胰十二指肠同源框基因-1在骨髓来源nestin阳性细胞的转染及表达

目的将真核表达载体pEGFP-C1-PDX-1转染大鼠骨髓来源nestin阳性细胞,并对其转染条件进行优化以获得较高效率。方法将已构建好的重组载体转染骨髓来源nestin阳性细胞,改变DNA的量、转染后培养基中的血清浓度,在荧光显微镜下观察荧光并计算转染效率;转染后48h用RT-PCR检测目的基因的表达情况。结果质粒2～10μg获得最佳的转染效率,提高转染后培养基的血清浓度可提高转染后细胞存活率及转染效率。RT-PCR检测转染后骨髓来源nestin阳性细胞有PDX-1表达。结论通过优化转染条件提高了pEGFP-C1-PDX-1转染大鼠骨髓来源nestin阳性细胞的效率,为其成为组织工程的种子细胞提供了实验依据。

胰腺十二指肠同源框-1基因促进大鼠骨髓间充质干细胞体外横向分化为胰岛素分泌细胞

目的:研究胰腺十二指肠同源框-1基因(Pdx-1)在骨髓间充质干细胞(MSC)体外分化中的作用。方法:构建含有Pdx-1基因的真核表达载体,转染介质Superfect介导重组载体转染MSC,G418筛选阳性细胞后对转染组(Pdx-1+MSC)和未转染组(Pdx-1-MSC)均体外进行诱导分化,细胞免疫组化染色鉴定诱导后胰岛素分泌阳性细胞。结果:限制性酶切分析和序列测定证实成功构建了含有Pdx-1基因的真核表达载体,荧光显微镜观察证实Superfect能高效介导重组载体转染MSC;细胞免疫组化染色显示Pdx-1+MSC分化为胰岛素分泌细胞的数量较Pdx-1-MSC明显增多,阳性率分别为(28.23±2.56)%和(7.08±2.69)%。结论:Pdx-1能增强大鼠MSC体外分化为功能性胰岛素分泌细胞的能力,为胰岛移植开辟新的思路,对1型糖尿病治疗有重要的应用价值。

下颌骨间叶性软骨肉瘤1例

间叶性软骨肉瘤(mesenchymal chondrosarcoma,MC)是一种发生于骨和骨外软组织,由未分化小细胞和肿瘤性软骨构成的具有独特双相结构的罕见恶性肿瘤^([1]),青年人多见,具有恶性度高、易局部复发和转移、预后差等特点。现报道1例下颌骨MC的诊治体会。1病例报告1.1一般资料患者,男,31岁,2020-12-01至浙江大学医学院附属第二医院就诊,主诉4个月前发现右下后牙齿松动,影响进食。

LPAR3、HOXA-11在IVF患者子宫内膜种植窗期的表达及意义

目的：探讨溶血磷脂酸受体3（LPAR3）、同源框基因-11（HOXA-11）在IVF—ET患者的子宫内膜组织着床窗口期的表达及意义。方法：采用免疫组织化学SP和半定量反转录-聚合酶链反应（RT—PCR）两种方法，检测LPAR3和HOXA-11在拟行IVF—ET患者排卵后5-7天（胚胎着床窗期）的子宫内膜组织中的表达。根据助孕后的结局，将153例因输卵管因素不孕的患者分为妊娠组67例和未妊娠组86例。结果：LPAR3在妊娠组腺上皮的表达显著高于未妊娠组，差异有统计学意义（P〈0．01）；HOXA-11在妊娠组腺上皮的表达均显著低于未妊娠组，在间质细胞中的表达均显著高于未妊娠组，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论：LPAR3在着床窗期子宫内膜腺上皮的表达减少，与HOXA-11在着床窗期子宫内膜腺上皮表达增加和间质细胞HOXA-11表达减少可能是导致子宫内膜容受性下降的原因之-。LPAR3、HOXA-11可以作为预测子宫内膜容受性的参考指标。

腺病毒载体介导PDX1在人脐带间充质干细胞中的表达

目的构建含胰十二指肠同源框-1基因（pancreatic and duodenal homeobox factor 1，PDX1）的重组腺病毒载体，并检测其在人脐带间充质干细胞（human umblic cord msenchymal stem cells，HUCM—SCs）的表达情况。方法用BglII／XhoI酶从pUC57-PDX1酶切PDX1，连接到pShuttle—GFP—CMV重组穿梭载体，得到pShutde—GFP—CMV—PDX1重组穿梭质粒，再将pShuttle—GFP—CMV—PDX1转移到pAdxsi载体上，得到pAdxsi—GFP—PDX1病毒质粒，利用脂质体介导重组腺病毒载体转染293细胞，包装出完整的腺病毒。用重组腺病毒感染HUCMSCs 24h后，经荧光显微镜、RT-PCR、免疫荧光、免疫细胞化学、Western Blot等检测PDX1基因及蛋白的表达。结果通过测序、酶切等鉴定PDX1基因正确插入穿梭质粒中，并与病毒骨架质粒重组，重组腺病毒可高效转染HUCMSCs，RT—PCR检测到PDX1 mRNA在HUCMSCs中表达，经免疫荧光、免疫细胞化学、Western Blot等证实转染PDX1在HUCMSCs胞核中表达。结论成功构建了PDX1腺病毒载体，并在HUCMSCs中有效表达。