miR-375靶向调控人矮小同源盒基因2基因在人食管鳞状细胞癌中的表达

目的 miR-375在食管鳞状细胞癌(简称鳞癌)中低表达,但其调控的下游靶基因仍不明确。文中初步探讨miR-375在调控人食管鳞癌细胞中人矮小同源盒基因2(short stature homobox 2,SHOX2)的表达中的作用。方法运用生物信息学预测软件Target Scan、miRanda、Pic Tar、miRTarget2和PITA预测miR-375在SHOX2基因可能的作用位点。构建野生型SHOX2 3'UTR报告基因载体(p SHOX2-375-WT)及突变型SHOX2 3'UTR报告基因载体(p SHOX2-375-mut),测序鉴定。分7组转染:pmiR组、p SHOX2-375-WT组、p SHOX2-375-WT+miR-375组、p SHOX2-375-WT+miR-NC组、p SHOX2-375-mut组、p SHOX2-375-mut+miR-375组、p SHOX2-375-mut+miR-NC组,分别检测荧光素酶活性。转染miR-375的mimics于食管鳞癌细胞中,SHOX2 mRNA及蛋白表达分析。另检测食管鳞癌组织术后标本miR-375及SHOX2表达。结果 Target Scan、miRanda、Pic Tar、Mir Target2和PITA软件预测结果显示miR-375在SHOX2 3'UTR 1156-1170bp区域有且仅有1个保守作用位点。p SHOX2-375-WT+miR-375组荧光素酶活性(0.261±0.036)显著低于[pmiR(1.818±0.061)、p SHOX2-375-WT组(1.820±0.086)、p SHOX2-375-WT+miR-NC组(1.851±0.094)、p SHOX2-375-mut组(1.861±0.059)、p SHOX2-375-mut+miR-375组(1.896±0.048)、p SHOX2-375-mut+miR-NC组(1.760±0.062)],差异均有统计学意义(P<0.01)。过表达miR-375后EC9706细胞SHOX2 mRNA及蛋白较对照组相比表达受到抑制。食管鳞癌组织中的miR-375较癌旁组织表达降低,而SHOX2表达较癌旁组织表达增强。结论 miR-375在食管鳞癌细胞EC9706中靶向调控SHOX2基因的表达。

祛瘀通络解毒方联合中药外治方对糖尿病足溃疡面局部组织活化素Ⅰ型受体和人矮小同源盒基因2表达的影响

目的观察祛瘀通络解毒方联合中药外治方治疗糖尿病足溃疡的疗效以及对活化素Ⅰ型受体(Acvr1)和人矮小同源盒基因2(Shox2)表达的影响。方法将116例糖尿病足溃疡患者按照随机数字表法分为2组,对照组58例予中药外治方熏洗治疗,联合组58例在对照组治疗基础上加祛瘀通络解毒方治疗,2组均治疗4周。比较2组治疗前及治疗第7、14天溃疡面组织Acvr1、Shox2表达(免疫组化法),治疗前和治疗第7、14、28天血清Acvr1、Shox2水平(酶联免疫吸附法)及蛋白表达(Western blot法)、中医证候积分、疼痛视觉模拟评分(VAS)、溃疡面面积变化,统计比较2组肉芽组织形成时间、创面愈合时间、住院时间及临床疗效,采用Pearson检验分析血清Acvr1、Shox2水平与其他临床指标相关性。结果联合组总有效率96.55%(56/58),对照组总有效率77.59%(45/58),联合组临床疗效优于对照组(P<0.05)。随着治疗时间的延长,2组溃疡面组织Acvr1、Shox2表达及血清Acvr1、Shox 2水平和蛋白表达逐渐升高,中医证候积分及疼痛VAS逐渐降低,溃疡面面积逐渐缩小,各时间点两两比较差异均有统计学意义(P<0.05),且治疗后各时间点联合组与对照组同期比较差异也均有统计学意义(P<0.05)。联合组肉芽组织形成时间、创面愈合时间及住院时间均少于对照组(P<0.05)。血清Acvr1及Shox2水平与糖尿病病程、糖尿病足病程、中医证候积分、疼痛VAS、溃疡面面积、肉芽组织形成时间、溃疡创面愈合时间及住院时间呈显著负相关(P<0.05),Acvr1与Shox2呈显著正相关(P<0.05)。结论祛瘀通络解毒方联合中药外治方可有效提高糖尿病足溃疡的临床疗效,缩短创面愈合时间,提高Acvr1和Shox2表达,且二者有望成为糖尿病足新的治疗靶点。

