微小RNA-144对人结肠癌细胞株增殖、侵袭迁移影响及其与同源盒基因A10结合力

目的 观察微小RNA-144(miR-144)对人结肠癌细胞株增殖、迁移、侵袭的影响及其与同源盒基因A10(homeobox gene A10,HOXA10)的结合力。方法 (1)人结肠癌细胞株HCT116、SW480、CL-11和永生化正常人结肠上皮细胞株FHC中miR-144及HOXA10 mRNA检测:采用实时荧光定量PCR法检测HCT116、SW480、CL-11及FHC中miR-144与HOXA10 mRNA,观察人结肠癌细胞和人结肠上皮细胞miR-144、HOXA10 mRNA表达变化,选择miR-144相对表达量最低HCT116细胞为后续研究对象。(2)miR-144对人结肠癌细胞株增殖、侵袭及迁移的影响观察:取对数生长期HCT116细胞分为3组,1组细胞顺序转染miR-144模拟物(miR-144 mimics)和HOXA10过表达质粒pcDNA3.1-HOXA10,2组细胞转染miR-144 mimics,3组细胞转染空白质粒。转染24 h时测算各组细胞增殖活性、观察各组细胞的侵袭及迁移情况、检测各组细胞miR-144及HOXA10蛋白。(3)HCT116细胞中miR-144与HOXA10的结合力观察:取对数生长期HCT116细胞分为4组:A组先后转染野生型HOXA10荧光素酶报告基因质粒(HOXA10-WT)、miR-144mimics,B组先后转染HOXA10-WT、空白对照NC-mimics,C组先后转染突变型HOXA10-MUT、miR-144 mimics,D组先后转染HOXA10-MUT、NC-mimics,转染24 h时采用双荧光素酶检测试剂测算各组细胞的相对荧光素酶活性(代表HOXA10、miR-144的靶向结合力)。结果 与FHC细胞比较,HCT116、SW480、CL-11细胞miR-144相对表达量低,HOXA10 mRNA相对表达量高(P均<0.05)。与3组比较,2组细胞miR-144相对表达量高(P<0.05),培养24、48、72 h时细胞OD值均降低,迁移及侵袭穿膜细胞数少,HOXA10蛋白相对表达量低(P均<0.05);与2组比较,1组细胞HOXA10蛋白相对表达量高,培养24、48、72 h时细胞的OD值均高,迁移及侵袭穿膜细胞数多。与B组比较,A组HCT116细胞的相对荧光素酶活性低(P<0.05)。结论 miR-144可抑制结肠癌细胞的增殖、侵袭及迁移,同时抑制细胞HOXA10蛋白表达。HCT116细胞中miR-144与HOXA10靶向结合力较高,miR-144可能通过抑制HOXA10蛋白表达,进一步抑制结肠癌细胞的增殖、迁移及侵袭。

同源异形盒基因A1在结肠癌组织中的表达及临床意义

目的探讨同源异形盒基因A1(HOXA1)在结肠癌中的表达及临床意义。方法随机选取2021年3~10月宁夏医科大学总医院结直肠外科收治的结肠癌患者作为研究对象,运用RT-qPCR检测66例冰冻新鲜结肠癌组织及配对正常组织中HOXA1基因mRNA的表达;运用免疫组织化学检测203例结肠癌石蜡组织芯片中HOXA1蛋白的表达水平,并分析其与临床病理参数间的关系。结果RT-qPCR结果显示,结肠癌中HOXA1 mRNA的相对表达量为5.634±0.563,明显高于正常结肠组织的1.893±0.442,差异具有显著统计学意义(P<0.01);免疫组织化学结果显示,HOXA1蛋白主要表达于细胞核中,其在结肠癌中的表达阳性率为62.56%,明显高于正常组织的21.67%,差异具有显著统计学意义(P<0.01);结肠癌中HOXA1表达水平与AJCC分期、T分期、淋巴结转移、远处转移及组织学分型均有关(P<0.05)。结论HOXA1在结肠癌中异常高表达,与肿瘤分期淋巴结转移等高危因素相关,是结肠癌潜在治疗靶点。

