下调尾型同源盒基因-2对结肠癌细胞的侵袭及迁移能力的影响及其机制

目的观察下调尾型同源盒基因-2(CDX2)对结肠癌细胞侵袭迁移能力的影响,并初步探讨CDX2基因在结肠癌发生发展过程中的作用及机制。方法构建CDX2RNAi慢病毒载体,并转染人结肠癌SW480、HT29细胞,应用Western blotting及qRT-PCR技术检测CDX2基因的干扰效率;应用Transwell及划痕实验检测下调CDX2表达对SW480、HT29细胞侵袭、迁移能力的影响;Western blotting及RT-PCR检测下调CDX2表达对SW480、HT29细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关基因(E-cadherin、ZEB-1、Vimentin、Twist、Snail)表达的影响。结果构建的CDX2RNAi慢病毒载体可有效地抑制SW480、HT29细胞中CDX2基因的表达;转染LV-CDX2-shRNA组与转染空病毒组(LV-NT-shRNA)及空白对照组相比,侵袭、迁移能力显著增强(P<0.05);且E-cadherin表达下降,ZEB-1、Vimentin、Twist、Snail表达均升高。结论下调CDX2可诱导EMT发生,从而增强结肠癌细胞的侵袭迁移能力。

尾型同源盒基因-2过表达对结肠癌细胞生物学性状的影响

目的观察尾型同源盒基因-2(CDX2)对结肠癌细胞生物学性状的影响,探讨CDX2基因在结肠癌发生发展中的作用。方法克隆人结肠CDX2基因,构建含CDX2的pEGFP-C1-CDX2表达载体,同时设pEGFP-C1空载体组及空白对照组。利用脂质体法将pEGFP-C1-CDX2和pEGFP-C1质粒分别转染Lovo细胞,应用Western blotting技术检测Lovo细胞中CDX2基因的表达;应用MTT法及流式细胞仪检测CDX2对Lovo细胞增殖、凋亡及周期的影响;应用ELISA法检测CDX2过表达对Lovo细胞基质金属蛋白酶-2(MMP-2)表达的影响。结果成功构建含CDX2真核表达载体。瞬时转染pEGFP-C1-CDX2的Lovo细胞48 h有较高水平的CDX2蛋白的表达;与pEGFP-C1空载体组及空白对照组比较,转染pEGFP-C1-CDX2组的Lovo细胞在转染72 h时生长未见明显抑制,G1期及S期所占比例无明显改变,凋亡率亦无明显增加(P均>0.05),但MMP-2分泌明显减少(P<0.05)。结论 CDX2过表达对Lovo细胞增殖、凋亡及周期无明显影响,但能够明显减弱Lovo细胞的侵袭力,从而对结肠癌浸润转移起抑制作用。

同源异形盒A10基因启动子区甲基化及蛋白表达与子宫内膜异位症的关系

目的DNA甲基化在子宫内膜异位症发病机制研究中倍受到学者们关注。文中检测子宫内膜异位症(endome-triosis,EM)患者在位和异位内膜组织中同源异形盒A10(homeobox-A10,HOXA10)基因启动子区CpG岛甲基化程度及HOXA10蛋白表达水平,探讨EM与HOXA10基因异常甲基化和蛋白表达的关系及其临床意义。方法采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)和免疫组织化学法(SP法)检测36例EM患者中异位内膜组织(异位内膜组)、在位内膜组织(在位内膜组)及12例正常对照者子宫内膜组织(对照组)中HOXA10基因启动子区CpG岛甲基化状况和HOXA10蛋白表达情况。结果①36例EM患者的异位、在位内膜组织中HOXA10基因启动子区CpG岛甲基化率分别为38.9%、25.0%;其甲基化均发生在临床Ⅲ、Ⅳ期;12例正常子宫内膜组织中HOXA10基因均未发生甲基化;三组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。②EM患者在位、异位内膜HOXA10的表达下降,无明显的分泌中、晚期峰;异位内膜基质HOXA10的表达显著降低,低于对照组正常内膜表达,其差异有统计学意义(P<0.05)。③异位内膜组织HOXA10的蛋白表达与HOXA10基因启动子甲基化呈负相关,相关系数rs=-0.368。结论EM患者异位内膜组织中存在HOXA10基因启动子区异常甲基化导致基因失活,在EM发生发展过程中起重要作用。

