异种同源基因、分子进化与肿瘤治疗

癌症目前是人类主要死因之一,肿瘤生物治疗(主要是免疫治疗和基因治疗)有望成为继手术、化疗和放疗后肿瘤治疗的第4种模式,具有广阔的应用前景.然而至今仍有很多方面制约着肿瘤免疫基因治疗的发展,有必要探索肿瘤免疫基因治疗的新途径.自然界生物在由低级向高级物种进化的过程中,不同种属的生物之间有相当一部分基因是比较保守的,它们在不同种属的生物之间都呈现出在结构和/或功能上某种程度的相似性,这些基因就是异种同源基因.异种同源基因之间的碱基差别是由突变引起的,这种突变大多是中性突变.异种同源基因在进化过程中所形成的这种细微差别可用来打破免疫耐受、增强免疫原性、诱导肿瘤细胞的自体免疫反应进而达到抗肿瘤的目的.用异种同源基因诱导自体免疫反应进行肿瘤免疫治疗必将为肿瘤治疗开辟一条全新的途径,并为其他疾病的治疗提供新思维.同时对利用包括“人类基因组计划”在内的多种生物基因组计划成果的应用和产业化,对理解在生物进化过程中的基因同源性规律等都具有重要意义.综述了异种同源基因、分子进化与肿瘤免疫基因治疗等问题并开展讨论.

非洲爪蟾肝脏肿瘤cDNA表达文库异种同源抗原的筛选

目的:通过重组cDNA文库的血清学筛选(SEREX)技术获得来自非洲爪蟾(Xenopus laevis)肝脏肿瘤文库中具有潜在治疗价值的异种同源抗原的cDNA序列。方法:用人肝癌细胞株SMMC-7721免疫家兔后收集的抗血清作为筛选血清,采用SEREX技术筛选Xenopuslaevis肝脏肿瘤cDNA表达文库。结果:通过两轮筛选获得19个阳性克隆,通过DNA序列测定和分子生物学技术确定这19个克隆编码16个蛋白。其中Transgelin 2、RASguanylreleasing protein1和Chromobox protein homolog6可能与肝细胞肝癌有关。结论:用异种免疫血清筛选异种同源肿瘤抗原拓宽了SEREX技术的应用范围,鉴定Transgelin2、RASguanyl releasing protein1和Chromobox protein homolog6可能为异种同源抗原。

大鼠睾丸异种抗原的血清学筛选

目的 通过重组 c DNA表达文库的血清学分析 (SEREX)技术获得来自大鼠睾丸文库有潜在治疗价值的异种同源抗原的 c DNA序列。方法 将人卵巢癌细胞株免疫兔后收集的抗血清作为筛选血清 ,采用 SEREX技术筛选大鼠睾丸 c DNA文库。结果 通过两轮筛选获得 10个阳性克隆。通过生物信息学分析认为这 10个阳性单克隆 c DNA序列编码 7种不同的蛋白 ,其中 OV- 2、OV- 4为肿瘤相关序列 ,OV- 6、OV- 7为编码未知蛋白的序列。结论 用异种免疫血清筛选异种同源肿瘤抗原拓宽了 SEREX技术的应用范围 ,是一种行之有效的方法。

异种EGFR口服DNA疫苗抑制小鼠Lewis肺癌的生长

目的:观察表达异种鸡EGFR(chicren EGFR,cEGFR)与IgGγFc融合基因的口服减毒鼠伤寒沙门菌疫苗对高表达EGFR的肺癌Lewis细胞小鼠移植瘤生长的抑制作用。方法:将pVAX1-cEGFR-γFc质粒转化减毒沙门菌SL7207,重组菌SL7207/pVAX1-cEGFR-γFc体外感染小鼠腹腔巨噬细胞,免疫荧光法检测cEGFR-γFc融合蛋白的表达。SL7207/pVAX1-cEG-FR-γFc重组菌口服免疫小鼠3次后接种Lewis细胞,Western blotting检测小鼠体内融合蛋白的表达,ELISA法检测免疫小鼠血清抗EGFR抗体的水平。接种Lewis细胞14 d后处死小鼠,瘤体称质量,检测SL7207/pVAX1-cEGFR-γFc疫苗对Lewis肺癌生长的抑制作用,测定荷瘤小鼠的生存时间。结果:成功构建减毒沙门菌疫苗SL7207/pVAX1-cEGFR-γFc,SL7207/pVAX1-cEG-FR-γFc感染后,在小鼠后体内外都能检测到cEGFR-γFc融合蛋白的表达;SL7207/pVAX1-cEGFR-γFc疫苗口服免疫后小鼠能够产生高水平的抗EGFR抗体,口服SL7207/pVAX1-cEGFR-γFc疫苗能够有效抑制小鼠Lewis移植瘤的生长,延长荷瘤小鼠的生存时间。结论:异种EGFR口服DNA疫苗能够有效地抑制高表达EGFR肺癌的生长,是EGFR分子靶向治疗的一条新途径。