微小RNA-433-3p靶向同源异形盒基因A1抑制胃癌MGC-803细胞增殖、侵袭的研究

目的探讨微小RNA-433-3p(miR-433-3p)靶向同源异形盒基因A1(HOXA1)对胃癌MGC-803细胞增殖、侵袭的影响。方法体外培养人胃癌MGC-803细胞,分为对照组(正常培养,不进行任何处理)、si-NC组(转染miR-433-3p siRNA阴性对照)、si-miR-433-3p组(转染miR-433-3p siRNA)、mimic-NC组(转染miR-433-3p mimic阴性对照)和miR-433-3p mimic组(转染miR-433-3p mimic)。荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测MGC-803细胞中miR-433-3p及HOXA1 mRNA表达;细胞计数法、Transwell法分别检测MGC-803细胞增殖、侵袭;双荧光素酶报告基因试验检测miR-433-3p与HOXA1的靶向关系。结果与对照组和si-NC组相比,si-miR-433-3p组MGC-803细胞中miR-433-3p表达降低(P<0.05),HOXA1 mRNA表达、细胞增殖率、侵袭细胞数升高(P<0.05)。与对照组和mimic-NC组相比,miR-433-3p mimic组MGC-803细胞中miR-433-3p表达升高(P<0.05),HOXA1 mRNA表达、细胞增殖率、侵袭细胞数降低(P<0.05)。TargetScan网站预测及双荧光素酶报告基因试验结果显示,miR-433-3p与HOXA1在MGC-803细胞中存在靶向关系。结论miR-433-3p能靶向调控HOXA1抑制胃癌MGC-803细胞的增殖、侵袭过程。

同源异形盒A10基因启动子区甲基化及蛋白表达与子宫内膜异位症的关系

目的DNA甲基化在子宫内膜异位症发病机制研究中倍受到学者们关注。文中检测子宫内膜异位症(endome-triosis,EM)患者在位和异位内膜组织中同源异形盒A10(homeobox-A10,HOXA10)基因启动子区CpG岛甲基化程度及HOXA10蛋白表达水平,探讨EM与HOXA10基因异常甲基化和蛋白表达的关系及其临床意义。方法采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)和免疫组织化学法(SP法)检测36例EM患者中异位内膜组织(异位内膜组)、在位内膜组织(在位内膜组)及12例正常对照者子宫内膜组织(对照组)中HOXA10基因启动子区CpG岛甲基化状况和HOXA10蛋白表达情况。结果①36例EM患者的异位、在位内膜组织中HOXA10基因启动子区CpG岛甲基化率分别为38.9%、25.0%;其甲基化均发生在临床Ⅲ、Ⅳ期;12例正常子宫内膜组织中HOXA10基因均未发生甲基化;三组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。②EM患者在位、异位内膜HOXA10的表达下降,无明显的分泌中、晚期峰;异位内膜基质HOXA10的表达显著降低,低于对照组正常内膜表达,其差异有统计学意义(P<0.05)。③异位内膜组织HOXA10的蛋白表达与HOXA10基因启动子甲基化呈负相关,相关系数rs=-0.368。结论EM患者异位内膜组织中存在HOXA10基因启动子区异常甲基化导致基因失活,在EM发生发展过程中起重要作用。

同源异形盒A10及上皮性钙黏蛋白在人子宫内膜癌组织中的表达

目的探讨同源异型盒基因A10（HOXA10）及上皮性钙黏蛋白（E—cad）在人子宫内膜癌组织中的表达及其相关性，探讨二者在子宫内膜癌发生发展及浸润转移中的作用。方法选取锦州市中心医院2012年1月-2013年1月手术切除的40例子宫内膜癌存档蜡块作为实验对象，选择同期因良性病变切除子宫的正常子宫内膜标本30例作为对照。免疫组化实验检测子宫内膜癌和正常子宫内膜标本中HOXA10和E—cad蛋白的表达。结果子宫内膜癌中HOXAl0蛋白的阳性表达率低。E-cad蛋白的正常表达率低，与正常子宫内膜比较，差异有统计学意义（P〈0．05）：并与子宫内膜癌的组织学分级、临床分期、肌层浸润深度、有无淋巴结转移有关（P〈0．05）；二者在子宫内膜癌中的表达呈中度正相关r=0．448，P〈0．05）。结论子宫内膜癌组织HOXA10表达下降或缺失可能通过某种机制下调了E—cad的表达，通过上皮间质转化途径促进Trio瘤的转移和侵袭。联合检测HOXA10和E—cad在子宫内膜癌的表达。可能有助于了解子宫内膜癌的恶性程度。