微小RNA-9调节同源异形盒1基因对胃癌细胞生物学功能的影响

目的探讨微小RNA-9(miR-9)调节同源异形盒1(HMBOX1)基因对胃癌细胞生物学功能影响的作用。方法将对数生长期的胃癌细胞株BGC-823细胞分为空白组、对照组与miR-9组,对照组与miR-9组分别转染50 nmol/L的miR-9 NC、miR-9 mimics,空白组不进行转染(加入等体积的磷酸盐缓冲液)。采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测miR-9 mRNA的表达,噻唑蓝法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,蛋白质印迹法检测HMBOX1蛋白表达情况,上述实验均重复3次,计算其平均值。结果细胞转染后24 h与48 h,miR-9组的miR-9 mRNA相对表达量高于空白组和对照组[(46. 45±11. 82)比(1. 00±0. 12)、(1. 03±0. 13),(55. 45±10. 21)比(1. 02±0. 22)、(1. 11±0. 32)],细胞凋亡指数高于空白组和对照组[(42. 6±1. 5)%比(11. 6±2. 1)%、(13. 2±1. 2)%,(48. 3±1. 5)%比(17. 4±2. 4)%、(15. 3±1. 8)%](均P <0. 05)。细胞转染后24 h与48 h,miR-9组的细胞增殖指数低于空白组和对照组[(0. 42±0. 13)比(1. 11±0. 78)、(1. 07±0. 51),(0. 53±0. 13)比(1. 17±0. 22)、(1. 12±0. 12)],HMBOX1蛋白相对表达水平低于空白组和对照组,差异均有统计学意义(均P <0. 05)。结论过表达miR-9能靶向抑制HMBOX1的表达,从而抑制胃癌细胞增殖,促进细胞凋亡,发挥抑癌作用。

垂体同源盒2和组蛋白去乙酰化酶9基因多态性与缺血性脑卒中MRI表现的关系

目的探讨垂体同源盒2(PITX2)基因位点rs6843082、rs2200733和组蛋白去乙酰化酶9(HADC9)基因位点rs2107595多态性与缺血性脑卒中MRI影像学表现的关系。方法收集631例缺血性脑卒中患者的头颅MRI影像资料,包括病灶部位、数目、大小及对周围组织的影响。采用Sequenom基因分型技术检测所有患者外周血基因位点rs6843082、rs2200733和rs2107595的基因分型,并运用PLINK软件分析基因多态性位点(加性模型、显性模型、隐性模型、等位基因模型)与MRI表现的关联性。结果 rs6843082的加性模型、显性模型、等位基因模型与缺血性脑卒中发生在枕叶均有关联(P<0.05);rs2200733的隐性模型与缺血性脑卒中发生在枕叶、显性模型与缺血性脑卒中发生在颞叶均有关联(P<0.05);rs2107595的显性模型与缺血性脑卒中发生在丘脑及顶叶、隐性模型与缺血性脑卒中发生枕叶在均有关联(P<0.05)。3个基因位点多态性与病灶数目、病灶大小以及病灶对周围组织的影响均无关联(P>0.05)。结论 PITX2和HADC9基因多态性可能与缺血性脑卒中的MRI病灶部位相关。

胰十二指肠同源异型盒基因-1多态性与2型糖尿病的相关性

目的探讨胰十二指肠同源异型盒基因(PDX)-1多态性位点(rs4415872,rs1124607和rs4581569)与上海汉族人群2型糖尿病的关系。方法选取1 285例正常健康个体为对照组,经确诊的1 245例2型糖尿病患者为病例组。收集静脉血液标本1 ml,提取全基因组DNA。应用Taqman基因分型技术进行多态性检测。结果与对照组相比,PDX-1基因rs1124607位点的基因型和等位基因频率分布在病例组中具有统计学意义[基因型:P=7.82×10^(-5);等位基因:P=0.000 9,OR=0.780(0.688~0.886)]经Bonferroni矫正后仍具有统计学差异(基因型:P=2.35×10^(-4);等位基因:P=0.000 3)。结论 PDX1基因rs1124607位点可能与上海汉族人群2型糖尿病具有相关性。

