非受体型蛋白酪氨酸磷酸酶2与核因子-κB在糖尿病牙周炎牙周组织破坏中的作用研究

目的观察糖尿病牙周炎条件下小鼠牙周组织中非受体型蛋白酪氨酸磷酸酶2(PTPN2)、核因子-κB(NF-κB)的表达与牙周组织破坏的关系。方法将4周龄健康雄性C57BL/6J小鼠随机分为正常对照组(N组)、单纯牙周炎组(P组)及糖尿病牙周炎组(DP组),每组6只。采用口内接种牙龈卟啉单胞菌法在P组建立牙周炎模型,采用腹腔注射链脲佐菌素结合高脂高糖食物与口内接种牙龈卟啉单胞菌法在DP组建立糖尿病牙周炎模型。各组动物于P、DP组末次细菌接种4周后处死,通过体视显微镜观察牙槽骨形态和附着丧失面积,采用苏木精-伊红(HE)染色法观察牙周附着丧失的高度,免疫组织化学法检测牙周组织中PTPN2与NF-κB的表达强度。结果 P、DP组牙槽骨的附着丧失面积和牙周附着丧失高度均高于N组(P<0.05),PTPN2的表达量低于N组(P<0.05),而NF-κB的表达量则高于N组(P<0.01)。结论在糖尿病牙周炎的发生发展过程中,NF-κB可能有促进作用,而PTPN2可能有抑制作用;PTPN2的表达减少可能导致NF-κB表达增强而加重牙周组织破坏。

胰岛素和表皮生长因子刺激引起的蛋白激酶B磷酸化与PTEN突变的关系

目的研究第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)突变对人鼻咽癌细胞系CNE-1中蛋白激酶B(Akt)的磷酸化的影响。方法 CNE-1细胞用含100 m L/L胎牛血清RPMI1640培养基培养,并分别转染野生型PTEN(wt PTEN)质粒、突变型PTEN C124S质粒和突变型PTEN G129E质粒。各组细胞加刺激前用无血清RPMI1640培养基饥饿过夜,用0.15 IU/m L胰岛素或0.3μg/m L重组人表皮生长因子(rh EGF)刺激,Western blot法检测Akt的磷酸化水平。结果胰岛素和rh EGF刺激均可导致CNE-1细胞Akt信号激活;wt PTEN可抑制胰岛素或rh EGF刺激引起的Akt信号激活;PTEN C124S突变体可激活胰岛素刺激引起的Akt信号,但不可激活rh EGF刺激引起的Akt信号;PTEN G129E突变体抑制胰岛素刺激引起的Akt信号激活。结论 wt PTEN可抑制胰岛素或rh EGF刺激引起的Akt信号激活,但PTEN C124S和G129E突变体不能一致性激活Akt信号表达。这表明PTEN基因突变可能与Akt信号表达无关。

PP2C蛋白磷酸酶调控的细胞信号通路研究进展

2C类蛋白磷酸酶是蛋白磷酸酶家族的重要成员,可以对丝/苏氨酸残基特异性脱磷酸。近来研究表明,2C类蛋白磷酸酶控制着大量关键的细胞功能,如增殖、细胞周期阻滞、衰老和细胞程序性死亡、凋亡和自噬等,因而在介导机体免疫反应、衰老、神经发育及肿瘤发生发展中发挥重要的生物学作用。总结PP2C基因各亚型参与介导的重要细胞信号通路,如丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、磷脂酰肌醇3-激酶/丝苏氨酸蛋白激酶(PI3K/AKT)、转化生长因子-β(TGF-β)/Smads、核转录因子-κB(NF-κB)及DNA损伤应答通路,以期为阐明上述生理病理过程的分子基础和调控机制提供新的思路。

