF-HD,BoPHB、BoPHV和BoREV属于HD-ZipⅢ类。BoHAT2、BoHB12、BoHB7、BoHB27、BoPHB、BoPHV、BoREV在结球甘蓝莲座期到结球期的茎尖和叶片中均有表达,BoHB12和BoHB7在结球期叶片中表达量显著增高,分别是莲座期叶片的38.1倍和6.2倍,其余基因表达量差异不明显,表明BoHB12和BoHB7可能是结球甘蓝球叶自然卷曲过程中的主效调控基因。

神经胶质瘤组织中miR-203a-3p、PHOX2B表达水平与临床特征及预后的关系

目的探究神经胶质瘤组织中微小RNA-203a-3p(miR-203a-3p)、配对同源异型盒蛋白2B(PHOX2B)表达水平与临床特征及预后的关系。方法选取2017年6月至2020年4月我院收治的96例神经胶质瘤患者,术中采集切除的胶质瘤组织及相应癌旁组织,采用qRT-PCR和免疫组化法检测胶质瘤组织和癌旁组miR-203a-3p、PHOX2B mRNA表达;采用Pearson法分析miR-203a-3p、PHOX2B mRNA的相关性;采用Kaplan-Meier生存曲线分析miR-203a-3p、PHOX2B mRNA与神经胶质瘤患者预后的关系;采用COX回归分析影响神经胶质瘤患者预后的危险因素。结果胶质瘤组织miR-203a-3p水平和阳性表达率显著低于癌旁组织(P<0.05),PHOX2B mRNA水平和阳性表达率显著高于癌旁组织(P<0.05)。Pearson相关性分析,神经胶质瘤患者miR-203a-3p、PHOX2B mRNA水平呈负相关(P<0.05)。miR-203a-3p、PHOX2B与KPS评分、肿瘤组织坏死和WHO分级有关(P<0.05)。Kaplan-Meier曲线分析得出,miR-203a-3p高表达组生存率显著高于低表达组(P<0.05),PHOX2B mRNA高表达组生存率显著低于低表达组(P<0.05)。COX回归分析表明,miR-203a-3p、PHOX2B mRNA、肿瘤组织坏死和WHO分级是影响神经胶质瘤患者预后的危险因素(P<0.05)。结论在神经胶质瘤中miR-203a-3p表达水平显著降低,PHOX2B mRNA表达水平显著升高,二者与临床特征及预后密切相关。

实验性先天性巨结肠症大鼠结肠神经节细胞中PHOX2B的免疫组织化学表达特征

目的探讨配对同源异型盒蛋白2B(paired-like homebox 2B,PHOX2B)在先天性巨结肠症(Hirschsprung’s disease,HD)的表达意义及其在HD发病机理中可能起到的作用。方法构建40只SD乳鼠HD动物模型,取其狭窄段和移行段与40只正常乙状结肠段进行比较。分别在HD狭窄段、移行段、对照组肠壁组织切片对PHOX2B、calretinin和S-100的进行免疫组织化学染色,判定在各组肠组织黏膜下神经丛中阳性细胞计数。结果HD的移行段和对照组正常段经PHOX2B、calretinin和S-100免疫组织化学染色,均证实神经节细胞存在;HD狭窄段未见神经节细胞;PHOX2B定位于细胞核,着色强阳性,较定位于细胞质的calretinin和定位于神经纤维及施旺细胞的S-100,更具有特异性,具有神经节细胞标记“有或无”的特点;在对照组正常段内和HD移行段内PHOX2B免疫阳性标记的节细胞数量均多于calretinin和S-100标记的节细胞数量。结论PHOX2B特异性定位于神经节细胞胞核、具有标记清晰、着色背景干净、无假阳性表达等特点,可成为一种优于calretinin和S-100的HD新诊断标志物。

巴西橡胶树HbHEX1基因的克隆及表达分析

根据一个巴西橡树胶乳cDNA文库中的EST片段的序列信息设计引物,通过RACE的方法获得了橡胶树编码homeobox蛋白的cDNA(命名为HbHEX1)。序列分析结果表明,HbHEX1长为1612bp,含有873bp的阅读框,292bp的5'-UTR和447bp的3'-UTR,编码290个氨基酸,分子量为33.02KD,等电点为6.35,含有保守的homomeodomain,属于HD-ZIP类。该氨基酸序列与蓖麻、马铃薯、胡萝卜的同源异型盒蛋白的同源性分别为92%、77%和72%。半定量RT-PCR分析结果表明HbHEX1基因在花和愈伤组织中基本上没有表达,在体细胞胚、芽、叶、胶乳和树皮中有表达,其中在胶乳中表达量最高。

BMP-2、bFGF基因转染的大鼠骨髓干细胞与牙胚细胞在体外混合培养对成牙基因的影响

目的:观察骨形态发生蛋白-2和(或)碱性成纤维细胞生长因子转染的大鼠骨髓干细胞(BMSCs)和牙胚细胞在体外混合培养对牙本质基质蛋白1、成釉蛋白、Ⅰ型胶原蛋白、同源异型盒基因1的影响。方法:采用实时定量PCR和Western blot的方法,检测BMP-2和(或)bFGF对成牙基因的影响。结果:对照组、bFGF组、BMP-2组、bFGF/BMP-2组四组间,AMBN、COLLAGEN-Ⅰ、DLX1、DMP1基因在mRNA和蛋白水平表达量上存在明显差异(P<0.05)。结论:BMP2和bFGF有一定的协同交互作用,BMP2/bFGF/BMSCs/牙胚细胞可以作为构建组织工程牙的种子细胞。

