同源异型盒基因A5、三结构域蛋白14与结直肠癌的关系

目的探讨结直肠癌组织同源异型盒基因A5(HOXA5)、三结构域蛋白14(TRIM14)蛋白表达水平与临床病理特征及患者预后的关系。方法回顾性收集整理2016年5月至2018年5月期间于河南中医药大学郑州人民医院确诊的120例结直肠癌患者癌组织及癌旁组织标本及相关临床资料,采用免疫组化法检测组织HOXA5、TRIM14蛋白表达水平;分析HOXA5、TRIM14水平与结直肠癌患者临床病理特征及预后的关系;采用Kaplan-Meier法分析组织中HOXA5、TRIM14表达与结直肠癌5年生存率的关系;采用Cox比例风险回归模型分析结直肠癌5年预后影响因素。结果结直肠癌组织中TRIM14蛋白阳性率为73.33%,明显高于癌旁组织的10.00%,HOXA5蛋白阳性率为27.50%,明显低于癌旁组织的81.67%,差异均有统计学意义(P<0.05)。TRIM1蛋白阳性表达患者肿瘤低分化比例为42.05%,浸润深度T_(3)~T_(4)比例为72.73%,有淋巴结转移比例为47.73%,有远处转移比例为29.55%,明显高于TRIM1蛋白阴性表达的12.50%、37.50%、12.50%、6.25%,差异均有统计学意义(P<0.05);HOXA5蛋白阴性表达患者肿瘤低分化比例为41.38%,浸润深度T3~T4比例为77.01%,有淋巴结转移比例为48.28%,有远处转移比例为29.89%,明显高于HOXA5蛋白阳性表达的15.15%、27.27%、12.12%、6.06%,差异均有统计学意义(P<0.05)。结直肠癌组织中HOXA5阴性表达和TRIM14阳性表达患者的5年生存率分别为57.47%、59.09%,明显低于HOXA5阳性表达患者的90.91%和TRIM14阴性表达患者的87.50%,差异均有统计学意义(P<0.05)。死亡组患者有淋巴结转移比例为85.00%,有远处转移比例为55.00%,明显高于生存组的15.00%、7.50%,差异均有统计学意义(P<0.05)。经Cox比例风险回归模型分析结果显示,TRIM14是结直肠癌患者5年内死亡的独立危险因素,HOXA5是结直肠癌患者5年内死亡的保护因素(P<0.05)。结论结直肠癌组织中TRIM14呈高表达状态,HOXA5呈低表达状态,两者均与TNM分期、肿瘤分化程度、浸润深度等临床病理特征及预后相关,有作为预后标志物及治疗靶点的潜力。

同源异型盒基因HOXD10在乳腺癌组织中的表达及其临床病理意义

背景与目的:乳腺癌是威胁女性健康最常见的恶性肿瘤之一,从分子水平深入研究其癌变机制,对寻找新的标志基因具有重要意义。本研究探讨同源异型盒基因HOXD10基因在乳腺癌发生、发展进程中的可能作用。方法:以18s rRNA基因作为参照,采用荧光实时定量RT-PCR技术,以相对定量方法检测44例乳腺癌组织及16例乳腺良性病变组织中HOXD10 mRNA表达情况。结果:HOXD10在乳腺癌中的表达显著低于乳腺良性病变组织。组织学分级为Ⅲ级的乳腺癌标本中HOXD10 mRNA的表达显著低于组织学Ⅰ、Ⅱ级标本。HOXD10 mRNA的表达与淋巴结转移、肿瘤大小、TNM分期之间相关性不显著。结论:HOXD10基因在乳腺癌中呈低表达甚至表达缺失,由于这种基因可能为乳腺癌发生发展的抑制因素,因此对其我们应给予更多关注。

HL-60细胞内同源盒HOXA1、cDNA基因的克隆

目的：研究同源盒ＨＯＸ基因的表达在ＡＴＲＡ诱导白血病细胞分化中的作用。方法：利用我们建立的一种高效、简单的ｃＤＮＡ克隆方法－ＨＯＸ家庭基因指纹图技术，克隆ＨＬ－６０细胞内的ＨＯＸｃＤＮＡ基因。采用半定量ＲＴ－ＰＣＲ技术初步探讨ＡＴＲＡ对所克隆的ＨＯＸ基因表达的影响。结果：筛选出一个在ＨＬ－６０细胞内有表达的同源盒基因一ＨＯＸＡＩ基因ｃＤＮＡ片段，初步研究证实，此基因的ｍＲＮＡ水平在ＡＴＲＡ的作用下被上调。结论：ＡＴＲＡ可诱导ＨＬ－６０细胞内ＨＯＸＡ１基因表达增强。提示在ＡＴＲＡ诱导细胞分化而治疗恶性肿瘤的分子机制中，包括上调ＨＯＸＡ１基因表达而致白血病细胞分化成熟。