战争文学的一对“并蒂莲”——《四世同堂》与《第二十二条军规》综观

本文以平行比较的方法， 对《第二十二条军规》和《四世同堂》的异同作了多方位分析和探讨。文章指出两部小说的共同特色主要体现在别具匠心的人像展览结构、鞭辟入里的社会文化批判和灵活多样的艺术手法等方面。两部小说的相异不仅基于截然不同的东西方文化背景，而且由于一个极其有趣的同源异种现象， 即二者均以《战争与和平》为出发点， 从不同视角对其内容作了横向扩展，

基因工程鼠Muc1-MBP融合蛋白的制备及其免疫活性测定

目的：制备鼠Muc1-MBP融合蛋白,探讨其免疫活性。方法：将pMAL-Muc1转化大肠杆菌,通过IPTG诱导、SDS-PAGE和Western blot鉴定Muc1的表达,Amylose resin亲和层析纯化Muc1-MBP。将Muc1-MBP融合蛋白免疫小鼠,采用ELISA方法检测小鼠血清Muc1特异性抗体的水平;MTT法测定小鼠抗Muc1特异的CTL活性;ELISPOT法测定脾脏淋巴细胞IFN-γ的分泌。结果：获得稳定表达Muc1的菌株,制备了分子量67 kD较纯的Muc1-MBP融合蛋白。Muc1-MBP融合蛋白免疫小鼠产生高效价Muc1特异抗体,效价在8 000~16 000之间,Muc1-MBP融合蛋白可诱导CTL杀伤活性,对人乳腺癌MCF-7和小鼠Lewis肺癌LLC1靶细胞的杀伤率分别为（74.5±5.9）%和（60.5±10.4）%,与对照组比P〈0.05,差异显著;Muc1-MBP融合蛋白免疫可诱导脾脏淋巴细胞分泌IFN-γ,特异性活化Th1细胞。结论：成功制备重组鼠Muc1-MBP融合蛋白,其不仅能诱导特异体液免疫应答,而且可诱导细胞免疫应答,尤其能诱导对人类MCF-7细胞较小鼠Lewis肺癌LLC1细胞更加强烈的CTL杀伤活性,提示异种同源蛋白疫苗具有比同源蛋白疫苗更好的抗肿瘤作用。

重组鼠Muc1-MBP融合蛋白疫苗体内抗肿瘤作用

目的:研究重组鼠Muc1-MBP蛋白的体内抗肿瘤作用.方法:采用皮下注射法将不同剂量Muc1-MBP蛋白免疫小鼠,2wk/次,共免疫3次.在第3次免疫后4d,给予C57BL/6小鼠尾静脉注射LLC1细胞,或给予5GyX射线照射的ICR小鼠背部皮下注射MCF-7细胞.注射3wk后剥离并测量肿瘤大小;肿瘤组织行常规HE染色.免疫组织化学染色分析肿瘤周围浸润的淋巴细胞亚群.结果:LLC1细胞尾静脉接种后21d,肺肿瘤结节对照组,Muc1-MBP0.15g/L组小鼠分别为54和39个(100%),Muc1-MBP0.3g/L组小鼠共计17个(60%),提示Muc1-MBP0.3g/L组可显著抑制肺癌的生长(P<0.05),Muc1-MBP0.15g/L组作用较弱.皮下接种MCF-7细胞后21d,对照组,Muc1-MBP0.15g/L组小鼠100%(6/6)可见乳腺癌瘤体形成,平均体积分别为(142.8±70.2)和(96.1±53.4)mm3,Muc1-MBP0.3g/L组瘤体形成66.7%(4/6),平均体积为(54.5±46.7)mm3.表明Muc1-MBP0.3g/L组免疫后可显著抑制人乳腺癌移植瘤生长(P<0.05),Muc1-MBP0.15g/L组作用较弱.免疫组化结果显示Muc1-MBP免疫组肿瘤周围有大量CD4+和CD8+T的细胞浸润到肿瘤周围.结论:Muc1-MBP诱导免疫能够明显抑制LLC1,MCF-7细胞的生长,为临床应用研究奠定了基础.

大鼠前列腺特异膜抗原基因重组腺病毒诱导小鼠特异性抗体的研究

目的构建含大鼠前列腺特异膜抗原基因(PSMA)的重组腺病毒Ad-rPSMA,并研究其在小鼠体内的特异性体液免疫反应。方法提取大鼠脑组织总RNA,经RT-PCR扩增PSMA基因片段,利用Adeasy腺病毒载体系统构建pAd-rPSMA重组腺病毒质粒,包装复制缺陷型重组腺病毒Ad-rPSMA,制备病毒颗粒。用制备的病毒感染HeLa细胞,Western blot检测PSMA基因的表达。以Ad-rPSMA重组腺病毒免疫C57小鼠,检测血清中PSMA特异性抗体。结果成功构建了含有大鼠PSMA基因的重组腺病毒,制备的病毒颗粒数为1.97×1012VP/mL,A260/A280值为1.32,病毒滴度为5×1010IU/mL;Western blot检测可见大鼠PSMA基因在HeLa细胞中的表达;ELISA法检测出免疫小鼠血清中存在PSMA特异性抗体。结论成功构建了大鼠前列腺特异膜抗原基因重组腺病毒Ad-rPSMA,并诱导小鼠产生了针对PSMA的特异性抗体。