间歇低氧对大鼠肝脏细胞中同源性磷酸酶张力蛋白及磷酸化蛋白激酶B表达的影响

目的通过检测间歇低氧大鼠肝脏细胞中同源性磷酸酶张力蛋白(PTEN)及其下游信号分子磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)的表达水平,探讨肝脏细胞PTEN、p-AKT在间歇低氧相关胰岛素抵抗中的作用。方法选取健康雄性SD大鼠24只,随机分成3组,即慢性间歇空气对照组(CIA组)、慢性间歇低氧4周组(CIH4组)和慢性间歇低氧8周组(CIH8组)。检测3组大鼠空腹血糖、空腹胰岛素、肝细胞中PTEN及p-AKT的表达,用胰岛素敏感指数(ISI)以及稳态模型胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)系统评价胰岛素抵抗。以平均灰度值表示PTEN及p-AKT的蛋白表达量,灰度值越高表示蛋白质表达越少。结果与CIA组比较,CIH4组、CIH8组ISI下降有统计学意义(P<0.05),且CIH8组下降比CIH4组明显(P<0.05);CIH4组、CIH8组HOMA-IR升高有统计学意义(P<0.05),且CIH8组升高较CIH4组明显(P<0.05)。与CIA组比较,CIH4组、CIH8组PTEN蛋白表达量升高有统计学意义(P<0.05);与CIH4组比较,CIH8组PTEN蛋白表达量升高亦有统计学意义(P<0.05)。与CIA组比较,CIH4组、CIH8组p-AKT蛋白表达量下降有统计学意义(P<0.05);与CIH4组比较,CIH8组p-AKT蛋白表达量下降亦有统计学意义(P<0.05)。间歇低氧大鼠肝细胞中PTEN的表达随着ISI的下降和HOMA-IR的升高有显著升高趋势,且随间歇低氧时间的延长而显著性增加;间歇低氧大鼠肝细胞中p-AKT随着ISI的下降和HOMA-IR的升高表达下降,且随着间歇低氧时间的延长而更加明显。结论慢性间歇低氧暴露使大鼠空腹血糖及胰岛素水平升高,发生胰岛素抵抗,并且随着间歇低氧暴露时间的延长,胰岛素抵抗程度加重。间歇低氧大鼠肝细胞PTEN蛋白表达增加,p-AKT蛋白表达减少,且与ISI、HOMA-IR具有明显的相关性,表明该蛋白可能在间歇低氧大鼠胰岛素抵抗的发生机制中发挥重要的作用。

蛋白磷酸酶2A抑制剂通过核因子-κB通路激活胰腺癌细胞外源性凋亡通路的机制

目的探讨蛋白磷酸酶2A（PP2A）抑制剂通过激活核因子-κB（NF-κB）通路诱导胰腺癌细胞株人胰腺癌细胞（PANC，1）凋亡的机制。方法荧光素酶报告基因检测NF．KB通路的激活水平，试剂盒检测半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶（Caspase）-8、9活性，逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测NF-κB通路下游凋亡相关基因表达水平。结果PP2A抑制剂斑蝥素、冈田酸可激活NF-κB通路，分别使NF-κB转录活性上升（10．11±4．09）倍、（16．21±5．75）倍。NF-κB通路抑制剂Bay11-7082预处理，可分别使斑蝥素、冈田酸诱导的NF-κB转录活性上升幅度下降（61．19±6．08）％、（62．09±12．38）％；斑蝥素、冈田酸可激活外源性凋亡通路，分别使Caspase-8活性上升（0．55±0．12）倍、（0．85±0．21）倍。Bay11-7082预处理，可分别使斑蝥素、冈田酸诱导的Caspase-8活性上升幅度下降（20．99±7．13）％、（29．07±7．98）％；斑蝥素、冈田酸可激活内源性凋亡通路，分别使Caspase-9活性上升（1．35±0．20）倍、（1．18±0．19）倍，但Bay11-7082预处理，对斑蝥素、冈田酸诱导的Caspase-9活性上升幅度无明显影响；斑蝥素、冈田酸可上调促凋亡基因的表达；Bay11-7082预处理可抑制斑蝥素、冈田酸诱导的促凋亡基因表达上调。结论PP2A抑制剂通过NF-κB通路依赖性机制激活胰腺癌细胞外源性凋亡通路，并上调促凋亡基因的表达。