同源盒基因HoxA10的重组逆转录病毒载体及稳定包装细胞株的建立和鉴定

本研究构建携带同源盒基因hoxA10的重组逆转录病毒载体,并建立稳定产毒的包装细胞株。通过PCR扩增获得hoxA10基因编码区全长序列,克隆至逆转录病毒载体MSCVneo,并测序鉴定插入的hoxA10基因。将重组载体及空载体经脂质体分别转染包装细胞系PT67,以G418筛选稳定产毒细胞株。收集病毒悬液并测定病毒滴度。结果表明:重组逆转录病毒载体MSCVneo插入的hoxA10基因序列正确。将筛选所得的高效产毒细胞株命名为PT67/MSCVneo、PT67/MSCVneo-hoxA10。测定病毒滴度分别为5×105CFU/ml、4×104 CFU/ml。结论:成功构建了同源盒基因hoxA10的重组逆转录病毒载体,建立了稳定、高效、准确产生逆转录病毒的细胞株,为探讨hoxA10基因在造血干细胞的增殖和分化功能提供了实验基础。

同源盒HOXA_1基因在髓系白血病细胞内的表达

目的研究HOXA1基因在髓系白血病细胞内的表达及药物对其表达的影响。方法采用半定量逆转录—聚合酶链反应(RTPCR)技术,研究全反式维甲酸(ATRA)对HL60细胞内同源盒HOXA1基因表达的影响。同时对9例髓系白血病患者的HOXA1基因表达进行了检测。结果①ATRA可上调HL60细胞内HOXA1基因的表达。②所有受检白血病患者的HOXA1基因表达水平均比正常对照组高(P<0.01)。

苯丁酸钠和二甲基甲酰胺对乳腺癌MCF-7细胞增殖抑制及同源盒基因(HOX)A5表达影响的比较

目的:观察苯丁酸钠(PB)和二甲基甲酰胺(DMF)对乳腺癌MCF-7细胞增殖及同源盒基因(HOX)A5表达的影响。方法:应用MTT比色法,以梯度浓度的PB或DMF作用于MCF-7细胞,分别于24、48、72h对细胞增殖进行检测。HOXA5基因表达水平用基因组与β肌动蛋白(β-actin)灰度比值表示。结果:0.391～3.125mmol/L PB和0.5～8.0mmol/L DMF作用MCF-7细胞24～72h,随着PB浓度的增加或作用时间的延长,细胞生长抑制率明显增加。随着DMF浓度的增加或作用时间的延长,细胞生长抑制率也较明显地增加。RT-PCR法检测未处理乳腺癌MCF-7细胞中HOXA5基因表达0.460±0.065。应用0.781mmol/L和1.563mmol/L PB处理后,HOXA5基因表达水平分别为0.801±0.122、0.903±0.096,HOXA5基因表达明显上调,与用药前比较,差异有统计学意义(P<0.01)。应用0.5mmol/L和1.0mmol/L DMF处理后,HOXA5基因表达水平分别为0.474±0.057、0.484±0.061,HOXA5基因表达无明显变化,与用药前比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:PB和DMF可有效抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖,PB对HOXA5基因mRNA水平的表达有明显的上调作用,DMF对HOXA5基因表达无显著影响。

宁夏大学生示指和环指指长比与同源盒A11基因位点多态性的关联性

目的探讨宁夏大学生示指和环指指长比(2D∶4D)与同源盒(HOX)A11基因4个位点(rs6461992、rs6968828、rs7801581、rs17427875)多态性的关联性。方法采用数码相机提取667名宁夏汉族大学生(男性348名,女性319名)手部正面照片,图像分析软件标记解剖点并测量双手示指及环指指长;多重PCR法检测HOXA11基因各位点多态性;统计学软件比较分析2D∶4D和基因多态性在不同性别间的差异及其关联。结果宁夏汉族大学生女性左手和右手2D∶4D均显著高于男性(均P<0.05),右手-左手2D∶4D性别差异不显著;HOXA11基因rs7801581位点基因型、等位基因频率在不同性别间差异显著(均P<0.05),其他位点多态性在性别间的差异均无统计学意义;2D∶4D与HOXA11基因位点多态性关系中,仅女性左手2D∶4D与rs6461992位点基因型显著关联(P<0.05)。结论宁夏汉族大学生2D∶4D性别间差异显著,HOXA11基因rs6461992位点多态性可能与女性2D∶4D的形成有关。