同源异型盒基因HOXD10在乳腺癌组织中的表达及其临床病理意义

背景与目的:乳腺癌是威胁女性健康最常见的恶性肿瘤之一,从分子水平深入研究其癌变机制,对寻找新的标志基因具有重要意义。本研究探讨同源异型盒基因HOXD10基因在乳腺癌发生、发展进程中的可能作用。方法:以18s rRNA基因作为参照,采用荧光实时定量RT-PCR技术,以相对定量方法检测44例乳腺癌组织及16例乳腺良性病变组织中HOXD10 mRNA表达情况。结果:HOXD10在乳腺癌中的表达显著低于乳腺良性病变组织。组织学分级为Ⅲ级的乳腺癌标本中HOXD10 mRNA的表达显著低于组织学Ⅰ、Ⅱ级标本。HOXD10 mRNA的表达与淋巴结转移、肿瘤大小、TNM分期之间相关性不显著。结论:HOXD10基因在乳腺癌中呈低表达甚至表达缺失,由于这种基因可能为乳腺癌发生发展的抑制因素,因此对其我们应给予更多关注。

微小RNA-9调节同源异形盒1基因对胃癌细胞生物学功能的影响

目的探讨微小RNA-9(miR-9)调节同源异形盒1(HMBOX1)基因对胃癌细胞生物学功能影响的作用。方法将对数生长期的胃癌细胞株BGC-823细胞分为空白组、对照组与miR-9组,对照组与miR-9组分别转染50 nmol/L的miR-9 NC、miR-9 mimics,空白组不进行转染(加入等体积的磷酸盐缓冲液)。采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测miR-9 mRNA的表达,噻唑蓝法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,蛋白质印迹法检测HMBOX1蛋白表达情况,上述实验均重复3次,计算其平均值。结果细胞转染后24 h与48 h,miR-9组的miR-9 mRNA相对表达量高于空白组和对照组[(46. 45±11. 82)比(1. 00±0. 12)、(1. 03±0. 13),(55. 45±10. 21)比(1. 02±0. 22)、(1. 11±0. 32)],细胞凋亡指数高于空白组和对照组[(42. 6±1. 5)%比(11. 6±2. 1)%、(13. 2±1. 2)%,(48. 3±1. 5)%比(17. 4±2. 4)%、(15. 3±1. 8)%](均P <0. 05)。细胞转染后24 h与48 h,miR-9组的细胞增殖指数低于空白组和对照组[(0. 42±0. 13)比(1. 11±0. 78)、(1. 07±0. 51),(0. 53±0. 13)比(1. 17±0. 22)、(1. 12±0. 12)],HMBOX1蛋白相对表达水平低于空白组和对照组,差异均有统计学意义(均P <0. 05)。结论过表达miR-9能靶向抑制HMBOX1的表达,从而抑制胃癌细胞增殖,促进细胞凋亡,发挥抑癌作用。

同源盒基因HoxA10的重组逆转录病毒载体及稳定包装细胞株的建立和鉴定

本研究构建携带同源盒基因hoxA10的重组逆转录病毒载体,并建立稳定产毒的包装细胞株。通过PCR扩增获得hoxA10基因编码区全长序列,克隆至逆转录病毒载体MSCVneo,并测序鉴定插入的hoxA10基因。将重组载体及空载体经脂质体分别转染包装细胞系PT67,以G418筛选稳定产毒细胞株。收集病毒悬液并测定病毒滴度。结果表明:重组逆转录病毒载体MSCVneo插入的hoxA10基因序列正确。将筛选所得的高效产毒细胞株命名为PT67/MSCVneo、PT67/MSCVneo-hoxA10。测定病毒滴度分别为5×105CFU/ml、4×104 CFU/ml。结论:成功构建了同源盒基因hoxA10的重组逆转录病毒载体,建立了稳定、高效、准确产生逆转录病毒的细胞株,为探讨hoxA10基因在造血干细胞的增殖和分化功能提供了实验基础。