同源性磷酸酶-张力蛋白、缺氧诱导因子-1α在肾细胞癌组织中表达及与临床病理特征关系研究

目的探讨同源性磷酸酶-张力蛋白(PTEN)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在肾细胞癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系。方法选取2015年3月至2016年12月西安医学院附属宝鸡医院收治的94例肾细胞癌患者为研究对象。分别采集94例患者的肾细胞癌组织标本(肾细胞癌组)及癌旁组织标本(癌旁组)。利用免疫组化法检测各组组织中PTEN及HIF-1α的水平,并分析其与肾细胞癌临床病理特征之间的关系。结果肾细胞癌组PTEN高表达阳性率低于癌旁组,HIF-1α高表达阳性率高于癌旁组,组间比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。PTEN与HIF-1α的高表达率在不同肾细胞癌的病理类型中比较,差异无统计学意义(P>0.05);在不同Robson分期、Fuhrman分级、有无淋巴结转移、有无远处转移的肾细胞癌组织中比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。经Spearman秩相关分析,肾细胞癌组织中PTEN和HIF-1α的表达水平呈显著负相关(r=-0.716,P<0.05)。结论 PTEN、HIF-1α在肾细胞癌组织中异常表达,二者联合检测有助于早期诊断肾细胞癌及评估患者的病情进展。

蛋白酪氨酸磷酸酶2/核因子-κB途径介导脂氧素A4拮抗系膜细胞白介素6的合成

目的探讨脂氧素A4(LXA4)拮抗白介素(IL)1β促进肾小球系膜细胞IL-6合成的作用,及其信号转导机制。方法LXA4预处理培养的大鼠肾小球系膜细胞,加入IL-1β共同孵育,或单用IL-1β刺激肾小球系膜细胞。应用酶联免疫吸附(ELISA)法检测上清液中IL-6蛋白表达量。用RT-PCR法检测IL-6中mRNA表达量。用免疫印迹法检测含Src同源区2(SH2)蛋白酪氨酸磷酸酶2(SHP-2)的磷酸化水平。用凝胶电泳迁移率试验(EMSA)检测核因子-κB(NF—κB)DNA结合活性。结果LXA4呈剂量依赖性抑制IL-1β诱导的系膜细胞IL-6蛋白分泌及mRNA表达,拮抗IL-1β诱导的SHP-2磷酸化与NF—κB的活化。应用NF—κB抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)可抑制IL-1β诱导的系膜细胞IL-6蛋白分泌与NF—κB活化。结论LXA4能够拮抗IL-1β促进肾小球系膜细胞IL-6合成,其机制涉及SHP-2/NF—κB信号转导途径。

镉对蛋白磷酸酶2A-B55δ高表达L02细胞周期和核因子-κB活化影响

目的探讨镉对蛋白磷酸酶2A(PP2A)的B55δ亚基高表达和不同多态性单体型调控高表达的肝细胞周期的影响及其与核因子-kappaB(NF-κB)活化的关系。方法选择永生化人正常肝L02细胞,采用B55δ编码基因PPP2R2D序列构建高表达的L02-2R2Dc细胞、与不同启动子区单体型调控高表达的L02-2R2D-PC1和L02-2R2D-PC3细胞株,以导入空载体的L02-pBabe为对照细胞。各细胞给予5～80μmol/L的氯化镉(CdCl2)处理建立细胞模型。噻唑蓝法检测各细胞生长的抑制作用;流式细胞术检测细胞周期;蛋白免疫印迹(Western blotting)检测细胞核内NF-κBp65蛋白的活化情况;荧光定量聚合酶链反应(QRT-PCR)检测环氧合酶-2(COX-2)基因mRNA水平的改变。结果与对照组比较,CdCl2组各细胞的增殖抑制率随镉水平增高呈剂量依赖性增高(Pearson’s r均P<0.05);与CdCl2组比较,冈田酸+CdCl2组各细胞的增殖抑制率明显增加(P<0.05);与对照组比较,CdCl2组细胞G1期比例下降、S期比例增加(P<0.05);胞核p65蛋白水平增高,COX-2 mRNA水平上调;这种效应在不同细胞株之间比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论镉可引起PP2A-B55δ高表达的人肝L02细胞增殖功能抑制并导致细胞周期S期阻滞,这种效应与NF-κB信号通路的活化有关。