锌指E-盒结合同源异形盒蛋白-1、-2和上皮型黏附素在结肠腺癌中的表达

目的观察锌指E-盒结合同源异形盒蛋白(ZEB)-1、-2和上皮型黏附素(E-cadherin)在结肠腺癌术后组织中的表达。方法观察组为63例结肠腺癌术后患者,收集临床资料及术后蜡块组织。选择距肿物边缘>3 cm的非肿瘤性结肠黏膜组织36例作为对照组,应用免疫组化SP法检测二组中ZEB-1、-2和E-cadherin表达。结果观察组中ZEB-1和-2的阳性率明显高于对照组,观察组中E-cadherin的阳性率明显低于对照组。观察组中ZEB-1、-2和E-cadherin的表达与脉管浸润、淋巴结转移密切相关,ZEB-1、-2的表达与肿瘤最大径、浸润深度密切相关。E-cadherin的表达与肿瘤的最大径、浸润深度无明显相关性。相关性分析显示观察组中ZEB-1和E-cadherin、ZEB-2和E-cadherin的表达呈负相关。结论 ZEB-1、-2高表达、E-cadherin低表达在结肠腺癌发生和进展中有重要作用。ZEB-1、-2可能通过对E-cadherin的调节发挥生物学作用。

肌节同源盒基因同系物2对小鼠晶状体发育的影响

目的观察肌节同源盒基因同系物2(Msx2)表达缺失后晶状体早期发育过程的变化,探讨Msx2对晶状体早期发育的影响。方法利用Msx2基因敲除小鼠胚胎,采取组织学染色及免疫组织化学方法观察晶状体发育过程中的异常变化及细胞增殖情况。结果Msx2基因敲除后,晶状体的发育受到明显的抑制,晶状体早期发育迟缓,晶状体与角膜组织分离延迟。同时Msx2表达缺失使晶状体细胞溴脱氧尿核苷(BrdU)标记比例下降。结论Msx2基因敲除小鼠晶状体发育出现异常,晶状体发育异常的原因之一是晶状体发育过程中晶状体上皮细胞细胞增殖受到抑制。

水稻GL2型同源异形盒基因对表皮分化的作用

GL2型同源异形盒基因群属于影响植物表皮分化的一种同源异形盒基因群。为了分析这些基因在水稻表皮分化过程中所起的功能作用，我们分离出水稻的5个GL2型同源异形盒基因(Rocl-Roc5)，首先通过原位杂交方法分析了空间表达模式。结果查明。

同源异型盒基因MSX-2在SD大鼠颅缝闭合过程中的表达

目的研究同源异型盒基因Msx-2在SD大鼠颅缝闭合过程中的表达变化及意义。方法选择出生后1、2、5、8、12、15、18、22、30和45 d的SD大鼠,采用免疫组化和Real-timePCR法分别检测颅缝不同位点的MSX-2表达。结果MSX-2表达于SD大鼠发育的颅骨成骨缘、颅缝间质及其下的硬脑膜组织。在后额缝和矢状缝均未闭合期(出生后1～8 d),后额缝和矢状缝复合组织中均出现MSX-2少量表达;在活跃的后额缝闭合期(出生后12～22 d),后额缝复合组织出现较多MSX-2表达,而矢状缝复合组织无明显的表达增加;在后额缝完全闭合期(出生后30～45 d),MSX-2表达在后额缝减弱明显,并持续较低水平,此时矢状缝的表达略高于后额缝。结论同源异型盒基因MSX-2转录主要发生于颅缝闭合活跃阶段,在后额缝和矢状缝复合组织的表达有不同的时间趋势,提示可能参与颅骨发育和颅缝闭合的调控。