电针对控制性超排卵小鼠子宫内膜同源盒基因A10表达时相的影响

目的观察电针对控制性超排卵(COH)小鼠子宫内膜同源盒基因A10(HOXA10)表达时相的影响,探讨电针提高体外受精-胚胎移植(IVF-ET)临床妊娠率的作用机制。方法共有150只雌性和80只雄性小鼠,取50只雌性鼠为自然周期组,剩余100只雌鼠制备COH模型并随机分为COH组(50只)和电针组(50只)。各组内再根据妊娠天数分为D2、D3、D4、D5和D6共5个小组,每小组10只。取D6小组小鼠子宫,观察妊娠率及平均着床位点数;取D2、D3、D4和D5小组子宫内膜,采用Western blot和RT-PCR技术检测HOXA10、整合素αvβ3和白血病抑制因子(LIF)蛋白及mRNA的表达。结果COH组妊娠率较自然周期组低,子宫内膜HOXA10、整合素αvβ3和LIF表达峰值前移,D3小组高于D2、D4、D5小组(P<0.05,P<0.01)。经电针治疗后,HOXA10、整合素αvβ3和LIF表达峰值恢复至受孕第4天,较COH组推迟,临床妊娠率有增高趋势。结论电针调控COH小鼠子宫内膜HOXA10的表达时相,恢复正常种植窗期,是电针提高IVF-ET临床妊娠率的作用机制之一。

同源异形盒基因在牙齿发育中的调控作用

同源异形盒基因(Homeobox gene)是一类进化高度保守的DNA序列,编码一类特殊的转录因子,通常可以在控制发育的基因中找到。Homeobox基因编码的蛋白在胚胎发育中参与形成确定位置信息的自身调控和转调控网络系统。本文着重对Homeobox基因在牙齿发育的启动,定位,形态发生和模式的调控作用作一综述。

同源盒基因A10编码蛋白的靶调节基因的筛选与鉴定

目的:筛选和鉴定同源盒基因A10编码蛋白(HOXA10)的靶调节基因。方法:以人子宫内膜细胞系AN3CA为实验对象,采用染色质免疫沉淀方法筛选HOXA10靶基因;采用平端克隆方法构建HOXA10靶基因库;采用DNA序列分析结合生物信息学方法鉴定HOXA10靶基因。结果:共获得含有HOXA10结合片段的克隆197个,选取插入片段大于100bp的质粒67个进行DNA序列分析,其中含有HOXA10结合序列TTAT的基因16个。结论:初步筛选出16个HOXA10候选靶基因,为进一步研究HOXA10的基因调节机理提供了新的思路。

同源异形盒基因与肿瘤

同源异形盒基因是一类特殊的转录调节因子 ,其表达蛋白通过序列特异性DNA结合活性 ,调控胚胎的发育和分化。近年来研究发现 ,同源异形盒基因异常表达与肿瘤的发生和发展密切相关。现综述有关同源异形盒基因在肿瘤发生。

骨碎补及其主要成分对小鼠子宫内膜同源盒基因10 mRNA、白血病抑制因子和整合素ανβ3的影响

目的:探索骨碎补及其主要成分对胚泡着床障碍模型小鼠子宫内膜的影响。方法:实验动物分为7组:空白组、模型组、西药组I(补佳乐组)、西药组II(阿司匹林组)、骨碎补组、骨碎补总黄酮组、骨碎补柚皮苷组,以GnRHa+HMG+HCG方法造模,干预后检测各组相关指标的表达量。结果:骨碎补组及总黄酮组小鼠子宫内膜同源盒基因10(HOXA-10)mRNA表达明显增加(P<0.05);骨碎补组、总黄酮组及柚皮苷组白血病抑制因子(LIF)表达明显增加(P<0.05);骨碎补组整合素ανβ3表达明显增加(P<0.05),总黄酮组差异无统计学意义(P>0.05),但积分光密度值明显增加(P<0.05)。结论:骨碎补可能通过调节胚泡着床期子宫内膜HOXA 10、LIF、整合素ανβ3的表达,有利于胚泡对子宫内膜的黏附,从而改善子宫内膜容受性。总黄酮作为骨碎补药材的主要活性成分,亦可改善子宫内膜容受性。

子宫内膜同源盒基因A10表达及调控研究

子宫内膜同源盒基因A10(HOXA10)是内膜细胞发育和分化的调控基因,在子宫内膜的表达呈月经周期依赖性,并持续表达于妊娠子宫的蜕膜组织。HOXA10基因的表达与子宫内膜的容受性,胚胎的黏附与着床,母胎界面的免疫耐受、胚胎的生长发育等紧密相关。对HOXA10基因的深入研究将为其在人工流产、不孕不育、辅助生殖技术等方面的临床应用提供可能性。