溃疡性结肠炎PTPN2和NF-κB单核苷酸多态性的研究进展

溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)是一种发病机制尚不十分明确且病情反复的肠道疾病.目前众多学者认为,UC是遗传易感性、环境暴露、胃肠道菌群失调及炎症过度反应的共同作用后的结果.非受体型蛋白酪氨酸磷酸酶2(protein tyrosine phosphatase nonreceptor type 2,PTPN2)和核因子-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)在炎症中均扮演重要的角色.这两种炎症因子在UC的发生与发展过程中也起到了重要的作用.近些年,UC基因多态性研究已成为热点,西方人群中UC与PTPN2和NF-κB单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism)的相关性多有报道,我国南方地区也有报道但结果存在争议.现就UC易感基因:PTPN2和NF-κB的基因多态性进行综述.

核因子I-B高表达对肝L02细胞中蛋白磷酸酶2A-B55δ靶向调控研究

目的构建核因子I-B基因(NFIB)真核表达重组质粒,应用于其高表达调控肝细胞中蛋白磷酸酶2A(PP2A)的B亚基基因转录的功能学验证。方法逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)获得人NFIB mRNA片段,克隆入真核绿色荧光蛋白表达载体(pEGFP-N1),构建pEGFP-NFIB重组质粒后,分别给予250、500、1 000 ng转染永生化人正常肝L02细胞建立NFIB高表达细胞模型(相应设为250、500和1 000 ng剂量组),对照组为250 ng pEGFP-N1转染的L02细胞,荧光定量聚合酶链反应检测NFIB mRNA,激光共聚焦和免疫印迹法(WB)检测核因子-1(NF-1)蛋白水平。电泳迁移率实验分析与NF-1相结合的DNA序列的特异性,荧光素酶报告基因检测PP2A-B55δ亚基基因(PPP2R2D)启动子区的转录活力,RT-PCR和WB检测细胞内PPP2R2D mRNA和PP2A-B55δ蛋白水平。结果双向测序证实pEGFP-NFIB重组表达质粒构建成功。与对照组比较,各剂量组L02细胞中NFIB mRNA相对水平增高(P<0.01),增强型绿色荧光蛋白、NFI-B蛋白表达水平均升高(P<0.05)。NF-1可与PPP2R2D基因启动子区(2R2Dp)-462G>A不同多态性序列结合,NFIB高表达使L02细胞中2R2Dp-462G启动子活力下降(P<0.05),PPP2R2D mRNA和PP2A-B55δ蛋白水平均升高(P<0.05)。结论成功构建人NFIB真核表达重组质粒,应用于人肝细胞中证实NF-1靶向PPP2R2D的功能学调控作用。

早期胃癌患者H. pylori感染与活检组织PTEN、SOX2和NF-κB p65蛋白的关系

目的探讨早期胃癌患者幽门螺杆菌( H.pylori )感染与活检组织人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)、性别决定相关基因簇2(SOX2)和核因子κB p65(NF-κB p65)蛋白表达的关系。方法选取2015年1月至2018年2月湖南省脑科医院收治的确诊为早期胃癌并接受手术的患者128例,其中 H.pylori 阴性者43例(阴性组), H.pylori 阳性者85例(阳性组)。取存档的胃癌组织及癌旁组织石蜡标本,采用免疫组化法检测 H.pylori 阴性及阳性胃癌组织与癌旁组织中PTEN、SOX2和NF-κB p65蛋白的阳性表达情况,采用Logistic回归分析法分析其与 H.pylori 感染的关系。结果 H.pylori 阳性胃癌组织及癌旁组织中PTEN及SOX2阳性率明显低于 H.pylori 阴性组织( P <0.05), H.pylori 阳性胃癌组织及癌旁组织中NF-κB p65阳性率明显高于 H.pylori 阴性组织( P <0.05);胃癌组织PTEN、SOX2阳性率明显低于癌旁组织( P <0.05),胃癌组织NF-κB p65阳性率明显高于癌旁组织( P <0.05);经Logistic回归分析,胃癌组织PTEN、SOX2蛋白阳性表达降低 H.pylori 感染风险( OR= 0.483 、0.562,P < 0.05 ),NF-κB p65蛋白阳性表达增加 H.pylori 感染风险( OR=3.871,P <0.05)。结论 H.pylori 感染可导致早期胃癌组织中PTEN、SOX2蛋白表达降低,NF-κB p65蛋白表达升高,推测 H.pylori 可能通过影响PTEN、SOX2及NF-κB p65蛋白的表达而参与胃癌的发生、发展过程。