同源盒基因A7在胶质瘤组织中的表达及其对胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨同源盒基因A7(HOXA7)在脑胶质瘤组织的表达及其对胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法选择2010年9月至2016年8月新乡医学院第一附属医院神经外科手术切除的46例神经胶质瘤标本和10例颅脑外伤手术切除的正常脑组织,应用实时荧光定量聚合酶链式反应检测脑胶质瘤组织和正常脑组织中HOXA7 mRNA相对表达量。选取对数生长期U251细胞随机分为空白对照组、无义序列对照组和HOXA7 siRNA组,空白对照组细胞不进行转染,无义序列对照组细胞转染无义序列Scrambled小干扰RNA(siRNA),HOXA7 siRNA组细胞转染HOXA7 siRNA;应用实时荧光定量聚合酶链式反应检测3组细胞中HOXA7 mRNA相对表达量,细胞计数盒-8增殖实验检测3组细胞增殖活力,流式细胞仪检测3组细胞的细胞周期及凋亡率。结果高级别脑胶质瘤中HOXA7的mRNA相对表达量显著高于低级别脑胶质瘤和正常脑组织,低级别脑胶质瘤中HOXA7 mRNA相对表达量显著高于正常脑组织(P<0.05)。HOXA7 siRNA组U251细胞中HOXA7 mRNA相对表达量显著低于空白对照组和无义序列对照组(P<0.05),空白对照组与无义序列对照组U251细胞中HOXA7 mRNA相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)。培养24、48、72、96 h时,HOXA7 siRNA组U251细胞增殖活力显著高于空白对照组和无义序列对照组(P<0.001);空白对照组与无义序列对照组U251细胞增殖活力比较差异无统计学意义(P>0.05)。HOXA7 siRNA组G_(0)/G_(1)期U251细胞占比显著高于空白对照组和无义序列对照组(P<0.05);空白对照组与无义序列对照组G_(0)/G_(1)期U251细胞占比比较差异无统计学意义(P>0.05)。HOXA7 siRNA组S期U251细胞占比显著低于空白对照组和无义序列对照组(P<0.05);空白对照组和无义序列对照组S期U251细胞占比比较差异无统计学意义(P>0.05)。HOXA7 siRNA组G_(2)/M期U251细胞占比显著高于空白对照组和无义序列对照组(P<0.05);空白对照组与无义序列对照组G_(2)/M期U251细胞占比比较差异无统计学意义(P>0.05)。HOXA7 siRNA组U251细胞凋亡率显著高于空白对照组和无义序列对照组(P<0.05),空白对照组与无义序列对照组U251细胞凋亡率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论HOXA7在脑胶质瘤组织中呈高表达,且随着脑胶质瘤级别的增加其表达水平显著增高;HOXA7可能通过促进脑胶质瘤细胞的增殖能力和抑制脑胶质瘤细胞的凋亡,参与脑胶质瘤的发生发展。

人同源盒基因HoxB4真核表达载体的构建及鉴定

本研究旨在构建人同源盒基因HoxB4真核表达载体并进行鉴定,为进一步研究HoxB4的作用提供物质基础。采用RT-PCR的方法从健康产妇脐血单个核细胞中扩增出该基因,并将HoxB4的PCR产物用EcoRI和BamHI双酶切后连接到用EcoRI和BamHI双酶切的带有EGFP编码序列和内部核糖体转入位点(IRES)的真核表达载体pIRES2-EGFP中,重组质粒在大肠杆菌DH5α内扩增后,对其进行双酶切及测序鉴定以证实载体构建成功。结果表明,双酶切和质粒测序结果证明HoxB4基因正确的连接到真核表达载体pIRES2-EGFP中,开放阅读框架正确,pIRES2-EGFP/HoxB4真核表达载体构建成功。结论 :利用PCR,DNA重组等分子生物学技术,成功构建了pIRES2-EGFP/HoxB4真核表达载体,为探讨HoxB4基因在造血干细胞的增殖和分化的调控功能提供了实验基础。