同源盒基因2在黑色素瘤细胞对于曲美替尼耐药中的作用

目的:研究同源盒基因2(MSX2)在黑色素瘤细胞A375对于曲美替尼耐药中的作用机制。方法:构建曲美替尼耐药的A375细胞株(A375-AR),曲美替尼干预A375和A375-AR后采用CCK-8检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞中Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-9的表达以及MSX2的表达。采用小干扰RNA(siRNA)沉默A375-AR中MSX2基因,设计A375、A375-AR、A375-AR-MSX2,曲美替尼干预后,CCK-8检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测细胞中Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-9的表达以及MSX2的表达。构建MSX2过表达的A375细胞系(A375-OE),设置A375、A375-OE和A375-AR组,曲美替尼干预后,CCK-8检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测细胞中Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-9的表达以及MSX2的表达。结果:A375-AR对 1.8 nmol/L的曲美替尼耐药,采用 1.8 nmol/L曲美替尼干预后,A375细胞活力和细胞凋亡率显著高于A375-AR,A375细胞中Bcl-2基因表达水平低于A375-AR,而Bax、Caspase-3、Caspase-9的表达水平高于A375-AR。A375-AR沉默MSX2后,细胞对于曲美替尼敏感性显著增高,且细胞活力下调,凋亡率上调,细胞中Bcl-2表达下调,Bax、Caspase-3、Caspase-9的表达上调。A375过表达MSX2后,细胞对于曲美替尼敏感性显著下调,细胞活力上调,凋亡率下调,细胞中Bcl-2表达上调,Bax、Caspase-3、Caspase-9的表达下调。结论:MSX2基因可以诱导黑色素瘤细胞对于曲美替尼的耐药,是治疗黑色素瘤耐药的潜在靶点。

尾型同源盒基因2、缺氧诱导因子-1α蛋白表达及肿瘤芽孢在结直肠癌中的相关性研究

目的探讨结直肠癌组织中尾型同源盒基因2(cadual homeobox gene 2,CDX2)、缺氧诱导因子(hypoxia inducible factor,HIF)-1α蛋白表达情况及肿瘤芽孢间的相关性。方法回顾性收集西安交通大学第一附属医院2012年1月至2015年9月期间符合本研究纳入条件的63例手术切除的结直肠癌标本,利用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连接两步法检测CDX2和HIF-1α蛋白表达,光学显微镜下观察染色情况及肿瘤芽孢并对肿瘤芽孢分级,利用Spearman等级相关性检验分析三者之间的相关性。结果CDX2和HIF-1α在结直肠癌组织中的蛋白阳性表达者分别为35例(55.6%)和47例(74.6%),二者的蛋白阳性表达呈负相关(r_(s)=–0.302,P=0.017);CDX2和HIF-1α在结直肠癌组织中芽孢部位的蛋白阳性表达者分别为21例(51.2%)和26例(63.4%),二者的蛋白阳性表达亦呈负相关(r_(s)=–0.336,P=0.031),但未发现肿瘤芽孢分级与结直肠癌组织中CDX2或HIF-1α蛋白阳性表达之间有相关性(r_(s)=0.113,P=0.370;r_(s)=–0.026,P=0.838)。结论从本研究结果看,同一结直肠癌标本及其内芽孢部位中CDX2和HIF-1α蛋白阳性表达均呈负相关,未发现肿瘤芽孢分级与结直肠癌组织中CDX2、HIF-1α蛋白阳性表达之间有关,提示在结直肠癌恶性进展过程中缺氧环境可能参与了CDX2水平的下调。

NK2同源盒1基因新发变异所致脑-肺-甲状腺综合征1例并文献复习

脑-肺-甲状腺综合征(BLTS)是一种全球罕见的涉及多器官且具有明显异质性的疾病。本文总结1例NK2同源盒1(NKX2-1)基因新发变异所致BLTS临床特征及诊疗经过,并复习相关文献,以提高临床医师对该病的认识。患儿男,3岁,出生时有急性呼吸窘迫综合征病史,后出现运动及言语发育落后、反复肺部感染、代偿性甲状腺功能减退,全外显子基因检测显示NKX2-1基因外显子1~2杂合缺失。因此,对于有急性呼吸窘迫综合征病史患儿表现出神经系统异常、反复呼吸道感染或甲状腺功能减退时,应及时进行基因检测以助于早期诊断。