miR-21通过PTEN/AKT/TFEB通路对心肌梗死后心力衰竭大鼠心肌纤维化的影响

目的:探讨microRNA-21(miR-21)对心肌梗死诱导的心力衰竭大鼠心肌纤维化的影响机制。方法:SD大鼠采用结扎左冠状动脉前降支法建立心肌梗死模型,造模成功后分为模型组、重组腺相关病毒血清型9(rAAV9)-NC组、rAAV9-anti-miR-21组、rAAV9-anti-miR-21+BpV组,每组12只;另取12只大鼠作为假手术组。rAAV9-anti-miR-21组、rAAV9-NC组分别尾静脉注射含miR-21 antagomir及其阴性对照的腺病毒进行干预,rAAV9-anti-miR-21+BpV组大鼠尾静脉注射rAAV9-anti-miR-21的同时以0.2 mg/kg腹腔注射磷酸酶-张力蛋白同源物基因(PTEN)抑制剂BpV,假手术组和模型组经腹腔和尾静脉注射等体积的生理盐水,每日1次,连续干预2周。经胸超声心动图检测大鼠左心室舒张末期内径(LVEDD)和左心室收缩末期内径(LVESD),并计算左心室射血分数(LVEF)和短轴缩短分数(FS);酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清氨基末端脑钠尿肽前体(NT-proBNP)水平;取左心室并称重,计算左心室质量指数(LVMI);马松(Masson)染色观察心肌组织病理变化;实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测左心室组织miR-21、PTEN、CollagenⅠ和CollagenⅢ表达水平;透射电子显微镜观察心肌组织自噬情况;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测左心室组织自噬和PTEN/蛋白激酶B(AKT)/转录因子EB(TFEB)通路相关蛋白表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠LVEDD、LVESD、血清NT-proBNP水平、LVMI、心肌胶原体积分数(CVF)、miR-21和CollagenⅠ、CollagenⅢ的mRNA水平以及p62蛋白水平、p-AKT/AKT比值升高,LVEF、FS、PTEN的mRNA和蛋白水平、自噬空泡的数量以及LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1、TFEB蛋白水平下降(P<0.05);与模型组比较,rAAV9-anti-miR-21组大鼠LVEDD、LVESD、血清NT-proBNP水平、LVMI、CVF、miR-21和CollagenⅠ、CollagenⅢ的mRNA水平、p62蛋白水平、p-AKT/AKT比值下降,LVEF、FS、PTEN的mRNA和蛋白水平、自噬空泡的数量以及LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1、TFEB蛋白水平升高(P<0.05);而敲低miR-21基础上应用PTEN抑制剂下调PTEN表达可降低自噬,减弱敲低miR-21对心力衰竭大鼠心肌纤维化的抑制作用。结论:miR-21在心肌梗死后心力衰竭大鼠模型中的高表达可能通过下调PTEN、激活AKT、抑制TFEB的核易位,进而抑制自噬,促进心肌纤维化。

黄芩素通过抑制小鼠蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白、细胞外信号调节激酶1/2、核因子κB和钙调磷酸酶信号通路减轻血管紧张素Ⅱ诱导的心肌重构