家兔矮小同源盒基因(Shox2)的克隆和表达分析

为了研究新西兰白兔矮小同源盒基因(Shox2)序列,预测其结构和功能,以及研究Shox2基因的时空表达特征,本研究克隆了新西兰白兔Shox2基因全长CDS区,分析其编码蛋白的同源性、亲疏水性、二级和三级结构特点、系统进化树等生物信息学特征,并用Western blot法验证融合蛋白TrxA-Shox2。分别在胚胎中期(E20.5d)、胚胎后期(E28.5d)、幼龄期(出生后10d)、成年期(A)4个时间点采集3只动物的肾、大血管、真皮、心、大脑、肝、肺、脾、肌肉、胆囊共10种组织,采用实时荧光定量PCR技术研究Shox2基因的时空表达图谱。结果,成功克隆了新西兰白兔Shox2基因(登录号:KP726285)。Shox2基因CDS区全长666bp,翻译221个氨基酸。生物信息学分析显示,Shox2为碱性、不稳定蛋白,Shox2蛋白氨基酸二级结构中α-螺旋区域占61.99%,无规则卷曲区域占33.48%,延伸链占4.52%。Western blot验证了融合蛋白TrxA-Shox2的表达。家兔Shox2蛋白氨基酸序列与眼镜猴、猩猩、褐家鼠、人的氨基酸序列同源性较高,说明Shox2蛋白在进化中较保守。Shox2基因mRNA在很多器官都有表达,在E20.5d的家兔胚胎中,Shox2mRNA在肾、肌肉和胆囊的表达量高,在E28.5d时表达量较高的是脾、心,幼龄期时表达量较高的是真皮、肝,成年期时表达量较高的是真皮、脾。本研究成功克隆了新西兰白兔Shox2基因,预测了其结构和功能。Shox2基因mRNA在很多器官都有表达,不同的组织和不同时间特征的表达量变化可能与Shox2功能高度相关,并受到严格的调控。

同源盒基因Hox2.3在小鼠造血调控中的作用

同源盒基因在造血细胞系细胞中表达,它们的表达具有细胞类型特异性。为了阐明同源盒基因在小鼠造血调控过程中是否有决定性作用,我们采用反义脱氧寡聚核苷酸抑制试验和逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)试验,证明小鼠同源盒基因(Hox2.3)对正常小鼠髓系血细胞的生长、发育调控起重要的作用。

携带同源盒基因HOXA9的逆转录病毒载体的构建和鉴定

目的构建携带同源盒基因(homeobox gene)HOXA9的逆转录病毒载体,并建立稳定产毒的包装细胞株。方法 PCR扩增HOXA9基因编码区全长序列克隆至逆转录病毒载体MSCVneo,经酶切、测序鉴定。将重组载体脂质体转染包装细胞系PT67,以G418筛选稳定产毒细胞株。收集病毒悬液并测定病毒滴度。结果重组逆转录病毒载体MSCVneo经酶切、测序鉴定正确。将筛选所得的高效产毒细胞株命名为PT67/MSCVneo-HOXA9,测定病毒滴度为5×105CFU/ml。结论成功构建了携带HOXA9基因的逆转录病毒载体,建立了稳定、高效、准确产生逆转录病毒的细胞株。

同源盒基因HOXB13与前列腺癌的关系

HOXB13基因属于同源盒基因,位于17号染色体长臂21区。研究发现此基因在前列腺癌的发生发展过程中起到重要作用。笔者就HOXB13基因在前列腺癌中的研究作一综述。

同源异型盒基因Engrailed家族在前列腺癌中的研究进展

近年来,前列腺癌的发病率和死亡率持续上升,早期诊断和治疗仍面临重大挑战。Engrailed是可编码转录因子的同源异型盒基因,在动物的胚胎发育中发挥重要作用。研究表明,Engrailed基因特别是EN1和EN2在前列腺癌中的表达异常,具有潜在的诊断和治疗价值。本文综述了Engrailed基因在前列腺癌中的表达特点、功能机制及其作为新型生物标志物和治疗靶点的研究进展。

同源盒基因调控先天缺牙的研究进展

同源盒基因是一个进化上高度保守的含有同源结构域的转录因子,其编码的转录调节因子在器官发生上起着重要的调控作用。该家族中的多个亚家族不仅参与了牙胚的分化过程,而且常由于其异常的表达导致先天缺牙的发生。随着分子遗传学、基因工程和人类基因组计划在先天缺牙疾病上的不断深入探索,同源盒基因突变类型及表达模式的研究正成为先天缺牙疾病的主要研究方向。本文通过对近年来文献回顾,对同源盒基因的研究进展、与先天缺牙相关同源盒基因的表达模式和分子机制以及同源盒基因在先天缺牙临床诊疗中的应用前景进行综述。