Musashi-1和尾型同源盒基因2在胃黏膜肠上皮化生中的表达及意义

目的探讨Musashi-1（Msi-1）和尾型同源盒基因2（CDX2）在不同形态胃窦黏膜肠上皮化生中的表达。方法采用回顾性队列研究方法。收集2009年3月至2013年6月郑州大学第二附属医院收治256例胃炎[慢性非萎缩性胃炎（CNAG）46例、萎缩性胃炎伴肠上皮化生210例]患者的临床病理资料。标本取材由2名内镜科医师负责完成，标本送检，由3名病理科医师独立阅片进行病理学诊断。对萎缩性胃炎伴肠上皮化生标本进行胃镜下分型（局灶隆起型、疣状隆起型、“棉絮状”增厚或凹陷型）和黏液染色检查分型（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型）；对标本进行免疫组织化学染色检测和免疫荧光双标染色检测。计数资料比较采用，检验。正态分布的计量资料以x±s表示，组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用LSD检验。结果（1）临床检查结果：胃镜分型：210例萎缩性胃炎伴肠上皮化生患者中，局灶隆起型65例，疣状隆起型85例，“棉絮状”增厚或凹陷型60例。黏液染色分型：Ⅰ型肠上皮化生70例，Ⅱ型肠上皮化生75例，Ⅲ型肠上皮化生65例。（2）免疫组织化学染色检测结果：204例患者的标本（CNAG36例、局灶隆起型萎缩性胃炎伴肠上皮化生52例、疣状隆起型萎缩性胃炎伴肠上皮化生68例、“棉絮状”增厚或凹陷型萎缩性胃炎伴肠上皮化生48例，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型肠上皮化生分别为56、60、52例）进行免疫组织化学染色检测。在CNAG组织的腺体颈、峡部发现Msi-1少量阳性表达，在萎缩性胃炎伴肠上皮化生组织中表达呈阳性。Msi-1在CNAG、局灶隆起型、疣状隆起型、“棉絮状”增厚或凹陷型萎缩性胃炎伴肠上皮化生标本中阳性表达率分别为25．0％（9／36）、69．2％（36／52）、76．5％（52／68）、75．0％（36／48），几者比较，差异有统计学意义（χ^2=31．850，P〈0．05）。局灶隆起型、疣状隆起型、“棉絮状”增厚或凹陷型萎缩性胃炎伴肠上皮化生Msi—1阳性表达率分别与CNAG比较，差异均有统计学意义（χ^2=16．655，25．714，20．677，P〈0．05）。Msi-1在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型肠上皮化生组织中阳性表达率分别为71．4％（40／56）、73．3％（44／60）、76．9％（40／52），3者比较，差异无统计学意义（χ^2=0．432，P〉0．05）。CNAG组织中未发现在特定部位CDX2表达增强；在萎缩性胃炎伴肠上皮化生组织的腺体表达明显。CDX2在CNAG、局灶隆起型、疣状隆起型、“棉絮状”增厚或凹陷型萎缩性胃炎伴肠上皮化生组织中阳性表达率分别为13．9％（5／36）、80．8％（42／52）、82．4％（56／68）、83．3％（40／48），几者比较，差异有统计学意义（，=65．973，P〈0．05）。局灶隆起型、疣状隆起型、“棉絮状”增厚或凹陷型萎缩性胃炎伴肠上皮化生CDX2阳性表达率分别与CNAG比较，差异均有统计学意义（χ^2=38．289．45．496，39．886，P〈0．05）。CDX2在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型肠上皮化生组织中阳性表达率分别为89．3％（50／56）、80．0％（48／60）、76．9％（40／52），3者比较，差异无统计学意义（χ^2=3．102，P〉0．05）。（3）免疫荧光双标染色检测结果：52例患者的标本（CNAG10例、局灶隆起型萎缩性胃炎伴肠上皮化生13例、疣状隆起型萎缩性胃炎伴肠上皮化生17例、“棉絮状”增厚或凹陷型萎缩性胃炎伴肠上皮化生12例）进行免疫荧光双标染色检测。CNAG组织未发现Msi-1和CDX2双阳性共表达细胞。萎缩性胃炎伴肠上皮化生组织中可见杯状细胞周围Msi-1和CDX2双阳性共表达细胞明显增多。局灶隆起型、疣状隆起型、“棉絮状”增厚或凹陷型萎缩性胃炎伴肠上皮化生中Msi-1和CDX2双阳性共表达率分别为41．4％±11．9％、43．7％±12．7％、42．8％±12．7％，3者比较，差异无统计学意义（F=0．131，P〉0．05）。Msi--1和CDX2双阳性共表达在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型肠上皮化生组织中阳性表达率分别为33．8％±10．6％、43．8％±10．1％、51．0％±2．7％，3者比较，差异有统计学意义（F=9．817，P〈0．05）；Ⅰ型分别与Ⅱ、Ⅲ型比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）；而Ⅱ型与Ⅲ型比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。结论Msi-1、CDX2、Msi-1和CDX2双阳性的表达与肠上皮化生的3种形态无关；Msi-1和CDX2双阳性共表达可能是肠上皮化生组织向胃黏膜瘤变过程的重要机制之一。