黄芩素是一种特异性的脂氧合酶抑制剂,有抗炎和抗氧化作用,而其在血管紧张素（angiotensin,Ang）Ⅱ诱导的高血压和心肌重构中的作用仍不清楚。该研究探讨黄芩素对心肌肥厚和纤维化的影响及潜在机制。方法：单用AngⅡ[1200ng/（kg·min）]或联用12/15-脂氧合酶抑制剂黄芩素（25mg／kg）输注野生型小鼠，持续2周。通过HE染色、Masson染色、麦胚凝集素染色和免疫组织化学对心脏切片进行组织学检查。

LncRNA GAS5通过miR-21调控脊髓损伤后神经细胞凋亡的机制研究

目的 明确长链非编码RNA生长阻滞特异性转录因子5(LncRNA GAS5)与微小RNA-21(miR-21)的关系,阐明LncRNA GAS5调控miR-21参与脊髓损伤后神经细胞凋亡的机制。方法 建立脊髓损伤大鼠和氧糖剥夺复氧(OGD/R)处理的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC-12)模型;沉默和过表达GAS5,构建下调shGAS5表达的慢病毒,通过生物信息学分析预测LncRNA GAS5与miR-21存在结合位点等。通过双荧光素酶报告基因实验等探究GAS5与miR-21的结合位点;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测miR-21、GAS5、同源性磷酸酶-张力蛋白(phosphatase and tensin homolog,PTEN)基因、半胱天冬氨酸蛋白酶3(Caspase 3)、B淋巴细胞瘤(Bcl)-2相关X基因(Bax)、Bcl-2和蛋白激酶B(AKT)的RNA表达水平;Western blot检测Cleaved caspase 3、Bax、Bcl-2、AKT和磷酸化AKT(p-AKT)的蛋白表达水平;TUNEL技术检测神经细胞凋亡程度。结果 大鼠脊髓损伤后脊髓中miR-21、Bcl-2及pAKT表达水平降低(P<0.05),GAS5、PTEN、Bax及Cleaved caspase-3表达均升高(P<0.05)。PC-12体外培养与OGD/R损伤后出现与大鼠脊髓损伤模型类似结果,且于OGD/R处理后2 h最显著。GAS5可通过碱基互补配对方式结合miR-21,进而调控下游PTEN信号通路。下调GAS5或过表达miR-21可抑制PC-12细胞凋亡(P<0.05)。结论 GAS5通过结合miR-21,上调PTEN并抑制AKT磷酸化,进而促进脊髓损伤诱导的神经细胞凋亡。

香砂六君子汤对慢性萎缩性胃炎大鼠胃组织PI3K信号通路相关因子表达的影响

目的观察香砂六君子汤对慢性萎缩性胃炎(CAG)大鼠胃组织血管内皮生长因子(VEGF)、磷酸酶张力蛋白同源物基因(PTEN)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)的影响,探讨该复方防治CAG的作用机制。方法将120只Wistar大鼠分为空白组和模型组,采用综合法制作CAG动物模型,将成模大鼠分为模型组、维酶素组和香砂六君子汤高、中、低剂量组,空白组和模型组大鼠给予10 mL/(kg·d)蒸馏水灌胃,香砂六君子汤高、中、低剂量组分别给予24、12、6 g/(kg·d)香砂六君子汤灌胃,维酶素组给予0.30 g/(kg·d)维酶素灌胃,连续120 d。ELISA检测大鼠胃组织VEGF含量,RT-PCR和Western blot分别检测大鼠胃组织PTEN、PI3K、AKT基因和蛋白的表达。结果与空白组比较,模型组大鼠一般状况较差,胃黏膜变薄,上皮细胞及腺体排列紊乱、稀疏,腺体数目明显减少,黏膜肌层增厚向固有层延伸,可见大量炎性细胞浸润,胃组织PTEN基因及蛋白表达显著降低(P<0.01),VEGF含量和AKT、PI3K基因及蛋白表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,香砂六君子汤高剂量组大鼠胃组织PTEN基因表达显著升高(P<0.01),VEGF含量和AKT、PI3K基因及蛋白表达显著降低(P<0.01)。结论香砂六君子汤通过改善模型大鼠生存状况及胃黏膜病理状态,上调胃组织PTEN表达,下调VEGF、AKT、PI3K表达,发挥治疗CAG的作用。