家兔矮小同源盒基因(Shox2)的克隆和表达分析

为了研究新西兰白兔矮小同源盒基因(Shox2)序列,预测其结构和功能,以及研究Shox2基因的时空表达特征,本研究克隆了新西兰白兔Shox2基因全长CDS区,分析其编码蛋白的同源性、亲疏水性、二级和三级结构特点、系统进化树等生物信息学特征,并用Western blot法验证融合蛋白TrxA-Shox2。分别在胚胎中期(E20.5d)、胚胎后期(E28.5d)、幼龄期(出生后10d)、成年期(A)4个时间点采集3只动物的肾、大血管、真皮、心、大脑、肝、肺、脾、肌肉、胆囊共10种组织,采用实时荧光定量PCR技术研究Shox2基因的时空表达图谱。结果,成功克隆了新西兰白兔Shox2基因(登录号:KP726285)。Shox2基因CDS区全长666bp,翻译221个氨基酸。生物信息学分析显示,Shox2为碱性、不稳定蛋白,Shox2蛋白氨基酸二级结构中α-螺旋区域占61.99%,无规则卷曲区域占33.48%,延伸链占4.52%。Western blot验证了融合蛋白TrxA-Shox2的表达。家兔Shox2蛋白氨基酸序列与眼镜猴、猩猩、褐家鼠、人的氨基酸序列同源性较高,说明Shox2蛋白在进化中较保守。Shox2基因mRNA在很多器官都有表达,在E20.5d的家兔胚胎中,Shox2mRNA在肾、肌肉和胆囊的表达量高,在E28.5d时表达量较高的是脾、心,幼龄期时表达量较高的是真皮、肝,成年期时表达量较高的是真皮、脾。本研究成功克隆了新西兰白兔Shox2基因,预测了其结构和功能。Shox2基因mRNA在很多器官都有表达,不同的组织和不同时间特征的表达量变化可能与Shox2功能高度相关,并受到严格的调控。

同源异形盒基因在牙齿发育中的调控作用

同源异形盒基因(Homeobox gene)是一类进化高度保守的DNA序列,编码一类特殊的转录因子,通常可以在控制发育的基因中找到。Homeobox基因编码的蛋白在胚胎发育中参与形成确定位置信息的自身调控和转调控网络系统。本文着重对Homeobox基因在牙齿发育的启动,定位,形态发生和模式的调控作用作一综述。

同源异形盒基因A1在结肠癌组织中的表达及临床意义

目的探讨同源异形盒基因A1(HOXA1)在结肠癌中的表达及临床意义。方法随机选取2021年3~10月宁夏医科大学总医院结直肠外科收治的结肠癌患者作为研究对象,运用RT-qPCR检测66例冰冻新鲜结肠癌组织及配对正常组织中HOXA1基因mRNA的表达;运用免疫组织化学检测203例结肠癌石蜡组织芯片中HOXA1蛋白的表达水平,并分析其与临床病理参数间的关系。结果RT-qPCR结果显示,结肠癌中HOXA1 mRNA的相对表达量为5.634±0.563,明显高于正常结肠组织的1.893±0.442,差异具有显著统计学意义(P<0.01);免疫组织化学结果显示,HOXA1蛋白主要表达于细胞核中,其在结肠癌中的表达阳性率为62.56%,明显高于正常组织的21.67%,差异具有显著统计学意义(P<0.01);结肠癌中HOXA1表达水平与AJCC分期、T分期、淋巴结转移、远处转移及组织学分型均有关(P<0.05)。结论HOXA1在结肠癌中异常高表达,与肿瘤分期淋巴结转移等高危因素相关,是结肠癌潜在治疗靶点。

同源盒基因2在黑色素瘤细胞对于曲美替尼耐药中的作用

目的:研究同源盒基因2(MSX2)在黑色素瘤细胞A375对于曲美替尼耐药中的作用机制。方法:构建曲美替尼耐药的A375细胞株(A375-AR),曲美替尼干预A375和A375-AR后采用CCK-8检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞中Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-9的表达以及MSX2的表达。采用小干扰RNA(siRNA)沉默A375-AR中MSX2基因,设计A375、A375-AR、A375-AR-MSX2,曲美替尼干预后,CCK-8检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测细胞中Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-9的表达以及MSX2的表达。构建MSX2过表达的A375细胞系(A375-OE),设置A375、A375-OE和A375-AR组,曲美替尼干预后,CCK-8检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测细胞中Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-9的表达以及MSX2的表达。结果:A375-AR对 1.8 nmol/L的曲美替尼耐药,采用 1.8 nmol/L曲美替尼干预后,A375细胞活力和细胞凋亡率显著高于A375-AR,A375细胞中Bcl-2基因表达水平低于A375-AR,而Bax、Caspase-3、Caspase-9的表达水平高于A375-AR。A375-AR沉默MSX2后,细胞对于曲美替尼敏感性显著增高,且细胞活力下调,凋亡率上调,细胞中Bcl-2表达下调,Bax、Caspase-3、Caspase-9的表达上调。A375过表达MSX2后,细胞对于曲美替尼敏感性显著下调,细胞活力上调,凋亡率下调,细胞中Bcl-2表达上调,Bax、Caspase-3、Caspase-9的表达下调。结论:MSX2基因可以诱导黑色素瘤细胞对于曲美替尼的耐药,是治疗黑色素瘤耐药的潜在靶点。