尾型同源盒基因2基因表达对胃癌细胞生长影响的研究

目的观察尾型同源盒基因2（Cdx2）基因过表达对胃癌细胞生物学性状的影响。方法构建人Cdx2真核表达载体，并转染胃癌细胞MGC-803。实验分为四组：未转染组、转染pCMV-HA组、转染pCMV-GAPDH-HA组、转染pCMV-Cdx2-HA组。应用荧光定量PCR检测各组Cdx2基因的表达情况，Western blot法检测各组Cdx2蛋白的表达情况，MTT法观测细胞增殖，透射电镜观察转染细胞形态学的改变，流式细胞仪分析细胞周期和凋亡。结果成功构建了pCMV-Cdx2-HA真核表达载体，在瞬时转染pCMV-Cdx2-HA质粒48h的MGC-803细胞有较高水平的Cdx2基因mRNA和蛋白的表达；与未转染组、转染pCMV-HA组、转染pCMV-GAPDH-HA组比较，转染pCMV-Cdx2-HA组的胃癌细胞在转染72h时生长受到明显抑制，G0／C1期比例上升，S期比例下降，胃癌细胞的凋亡率也明显升高（P〈0．05）；转染pCMV-Cdx2-HA的胃癌细胞胞核消失，核染色质固缩、解体，内质网、高尔基复合体膨大成泡状。结论Cdx2基因可明显抑制胃癌细胞的生长，提示Cdx2参与了胃癌的生长调控。

高分辨CT三维重建联合肺泡灌洗液中SHOX2、RASSF1A基因甲基化检测诊断早期肺结节的价值

目的:探究高分辨CT三维重建联合肺泡灌洗液(BALF)中矮小同源盒基因2(SHOX2)、Ras相关区域家族A1(RASSF1A)基因甲基化检测诊断早期肺结节的价值。方法:选取2021年5月—2022年5月某院就诊并经纤维支气管镜(FB)检查的肺结节患者100例,FB下收集患者的BALF,通过实时荧光定量PCR法测定BALF中SHOX2和RASSF1A基因甲基化状态,同时收集高分辨CT三维重建检查、BALF检测结果。依据病检结果将患者分为恶性结节组(n=40)和良性结节组(n=60),分析高分辨CT三维重建检查、BALF中SHOX2、RASSF1A基因甲基化检测对早期肺结节的诊断价值,并绘制ROC曲线评价各检测方法在早期肺结节诊断中的效能。结果:SHOX2甲基化诊断恶性结节的敏感度为50.00%,AUC为0.708,RASSF1A甲基化诊断恶性结节的敏感度为52.50%,AUC为0.713,2基因甲基化联合诊断恶性结节的敏感度为75.00%,AUC为0.767。高分辨CT三维重建诊断恶性结节的敏感度为72.50%,特异度为73.33%,AUC为0.729,BALF对恶性结节的诊断敏感度为25.00%,特异度为100.00%,AUC为0.625。2基因甲基化联合+高分辨CT三维重建诊断恶性肺结节的AUC为0.890,敏感度与特异度分别为90.00%和73.33%,其诊断效能高于2基因甲基化联合+BALF细胞学分析和高分辨CT三维重建+BALF细胞学分析(Z=2.453、2.736,P均<0.05)。结论:高分辨CT三维重建联合BALF中SHOX2、RASSF1A基因甲基化检测在肺结节良恶性诊断中的鉴别效能较高,值得在临床中应用。