PTEN对巨噬细胞炎性细胞因子分泌的影响及其机制研究

目的:PTEN/PI-3K/Akt通路在LPS介导的炎症和内毒素血症中可能具有重要的调控作用,PTEN与LPS刺激引起的炎性介质增多之间的关系尚不明确。文中观察PTEN对LPS攻击所致RAW 264.7细胞TNF-α分泌水平的影响并探讨其可能的机制。方法:①以RAW 264.7细胞为研究对象,第1组为对照组,第2组和第3组为PTEN抑制剂组,分别提前1 h加入PTEN抑制剂200、100 nmol/L,以LPS刺激6 h后收集细胞培养上清,用ELISA法检测上清中TNF-α的水平。②将NF-κB-LUC质粒与pRL-CMV质粒共转染RAW 264.7细胞,以LPS处理细胞6 h后通过检测NF-κB反应性荧光素酶报告基因表达,观察PTEN在LPS攻击巨噬细胞时对NF-κB转录激活的影响。结果:与正常细胞相比,抑制PTEN可使LPS诱导的TNF-α分泌减少,NF-κB活性减弱。结论:PTEN可上调LPS诱导的巨噬细胞TNF-α分泌水平,可能是通过激活NF-κB的转录活性增加TNF-α的分泌水平,从而在内毒素所诱导的炎症反应中发挥重要的调控作用。

PP2A在肝枯否细胞NF-κB活化中的调控作用及其效应机制

目的探讨蛋白磷酸酶2A(PP2A)的表达在肝枯否细胞(KC)核因子-κB(NF-κB)活化中的作用,对KC核因子-κB活化的表达调控机制进行理论探索。方法采用胶原酶灌注和percol密度梯度离心法分离得到高纯度大鼠KC,分为内毒素(LPS)及二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)+LPS分别与KC体外共培养组及一个阴性对照组,24 h后收集各组细胞和培养上清,分别采用RT-PCR法和酶联免疫吸附法(ELISA)检测KC中PP2A、NF-κB p65及TNF-α的表达和培养上清中TNF-α的含量。结果 LPS组细胞培养上清中TNF-α含量显著高于对照组(P<0.01),KC中NF-κB p65和TNF-α的表达也明显增强(P<0.01),但对照组的PP2A表达较LPS组强(P<0.01);PDTC+LPS组KC中NF-κB p65和TNF-α的表达较LPS组明显减弱(P<0.01),但PDTC+LPS组PP2A的表达较LPS组有明显增强(P<0.05)。结论 LPS能够显著增强KC中NF-κB p65的表达进而增强其TNF-α的表达,这种增强作用可能与PP2A的表达被抑制有关;用PDTC抑制NF-κB活性能够降低KC中TNF-a的表达,这种抑制作用可能与PP2A的表达增强有关;PP2A可能参与了肝枯否细胞核因子-κB活化的表达调控。

多发性骨髓瘤患者骨髓间充质干细胞NF-κB mRNA表达水平及意义

目的体外观察多发性骨髓瘤(MM)患者骨髓间充质干细胞(BMMSCs)生长特性和核转录因子-κB(NF-κB)mRNA的表达水平,探讨其对MM发病影响。方法检测8例MM患者(实验组)及8例缺铁性贫血(IDA)患者(对照组)血清ALP、β2-MG的表达水平,同时取骨髓单个核细胞,体外培养分离BMMSCs,观察其体外细胞生长特性及生长曲线,并用流式细胞术鉴定;实时荧光定量PCR检测BMMSCs中NF-κB mRNA的表达水平;分析BMMSCs中NF-κB mRNA与血清ALP、β2-MG表达水平的关系。结果两组患者BMMSCs体外细胞生长特性及生长曲线无明显差异;流式细胞术检测结果表明,MM患者BMMSCs中CD105、CD90、CD44、CD29表达阳性,CD34表达阴性;MM组BMMSCs中NF-κB mRNA及血清ALP、β2-MG的水平分别为(5.45±4.52)×10-3、(311.30±68.18)U/L、(3.37±0.96)mg/L,IDA对照组分别为(0.64±0.46)×10-3、(92.50±21.20)U/L、(1.16±0.24)mg/L,两组间差异均有统计学意义(t分别为2.994、8.704和6.331,P均<0.05);仅MM组血清ALP与NF-κB mRNA的表达水平呈正相关(r=0.841,P<0.05)。结论 MM患者BMMSCs中NF-κB表达水平升高,且与血清ALP表达水平呈正相关,联合检测可能对MM病情评估有一定的临床意义。