同源盒(HOX)基因对造血的调控作用

同源盒(HOX)基因,不仅在胚胎发育中起作用,而且在造血发育和分化中以种系特异性和阶段特异性的方式起调控作用。研究表明,HOXB(B2,B4,B6～9),HOXC(C6,C8)和HOXA(A5)基因与红系造血有关;HOXA,HOXB,HOXC的部分基因在淋巴系分化中起重要作用;A9,A10,B3,B7和B8调节粒单核系的发育。而且,HOX基因在不同发育阶段有不同的表达模式:位于3’端的基因在CD34^+骨髓造血细胞早期亚群中的表达水平最高,而位于5’端的基因有更广的表达谱,并在晚期造血分化中出现下调。另外,HOX基因的表达紊乱与白血病的发病有关。

同源异型盒基因BP1在乳腺癌组织中的表达及其临床意义

背景与目的BP1(beta-protein1)基因是新近发现的转录因子,定位于染色体17q21-22,属同源异型盒基因DLX家族,在急性髓系白血病和急性T淋巴细胞白血病中均呈过度表达。本研究通过观察BP1mRNA在乳腺癌中的表达情况,分析并探讨其与乳腺癌临床病理特征的关系。方法以β-actin基因作为参照,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,检测82例乳腺肿瘤组织、12例近端肿瘤旁组织和10例远端癌旁组织中BP1mRNA的表达。结果82例肿瘤组织中有53例BP1阳性(64.63%),而在近端癌旁组和远端癌旁组中则表达很弱(16.67%)或不表达(0%),差异具有统计学意义(P<0.05)。BP1基因的过表达与组织学分级有关(P<0.05),而与肿瘤大小、有无淋巴结转移、病理类型、肿瘤家族史、初潮年龄、初产年龄、怀孕次数、绝经状况、雌激素受体及孕酮受体状态无关。结论BP1基因在部分乳腺癌中上调,其表达与肿瘤组织学分级有关。

麻竹同源异型盒基因DlKNOX1的克隆及功能初步分析

同源异型盒基因在决定植物的形态建成中发挥着重要作用。采用RT-PCR和RACE技术,从麻竹中分离到1个同源异型盒基因,其cDNA全长1 452 bp,编码1个330个氨基酸的蛋白,包含1个KNOX1区、1个KNOX2区、1个ELK区和1个Homeobox区,属于KNOX蛋白,该基因命名为DlKNOX1(GenBank No.KF709955)。组织表达特异性分析表明,DlKNOX1在节中的表达量最高,茎和鞘中次之,而在叶片中最低。将DlKNOX1置于35S启动子控制下,构建到载体pPZP的多克隆位点并转化拟南芥。RT-PCR分析表明,DlKNOX1已在转基因植株中表达。转基因植株表型变化明显,花期比野生型延迟,果荚着生部位明显发生变化,这意味着DlKNOX1基因可能参与麻竹形态建成的调控。

尾型同源盒基因在成人急性淋巴细胞白血病中表达及临床意义

本研究旨在探讨同源盒基因CDX1,CDX2和CDX4在成人急性淋巴细胞白血病(ALL)中的表达及其临床意义。急性淋巴细胞白血病骨髓或外周血标本51份,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测CDX1,CDX2和CDX4在成人急性淋巴细胞白血病患者和14例正常对照组中的表达情况。结果表明,在14例健康成人中未见CDX1,CDX2和CDX4表达,15例缓解期急性淋巴细胞白血病患者中未见CDX1,CDX2和CDX4表达,在初治ALL患者中CDX2的表达率为60.8%,而在治疗缓解后其表达率明显下降(p<0.05);在复发组患者中CDX2表达率又升高(81.8%);CDX2表达与疾病危险分组相关,高危组CDX2阳性率为91.7%,高于标危组45.7%(p<0.05);CDX1和CDX4在初治及复发成人ALL中皆无表达。在初治和复发的成人ALL患者中CDX2表达阳性患者的完全缓解率(CR)低于表达阴性的患者(p<0.05);CDX2表达阳性患者的中位生存时间短于阴性表达的患者。结论:CDX2表达和成人ALL的发病、复发相关,CDX1和CDX4表达与成人ALL发病及复发无相关性;CDX2表达阳性的患者完全缓解率低,预后不良;CDX2可作为成人急性淋巴细胞白血病的发病、复发及预后判断的指标之一。

植物同源盒基因的克隆与功能研究

同源盒基因在植物、动物、菌物的广泛存在说明这种结构在真核生物进化的早期就已出现，并暗示其具有重要功能。本文对植物同源盒基因的克隆与功能研究进行了综述，包括同源盒基因编码蛋白的结构特点、类型，并以玉米Ｋｎ１、水稻ＯＳＨ１及拟南芥ＳＴＭ为例，介绍了同源盒基因功能研究的现状。现有证据表明，同源盒基因与植物的发育过程有关。