尾型同源盒基因2过表达对人胃癌耐顺铂细胞SGC7901／DDP多药耐药性的影响

目的探讨尾型同源盒基因2（Cdx2）过表达对人胃癌耐顺铂细胞SGC7901／DDP的多药耐药性的影响。方法将SGC7901／DDP细胞分为实验组[Cdx2过表达重组慢病毒载体（pCMA-Cdx2-HA）处理]、空载体组[慢病毒载体（pCMA-HA）处理]、对照组（不做处理）3组。MTT法检测各组SGC7901／DDP细胞对化疗药物的敏感性；流式细胞仪检测各组SGC7901／DDP细胞阿霉素的泵出蓄积量、细胞周期分布及凋亡情况；Westernblot技术进一步检测Cdx2蛋白和多药耐药基因1（MDRl）的蛋白表达水平。组间比较采用方差分析。结果SGC7901／DDP细胞感染慢病毒载体72h后，转染效率达90％以上。实验组Cdx2蛋白的相对表达量为0．374-0．06，较空载体组的0．12±0．02和对照组的0．11±0．03明显升高，3组比较，差异有统计学意义（F=82．37，P〈0．05）。实验组SGC7901／DDP细胞对阿霉素、5．氟尿嘧啶和顺铂的半数凋亡浓度分别为（1．10±0．08）mg／L、（4．81±0．12）mg／L、（3．81±0．15）mg／L，均高于空载体组的（0．59±0．05）mg／L、（3．71±0．14）mg／L、（2．20±0．15）mg／L和对照组的（0．63±0．04）mg／L、（3．92±0．15）mg／L、（2．92-4-0．11）mg／L，3组比较，差异有统计学意义（F=158．75，98．06，188．78，P〈0．05）。实验组阿霉素的泵出率为18．20％±0．12％，高于空载体组的7．22％±0．09％和对照组的8．79％4-0．11％，3组比较，差异有统计学意义（F=146．31，P〈0．05）。实验组G．期细胞的比例为52．2％±4．4％，明显低于空载体组的62．0％±5．O％和对照组的67．8％±3．3％；实验组S期的细胞比例为40．4％±1．5％，明显高于空载体组的25．6％±2．O％和对照组的21．8％±1．3％，3组细胞G．期和S期比较，差异均有统计学意义（F=17．08，236．83，P〈0．05）。实验组细胞凋亡率为7．6％±1．3％，明显低于空载体组的11．1％±1．1％和对照组的10．8％±1．0％，3组比较，差异有统计学意义（F=16．29，P〈0．05）。实验组中MDRl蛋白的表达量为1．854-0．18，高于空载体组的1．124-0．08和对照组的1．024-0．09，3组比较，差异有统计学意义（F=76．22，P〈0．05）。结论Cdx2基因的过表达可降低胃癌耐顺铂细胞SGC7901／DDP对化疗药物的敏感性，降低化疗药物在胃癌细胞内的蓄积浓度，增强胃癌多药耐药细胞的耐药性。

尾型同源盒基因2沉默对人胃癌耐顺铂细胞SGC7901／DDP多药耐药性的逆转

目的探讨尾型同源盒基因2（Cdx2）沉默对逆转人胃癌耐顺铂细胞SGC7901／DDP多药耐药性的影响。方法将对数生长期的人胃癌耐顺铂细胞SGC7901／DDP接种于培养板中，分为3组：感染RNA干扰Cdx2基因沉默重组慢病毒载体（pLL—Cdx2-shRNA）作为实验组；感染慢病毒空载体作为阴性对照组；空白对照组不做任何处理。Westernblot及RT—PCR检测Cdx2及凋亡相关基因C—myc、cyclinD1、survivin等蛋白及mRNA表达水平；MTT法检测3组细胞对化疗药物阿霉素、5．氟尿嘧啶、顺铂的敏感性；流式细胞技术检测3组细胞阿霉素的泵出率、细胞周期分布及细胞凋亡情况。计量资料用面±s表示，多组间比较采用单因素方差分析，两组间比较采用SNK—q检验，计数资料采用，检验。结果实验组、阴性对照组、空白对照组人胃癌耐顺铂细胞SGC7901／DDP中各蛋白相对表达量：Cdx2分别为0．187±0．060、0．535±0．033、0．567±0．014，C—myc分别为0．086±0．004、0．379±0．006、0．354±0．004，cyclin D1分别为0．016±±0．005、0．141±0．003、0．162±0．008，survivin分别为0．276±0．012、0．672±0．009、0．517±0．313，与阴性对照组和空白对照组比较，实验组上述蛋白表达量明显下降，差异有统计学意义（F=247．385，3．353，597．882，98．628，P〈0．05）。实验组、阴性对照组、空白对照组mRNA相对表达量：cdx2分别为0．184±0．010、0．894±0．056、0．837±0．049，c—myc分别为0．212±0．022、0．538±0．021、0．545±0．032，cyclinD1分别为0．045±0．009、0．163±0．009、0．157±0．010，survivin分另4为0．401±0．027、0．824±0．016、0．782±0．056，与阴性对照组和空白对照组比较，实验组上述基因mRNA表达量明显下降，差异有统计学意义（F=243．776，161．793，138．523，118．426，P〈0．05）。MTT法检测实验组、阴性对照组和空白对照组人胃癌耐顺铂细胞SGC7901／DDP阿霉素Ic50值分别为（0．12±0．05）mg／L、（0．33±0．08）mg／L、（0．39±0．15）mg／L，5-氟尿嘧啶Ic50值分别为（0．52±0．13）mg／L、（4．10±1．25）mg／L、（4．05±1．44）mg／L，顺铂Ic50值分别为（0．82±0．13）mg／L、（2．81±0．50）mg／L、（3．28±1．03）mg／L。实验组、阴性对照组、空白对照组中人胃癌耐顺铂细胞SGC7901／DDP对阿霉素泵出率分别为0．21％、0．37％和0．35％。与阴性对照组和空白对照组比较，实验组人胃癌耐顺铂细胞SGC7901／DDP对阿霉素、5一氟尿嘧啶和顺铂的Ic。值及对阿霉素的泵出率显著降低，差异均有统计学意义（F=8．101，13．854，15．159，X2=7．106，P〈0．05）。实验组、阴性对照组与空白对照组人胃癌耐顺铂细胞SGC7901／DDPG0／G1期细胞比例分别为17．87％、34．71％、37．20％，与阴性对照组和空白对照组比较，实验组G0／G1期细胞减少，差异有统计学意义（X^2=1．055，P〈0．05）；实验组G1／M期的细胞比例为11．93％，细胞凋亡率为31．13％，均明显高于阴性对照组的0．26％、16．58％和空白对照组的0．35％、13．18％，差异有统计学意K（X^2=2．249，11．030，P〈0．05）。结论Cdx2基因沉默可有效提高人胃癌耐顺铂细胞SGC7901／DDP对化疗药物的敏感性，增加化疗药物在胃癌细胞内的蓄积浓度，逆转人胃癌耐顺铂细胞SGC7901／DDP的耐药性。