Cbl- b通过HOXA10调控miR-99a和miR-125b参与CD4^+T细胞活化的机制研究

目的:探讨卡西塔斯B细胞淋巴瘤谱系b(Cbl-b)调控CD4^+T细胞活化的机制。方法:用CCK8试剂盒检测过表达微小RNA(miR)-99a和miR-125b的小鼠淋巴瘤细胞(EL4)细胞增殖活性。取抗CD3和抗CD28抗体活化野生型(WT)和Cbl-b缺失型(Cbl^-b-/-)CD4^+T细胞,激光共聚焦观察WT和Cbl^-b-/-CD4^+T细胞中同源异型盒蛋白A10(HOXA10)的入核情况。用双荧光素酶报告系统检测HOXA10对miR-99a和miR-125b的表达调控作用。用蛋白质印迹法和双荧光素酶报告系统检测miR-99a和miR-125b对靶基因的表达水平影响。结果:在Cbl^-b-/-CD4^+T细胞中,HOXA10在抗CD3抗体单独刺激时即可入核。HOXA10入核后促进miR-99a和miR-125b表达,而过表达miR-99a和miR-125b则抑制蛋白激酶B2和3(AKT2、AKT3)、磷酸肌醇-3-激酶催化亚基A和D(PIK3CA、PIK3CD)的表达。结论:Cbl-b通过阻止HOXA10核转位来抑制miR-99a和miR-125b表达,导致AKT2、AKT3、PIK3CA、PIK3CD(AKT/PI3K)表达增加,最终抑制CD4^+T细胞活化。

PHOX2B蛋白、MYCN基因与外周神经母细胞性肿瘤临床病理特征及预后的关系

目的探讨同源异型盒2B(PHOX2B)蛋白和N-MYC致癌基因(MYCN基因)状态与外周神经母细胞性肿瘤(pNT)临床病理特征和预后的关系。方法采用免疫组织化学染色化法检测41例pNT患儿组织中PHOX2B蛋白的表达,荧光原位杂交技术检测MYCN基因表达状态,并使用连续校正χ2检验和Kaplan-Meier法分析两者与临床病理特征及预后的关系。结果免疫组织化学染色显示PHOX2B蛋白主要定位于细胞核内,在pNT组织中阳性表达率为82.9%,其表达水平与pNT发病年龄、分化程度及预后有关(P<0.05),PHOX2B蛋白表达强度与MYCN基因状态无关(P>0.05)。MYCN基因扩增患儿生存期短于未扩增患儿(P<0.05)。结论PHOX2B蛋白对pNT具有诊断意义,可以作为pNT可靠的诊断标志物;MYCN基因状态与患儿生存期有关,可以帮助判断pNT患儿预后情况。

EN2在前列腺癌细胞株和正常前列腺上皮细胞中的表达及其意义

目的探讨同源异型盒基因EN-2在不同前列腺癌细胞及人正常前列腺上皮细胞中的表达差异及意义。方法采用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）和免疫荧光法检测前列腺癌PC3、DUl45和LNCAP细胞以及人正常前列腺上皮细胞RWPE-1中EN2mRNA和蛋白的表达，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测上述细胞培养液中EN2蛋白的含量变化。结果RT—PCR和ELISA检测结果显示：EN2mRNA和蛋白水平在激素依赖性前列腺癌细胞LNCAP（1．65±0．19、8．74±0．34）和激素非依赖性前列腺癌细胞PC3中（1．08±0．12、3．07±0．24）及DU145（1．15±0．53、2．86±0．26）均高于人正常前列腺上皮细胞（0．42±0．11、0．86±0．99）（P〈0．05），其中LNCAP细胞中EN2mRNA和蛋白表达水平高于其余两种前列腺癌细胞（P〈0．05）。结论EN2在前列腺上皮细胞中呈低表达，在各前列腺癌细胞株中表达增高，并为前列腺癌细胞所分泌。EN2的表达可能与前列腺癌发生发展有关。

PHOX2B在低通气疾病中的作用

配对同源异型盒蛋白2B(PHOX2B)是自主神经系统神经谱系分化的关键基因,PHOX2B基因突变介导调节自主呼吸和化学敏感性的脑干核功能失常,进而导致对缺氧和高碳酸血症的反应缺陷。另一方面,PHOX2B基因突变通过通过颅骨、下颌骨改变、Ⅲ类牙齿咬合不正及舌下核发育不全在阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征中也发挥作用。因此,PHOX2B有望为低通气疾病诊治提供新的思路。

Homeobox转录因子在植物根生长发育中的研究进展

同源异型盒(HB)蛋白是与发育相关的一类重要转录因子,其最显著的特征是具有一个由60个或61个氨基酸组成的高度保守结构域-同源异型域(HD)。本研究以拟南芥、水稻、甘薯、木薯等作物为代表,回溯近年来国内外homeobox基因调控植物根生长和发育相关研究进展,旨在为植物根发育分子机理的深入研究以及利用基因工程手段进行分子育种提供参考。