同源异形盒基因及其在昆虫幼虫腹足发育生物学研究中的应用

同源异形盒基因(homeobox genes)是一类具有180 bp保守序列的基因,在生物发育的调控中起着重要作用。昆虫幼虫的腹足在位置和数目上均表现出丰富的多样性,使其成为进化发育生物学研究的主要对象之一。通过对昆虫幼虫腹足发育过程中相关同源异形盒基因的研究,既可了解腹足的发育机制,又可加深对同源异形盒基因进化和功能的理解。本文简要介绍同源异形盒基因的概况,重点总结了同源异形盒基因在昆虫幼虫腹足发育方面的研究进展,包括通过相关同源异形盒基因时空表达模式来揭示腹足的附肢起源、腹足发育的调控通路中相关同源异形盒基因的功能和进化等,尤其是腹部Hox家族基因对Distal-less基因的抑制作用及其在不同昆虫类群中的进化,以及该领域目前存在的主要争议,期望为相关研究提供参考。

同源盒基因10调控胰岛素样生长因子结合蛋白3与肠癌细胞5-氟尿嘧啶抵抗的关系研究

目的:研究同源盒基因10(HOXD10)调控胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP3)与肠癌细胞5-氟尿嘧啶(5-Fu)抵抗的关系。方法:原代肠癌细胞SW480敲减HOXD10,5-Fu耐药株细胞过表达HOXD10及敲减IGFBP3。CCK-8检测细胞增殖活性,细胞克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,实时荧光定量PCR(qPCR)及免疫蛋白印迹(WB)检测HOXD10及IGFBP3表达水平。结果:耐药株在各5-Fu浓度下(5、10、20μg/ml)的增殖活性,与0μg/ml的5-Fu增殖活性比较无统计学差异(均P>0.05);而原代SW480细胞在5μg/ml的增殖活性出现下降(P<0.01)。耐药细胞组HOXD10的相对表达倍数(0.51±0.096)与原代细胞组(1.00±0.091)比较下调,而耐药细胞组的IGFBP3相对表达倍数(4.21±0.32)显著高于原代细胞组(1.00±0.22),WB也证实了耐药细胞组较原代肠癌细胞组有较低的HOXD10和更高的IGFBP3表达水平。在原代细胞组中敲减HOXD10、IGFBP3的表达水平增高;而在耐药细胞组中过表达HOXD10、IGFBP3的表达水平显著减低。在耐药株中敲减IGFBP3或过表达HOXD10后,耐药株对5-Fu敏感性增强,细胞克隆形成能力减弱。结论:HOXD10-IGFBP3调控轴与维持肠癌耐药表型密切相关,靶向抑制IGFBP3或过表达HOXD10可能在肠癌5-Fu化疗耐受提供精准干预靶点。

同源盒基因A10表达下调后抑制胃癌细胞裸鼠皮下成瘤能力及相关机制研究

目的探讨同源盒基因A10(homeobox gene A10,HOXA10)表达水平改变后对胃癌细胞裸鼠皮下成瘤能力的影响及其可能涉及的机制。方法利用生物信息学方法分析The Cancer Genome Atlas website(TCGA)数据库中HOXA10在胃癌中的表达水平,构建HOXA10表达降低稳转胃癌细胞株BGC-823-sh-HOXA10并进行裸鼠皮下成瘤实验,采用western blot检测HOXA10敲减后凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-xL(Bcl-xL)表达水平的改变情况。结果分析TCGA数据库后发现胃癌中HOXA10表达水平升高。HOXA10表达下调后,胃癌细胞株BGC-823裸鼠皮下成瘤能力减弱,凋亡相关蛋白Bcl-xL表达下调。结论 HOXA10在胃癌中表达异常升高,HOXA10表达水平降低后可抑制胃癌细胞BGC-823裸鼠皮下成瘤能力,影响抗凋亡蛋白Bcl-xL表达水平可能是其发挥作用的机制。

卵巢早衰的日本女性中人类NOBOX基因同源异形盒区的突变分析

To determine whether mutations of the homeobox region of the human NOBOX gene are present in Japanese women with premature ovarian failure (POF), genomic DNA of blood samples from 30 women with POF and 20 normal controls were extracted for polymerase chain reaction (PCR) and analyzed by direct sequencing. No mutations in exons 2-6 of the NOBOX gene, including the homeobox region, could be identified in Japanese women with POF. Our data suggest that mutations of the homeobox region of the NOBOX gene are uncommon in Japanese patients with POF.