尾型同源盒基因-2过表达对结肠癌细胞生物学性状的影响

目的观察尾型同源盒基因-2(CDX2)对结肠癌细胞生物学性状的影响,探讨CDX2基因在结肠癌发生发展中的作用。方法克隆人结肠CDX2基因,构建含CDX2的pEGFP-C1-CDX2表达载体,同时设pEGFP-C1空载体组及空白对照组。利用脂质体法将pEGFP-C1-CDX2和pEGFP-C1质粒分别转染Lovo细胞,应用Western blotting技术检测Lovo细胞中CDX2基因的表达;应用MTT法及流式细胞仪检测CDX2对Lovo细胞增殖、凋亡及周期的影响;应用ELISA法检测CDX2过表达对Lovo细胞基质金属蛋白酶-2(MMP-2)表达的影响。结果成功构建含CDX2真核表达载体。瞬时转染pEGFP-C1-CDX2的Lovo细胞48 h有较高水平的CDX2蛋白的表达;与pEGFP-C1空载体组及空白对照组比较,转染pEGFP-C1-CDX2组的Lovo细胞在转染72 h时生长未见明显抑制,G1期及S期所占比例无明显改变,凋亡率亦无明显增加(P均>0.05),但MMP-2分泌明显减少(P<0.05)。结论 CDX2过表达对Lovo细胞增殖、凋亡及周期无明显影响,但能够明显减弱Lovo细胞的侵袭力,从而对结肠癌浸润转移起抑制作用。

下调尾型同源盒基因-2对结肠癌细胞的侵袭及迁移能力的影响及其机制

目的观察下调尾型同源盒基因-2(CDX2)对结肠癌细胞侵袭迁移能力的影响,并初步探讨CDX2基因在结肠癌发生发展过程中的作用及机制。方法构建CDX2RNAi慢病毒载体,并转染人结肠癌SW480、HT29细胞,应用Western blotting及qRT-PCR技术检测CDX2基因的干扰效率;应用Transwell及划痕实验检测下调CDX2表达对SW480、HT29细胞侵袭、迁移能力的影响;Western blotting及RT-PCR检测下调CDX2表达对SW480、HT29细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关基因(E-cadherin、ZEB-1、Vimentin、Twist、Snail)表达的影响。结果构建的CDX2RNAi慢病毒载体可有效地抑制SW480、HT29细胞中CDX2基因的表达;转染LV-CDX2-shRNA组与转染空病毒组(LV-NT-shRNA)及空白对照组相比,侵袭、迁移能力显著增强(P<0.05);且E-cadherin表达下降,ZEB-1、Vimentin、Twist、Snail表达均升高。结论下调CDX2可诱导EMT发生,从而增强结肠癌细胞的侵袭迁移能力。

肌节同源盒基因同系物2对小鼠晶状体发育的影响

目的观察肌节同源盒基因同系物2(Msx2)表达缺失后晶状体早期发育过程的变化,探讨Msx2对晶状体早期发育的影响。方法利用Msx2基因敲除小鼠胚胎,采取组织学染色及免疫组织化学方法观察晶状体发育过程中的异常变化及细胞增殖情况。结果Msx2基因敲除后,晶状体的发育受到明显的抑制,晶状体早期发育迟缓,晶状体与角膜组织分离延迟。同时Msx2表达缺失使晶状体细胞溴脱氧尿核苷(BrdU)标记比例下降。结论Msx2基因敲除小鼠晶状体发育出现异常,晶状体发育异常的原因之一是晶状体发育过程中晶状体上皮细胞细胞增殖受到抑制。