微小RNA-433-3p靶向同源异形盒基因A1抑制胃癌MGC-803细胞增殖、侵袭的研究

目的探讨微小RNA-433-3p(miR-433-3p)靶向同源异形盒基因A1(HOXA1)对胃癌MGC-803细胞增殖、侵袭的影响。方法体外培养人胃癌MGC-803细胞,分为对照组(正常培养,不进行任何处理)、si-NC组(转染miR-433-3p siRNA阴性对照)、si-miR-433-3p组(转染miR-433-3p siRNA)、mimic-NC组(转染miR-433-3p mimic阴性对照)和miR-433-3p mimic组(转染miR-433-3p mimic)。荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测MGC-803细胞中miR-433-3p及HOXA1 mRNA表达;细胞计数法、Transwell法分别检测MGC-803细胞增殖、侵袭;双荧光素酶报告基因试验检测miR-433-3p与HOXA1的靶向关系。结果与对照组和si-NC组相比,si-miR-433-3p组MGC-803细胞中miR-433-3p表达降低(P<0.05),HOXA1 mRNA表达、细胞增殖率、侵袭细胞数升高(P<0.05)。与对照组和mimic-NC组相比,miR-433-3p mimic组MGC-803细胞中miR-433-3p表达升高(P<0.05),HOXA1 mRNA表达、细胞增殖率、侵袭细胞数降低(P<0.05)。TargetScan网站预测及双荧光素酶报告基因试验结果显示,miR-433-3p与HOXA1在MGC-803细胞中存在靶向关系。结论miR-433-3p能靶向调控HOXA1抑制胃癌MGC-803细胞的增殖、侵袭过程。

同源异形盒基因与肿瘤

同源异形盒基因是一类特殊的转录调节因子 ,其表达蛋白通过序列特异性DNA结合活性 ,调控胚胎的发育和分化。近年来研究发现 ,同源异形盒基因异常表达与肿瘤的发生和发展密切相关。现综述有关同源异形盒基因在肿瘤发生。

携带人尾型同源盒基因-2基因慢病毒表达载体的构建及鉴定

目的构建尾型同源盒基因-2(CDX2)基因的慢病毒表达载体并进行鉴定。方法 PCR扩增CDX2基因片段后,将其克隆入慢病毒表达载体pWPI,通过PCR、酶切和测序鉴定重组质粒。重组质粒转染包装细胞293T后获得包装的病毒颗粒。病毒颗粒感染直肠癌细胞XB1847,经PCR和Western Blot证明重组慢病毒携带的CDX2在XB1847细胞内表达的情况。结果经PCR扩增、酶切及测序验证,重组质粒构建成功,命名为pWPI-CDX2。PCR和Western Blot证明重组慢病毒感染XB1847细胞后CDX2能稳定表达。结论成功构建了携带CDX2的慢病毒载体,为研究CDX2在直肠癌中的功能提供了实验基础。

同源盒基因Msx2在小鼠磨牙牙根发育早期的表达

目的:观察在小鼠的牙根发育早期同源盒基因Msx2的表达,以探讨其在此过程中所起的作用。方法:出生后第6天和第8天的小鼠,取含有下颌第一磨牙的下颌骨,进行固定和脱钙,制备5μm的石蜡切片,原位杂交方法检测Msx2在小鼠牙根发育早期的表达。结果:第6天Msx2阳性信号出现在Hertwig’s上皮根鞘细胞、上皮根鞘周围的牙乳头细胞和早期的成牙本质细胞中;第8天在Hertwig’s上皮根鞘细胞、上皮根鞘周围的牙乳头细胞和成牙本质细胞中Msx2有阳性信号,而在成牙骨质细胞中无表达。结论:Msx2参与调控牙根早期发育的生理过程。