抗MCV抗体与RANKL、OPG、TRACP-5b及RA疾病活动度的相关性研究

目的探索类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者抗突变型瓜氨酸波形蛋白(mutant citrulline vimentin,MCV)抗体与骨代谢标志物及疾病活动度之间的关系。方法收集119例RA患者临床资料和血清,检测抗MCV抗体及RANKL、OPG和TRACP-5b等骨代谢标志物,分析抗MCV抗体与骨代谢标志物之间的相关性,并探索抗MCV抗体与疾病活动是否有关联。结果RA患者抗MCV抗体滴度与RANKL、TRACP-5b水平及RANKL/OPG均无显著相关性(P>0.05),与OPG呈正相关但相关系数低(r=0.183,P<0.05)。②抗MCV抗体与DAS28(r=0.376,P<0.01)、ESR(r=0.440,P<0.01)、RF-IgM(r=0.376,P<0.01)呈正相关。结论抗MCV抗体与血清中骨代谢相关标志物TRACP-5b、RANKL、OPG、RANKL/OPG均无显著相关性,提示抗MCV抗体可能不直接通过影响骨代谢参与RA骨侵蚀进展。抗MCV抗体与疾病活动度呈正相关,提示它对RA病情评估可能有一定的价值。

黄芪多糖对大鼠慢性难愈合创面的作用及其对PTEN、AKT和VEGF蛋白表达的影响

目的:观察黄芪多糖对慢性难愈合创面的促进愈合作用及其对同源性磷酸酶-张力蛋白(phosphatase and tension homology deleted on chromosome ten,PTEN)、丝-苏氨酸蛋白激酶(serine-threonine kinase,AKT)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)蛋白表达的影响。方法:建立慢性难愈合创面模型大鼠,随机分为模型组(0.5 g凡士林药膏)、黄芪多糖组(0.5 g黄芪多糖药膏)及京万红软膏组(0.6 g京万红软膏),同时设正常对照组(0.5 g凡士林药膏),各组每天给予相应外用药1次,连续给药3周。观察给药后7、14、21 d大鼠一般状态、体质量、伤口愈合率的变化,同时检测给药21 d后各组大鼠血清TNF-α、IL-6、VEGF含量变化。HE染色观察创面组织病理变化。Western blot检测创面组织PTEN、AKT、p-AKT、VEGF蛋白表达水平。结果:与正常对照组相比,模型组大鼠毛发无光泽,萎靡不振,摄食量减少,体质量显著降低(P <0.01),且血清TNF-α、IL-6水平显著升高(P <0.01)。与模型组相比,黄芪多糖组与京万红软膏组大鼠一般状态开始改善,体质量、创面愈合率显著增加(P <0.01),血清TNF-α、IL-6水平显著降低(P <0.05),VEGF含量显著升高(P <0.05)。HE染色结果显示给予黄芪多糖可减少炎性细胞浸润,促进血管、皮肤新生。Western blot检测结果显示黄芪多糖可下调创面组织PTEN蛋白表达(P <0.01),上调VEGF和p-AKT/AKT蛋白表达(P <0.01)。结论:黄芪多糖对慢性难愈合创面具有促进愈合作用,可通过抑制炎症反应,下调PTEN,上调VEGF和p-AKT/AKT蛋白表达,发挥促进血管生成、修复创面的作用。