同源盒基因2在大鼠慢性肾衰竭致血管钙化进程中的作用机制

目的建立慢性肾衰竭(CRF)血管钙化大鼠模型,探讨同源盒基因2(Msx2)在此进程中的作用机制。方法将30只大鼠随机分为正常对照组、腺嘌呤灌胃组和高磷饮食+腺嘌呤灌胃组,每组10只。所有大鼠以标准饲料喂养1周后,腺嘌呤灌胃组及高磷饮食+腺嘌呤灌胃组大鼠每日以腺嘌呤250 mg/kg灌胃,正常对照组大鼠采用等量蒸馏水灌胃,均持续6周。腺嘌呤灌胃组和正常对照组大鼠期间以标准饲料喂养,高磷饮食+腺嘌呤灌胃组大鼠予以高磷饮食喂养。6周后处死所有大鼠,检测血钙、血磷、血肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)水平。取大鼠肾脏行苏木素-伊红(HE)染色,计算3组大鼠肾小管间质损伤指数(TIL)评分。取大鼠胸主动脉行HE染色及Von Kossa染色,观察并进行钙盐沉积分级。采用免疫组织化学SP法检测Msx2在主动脉中的表达水平。采用Pearson相关分析探讨影响Msx2表达的相关因素。结果腺嘌呤灌胃组和高磷饮食+腺嘌呤灌胃组大鼠血磷、SCr、BUN水平、TIL评分、Msx2表达水平均明显高于正常对照组,高磷饮食+腺嘌呤灌胃组大鼠血磷、Msx2表达水平均高于腺嘌呤灌胃组(P<0.01)。Von Kossa染色结果显示,正常对照组大鼠胸主动脉钙盐沉积分级为0级,腺嘌呤灌胃组钙盐沉积为2~3级,高磷饮食+腺嘌呤灌胃组为3~4级。Pearson相关分析结果显示,腺嘌呤灌胃组及高磷饮食+腺嘌呤灌胃组大鼠血磷(r=0.882)、钙盐沉积分级(r=0.858)与Msx-2的表达水平均呈正相关(P<0.01)。结论腺嘌呤灌胃联合高磷饮食法可成功建立CRF血管钙化的大鼠模型且Msx2参与其病变的发生、发展过程,其中高磷血症可能增加Msx2的表达水平。

家兔矮小同源盒基因(Shox2)的克隆和表达分析

为了研究新西兰白兔矮小同源盒基因(Shox2)序列,预测其结构和功能,以及研究Shox2基因的时空表达特征,本研究克隆了新西兰白兔Shox2基因全长CDS区,分析其编码蛋白的同源性、亲疏水性、二级和三级结构特点、系统进化树等生物信息学特征,并用Western blot法验证融合蛋白TrxA-Shox2。分别在胚胎中期(E20.5d)、胚胎后期(E28.5d)、幼龄期(出生后10d)、成年期(A)4个时间点采集3只动物的肾、大血管、真皮、心、大脑、肝、肺、脾、肌肉、胆囊共10种组织,采用实时荧光定量PCR技术研究Shox2基因的时空表达图谱。结果,成功克隆了新西兰白兔Shox2基因(登录号:KP726285)。Shox2基因CDS区全长666bp,翻译221个氨基酸。生物信息学分析显示,Shox2为碱性、不稳定蛋白,Shox2蛋白氨基酸二级结构中α-螺旋区域占61.99%,无规则卷曲区域占33.48%,延伸链占4.52%。Western blot验证了融合蛋白TrxA-Shox2的表达。家兔Shox2蛋白氨基酸序列与眼镜猴、猩猩、褐家鼠、人的氨基酸序列同源性较高,说明Shox2蛋白在进化中较保守。Shox2基因mRNA在很多器官都有表达,在E20.5d的家兔胚胎中,Shox2mRNA在肾、肌肉和胆囊的表达量高,在E28.5d时表达量较高的是脾、心,幼龄期时表达量较高的是真皮、肝,成年期时表达量较高的是真皮、脾。本研究成功克隆了新西兰白兔Shox2基因,预测了其结构和功能。Shox2基因mRNA在很多器官都有表达,不同的组织和不同时间特征的表达量变化可能与Shox2功能高度相关,并受到严格的调控。

