常氏肝癌细胞cDNA文库的构建及ADAMs相关基因的免疫筛选与序列分析

抽提常氏肝癌细胞的总RNA ,以oligo(dT)为引物 ,通过两次转换模板 ,采用LD PCR合成全长cDNA ,在cDNA两端引入SfiⅠ的酶切位点。以λTriplEX2为载体经过包装后构建了常氏肝癌细胞cDNA表达文库。以ADAMs通用抗体 ,用免疫筛选技术从常氏肝癌cDNA文库中筛选出 2 2个阳性克隆 ,经测序分析和BLAST检索 ,证实其中一个为新基因 ,部分区域具有蛋白酶的功能 ,对该基因进行了GenBank登录 ,获注册号为AY0 780 70。

分析EST寻找小鼠胸腺基质细胞表达基因

网上生物信息量的膨胀导致新基因寻找手段的改变。借助mRNA差异显示技术获得的 17个表达序列标签(EST) ,通过对美国国家生物技术信息中心 (NCBI)的非冗余序列库 (NT)和小鼠EST库的BLAST同源检索 ,发现有 4个序列与已知基因高度同源 ,其中的DHPs和Eps8两个基因是首次在小鼠胸腺基质细胞中发现。它们可能与T细胞在胸腺内的发育分化有关。其它EST则为新基因。本结果也为下一步新基因的克隆及功能研究提供了有益的线索。

日本血吸虫肌动蛋白轻链基因的获得和分析

目的运用表达序列标签(expressedsequencetag,EST)技术,从日本血吸虫成虫cDNA文库中筛选和鉴定日本血吸虫新基因,为寻找日本血吸虫新的候选疫苗奠定基础。方法转化日本血吸虫成虫cDNA文库,随机挑取重组阳性克隆进行测序,获得EST;用NCBI站点的GenBank对所获得的新基因序列进行同源性检索;利用BLAST程序对同源性高的基因进行核苷酸和氨基酸水平的同源性比较;并利用pcgene软件对其蛋白质结构进行初步分析。结果发现xzw00081克隆的cDNA序列为日本血吸虫新基因并获得GenBank登录号(AY225851)。该cDNA序列与曼氏血吸虫肌动蛋白轻链基因高度同源,核苷酸水平的同源性为84%;氨基酸水平的同源性为86%;编码蛋白的理论相对分子质量为1053888,等电点为696;抗原表位可能位于氨基酸序列158～184处。结论用EST寻找日本血吸虫新基因是一种可行的方法,所筛选到的日本血吸虫新基因长374bp,编码88个氨基酸,与曼氏血吸虫肌动蛋白轻链基因高度同源,为进一步研究该基因的全序列及功能作准备。

五龄家蚕若干组织器官蛋白质数据库构建

为构建家蚕蛋白质数据库，达到从蛋白质水平研究基因的表达及表达产物的加工修饰 的目的，采用五龄家蚕体壁、中肠和脂肪为材料获取蛋白质样品，用蛋白质双向电泳技术分 离、纯化蛋白质，对其中的４０个蛋白质斑点进行了氨基酸序列分析及同源性检索，发现其中 ５８．５％的蛋白质与果蝇的有关蛋白质具有较高同源性，３６．５％与其他生物的蛋白质具有较高 同源性，只有５％与家蚕已知蛋白质具有较高同源性。研究发现有２７个蛋白质的Ｎ－末端氨基 酸序列在家蚕中是第一次被检测到，并通过互联网向ＳＷＩＳＳ－ＰＲＯＴ数据库进行了登录。研究 证明利用蛋白质数据库的结果，可以得到基因表达及其产物修饰的信息。

应用抑制性消减杂交技术克隆大鼠肝再生过程中特异表达基因

应用抑制性消减杂交技术成功地构建了高消减效率的正向消减cDNA文库 ,从随机挑取的 5 0个克隆中有31个均检出了 6 0～ 40 0bp插入片段 ,对这些插入cDNA片段进行测序后经Genbank同源性检索 ,表明其中 7个片段为未知新序列。大鼠肝切除后肝再生cDNA正向消减文库的建立为进一步大批量筛选、克隆肝再生特异性表达的未知新基因奠定了基础 。

中国南方民族语言塞擦音的类型与系属特征

中国南方民族语言塞擦音的类型特征一方面极为复杂,另一方面又有规律可寻。从调音部位来看,塞擦音类型体现出一条倾向性的等级序列式,即龈>龈腭>卷舌>龈后>硬腭;从语言系属分类来看,中国南方民族语言在塞擦音类型层面上正处在不同的发展阶段,即:(无塞擦音阶段)→南岛语→侗台语→南亚语→苗瑶语→藏缅语。从次类调音方法来看,塞擦音类型基本上是三分格局,即不送气清塞擦音、送气清塞擦音以及不送气浊塞擦音。上述塞擦音的类型特征表现在地理层面上就是从东至西、自南往北塞擦音的数量在逐渐增多。

上网的心情

坐在上海医科大学图书馆情报室的电脑前,心中常会涌出莫名的激动和兴奋。就在这里,我第一次跨上“互联网络”这条信息高速公路,进入了Internet广袤的信息世界…… 作为在读博士生,能顺利完成课题研究,交出一份满意的博士论文是我这3年来孜孜以求的奋斗目标。我的课题是筛选与结肠癌相关的新基因。常常为了实验的进展,流连于试管、烧杯间废寝忘食。多少次艰苦跋涉,多少次忘情追求,历经千般苦、尝过万般甜,如今实验结果终于初显端倪——条结肠癌中高度表达的cDNA已克隆成功。这是与结肠癌相关的新基因的cDNA克隆吗?