SIVA-1基因和Cdx2基因在胃癌发生发展中的作用、作用机制及其相互作用研究进展

胃癌的发生发展过程是一个多种因素诱发、多个基因和信号通路共同参与的复杂严密的过程。细胞凋亡诱导因子SIVA-1可通过XIAP/TAK1/TAB1以及ARF-MDM2-p53等信号通路诱导细胞凋亡,参与胃癌的演化过程并发挥抑癌基因作用。尾型同源盒基因2(Cdx2)则可通过p53和PTEN/PI3K/Akt等通路影响胃黏膜肠上皮化生,在胃癌中扮演着癌基因或抑癌基因的双重角色,与其在转录或翻译水平的修饰变化、调控的下游通路表达失调有密切关系。两者在胃癌演化过程中所涉及的信号通路存在密切交互并发挥重要作用。SIVA-1和Cdx2可通过PTEN/AKT、Caspase家族以及NF-κB p65等分子和信号通路发生相互作用,并可能循着同一信号通路影响胃癌的发生发展。

携带人尾型同源盒基因-2基因慢病毒表达载体的构建及鉴定

目的构建尾型同源盒基因-2(CDX2)基因的慢病毒表达载体并进行鉴定。方法 PCR扩增CDX2基因片段后,将其克隆入慢病毒表达载体pWPI,通过PCR、酶切和测序鉴定重组质粒。重组质粒转染包装细胞293T后获得包装的病毒颗粒。病毒颗粒感染直肠癌细胞XB1847,经PCR和Western Blot证明重组慢病毒携带的CDX2在XB1847细胞内表达的情况。结果经PCR扩增、酶切及测序验证,重组质粒构建成功,命名为pWPI-CDX2。PCR和Western Blot证明重组慢病毒感染XB1847细胞后CDX2能稳定表达。结论成功构建了携带CDX2的慢病毒载体,为研究CDX2在直肠癌中的功能提供了实验基础。

同源盒基因Msx2在小鼠磨牙牙根发育早期的表达

目的:观察在小鼠的牙根发育早期同源盒基因Msx2的表达,以探讨其在此过程中所起的作用。方法:出生后第6天和第8天的小鼠,取含有下颌第一磨牙的下颌骨,进行固定和脱钙,制备5μm的石蜡切片,原位杂交方法检测Msx2在小鼠牙根发育早期的表达。结果:第6天Msx2阳性信号出现在Hertwig’s上皮根鞘细胞、上皮根鞘周围的牙乳头细胞和早期的成牙本质细胞中;第8天在Hertwig’s上皮根鞘细胞、上皮根鞘周围的牙乳头细胞和成牙本质细胞中Msx2有阳性信号,而在成牙骨质细胞中无表达。结论:Msx2参与调控牙根早期发育的生理过程。

低剂量CT结合SHOX2、RASSF1A甲基化在肺癌早期预警中的应用

目的探讨低剂量CT结合Ras相关区域家族蛋白1A(RASSF1A)、矮小同源盒基因2(SHOX2)甲基化在肺癌早期预测中的应用价值。方法选取2021年1月~2023年1月我院90例拟行肺结节手术患者,根据手术病理学分为肺良性结节组和肺癌组。2组均于术前行低剂量CT检查、SHOX2、RASSF1A甲基化检测,采用Kappa指数分析上述检查结果与手术病理学一致性,分析低剂量CT、SHOX2、RASSF1A甲基化与血清肿瘤标志物[癌胚抗原(CEA)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、鳞状细胞癌抗原(SCC-Ag)、细胞角蛋白19片段(CYFRA21)]对肺癌诊断效能,采用Spearman低剂量CT检查、SHOX2、RASSF1A甲基化与临床病理特征相关性。结果低剂量CT、SHOX2、RASSF1甲基化及三者联合分别确定40例、43例、46例、58例肺癌,三者联合与手术病理学诊断肺癌效能一致性Kappa值为0.951;三者联合诊断肺癌敏感度96.67%、准确度97.78%均高于三者单一诊断效能(P<0.05);肺癌患者血清CEA、SCC、NSE、CYFRA21水平均高于肺良性结节患者(P<0.05);低剂量CT联合SHOX2、RASSF1甲基化诊断肺癌效能的AUC为0.983,近似于四种血清肿瘤标志物诊断肺癌效能的AUC 0.933;不同肿瘤直径、临床分期、组织学分化肺癌患者低剂量CT检出率及SHOX2、RASSF1A甲基化阳性率比较差异有统计学意义(P<0.05);肺癌患者低剂量CT检出率、SHOX2及RASSF1A甲基化阳性率与肿瘤直径、临床分期呈正相关,与组织学分化呈负相关(P<0.05)。结论低剂量CT联合SHOX2及RASSF1A甲基化可用于肺癌早期预警中,临床可通过其进行早期诊断、评估病情进展程度,以针对性展开后续治疗,改善预后。

无远端同源盒2基因在口腔颌面部畸形发生中的作用及作用机制研究进展

口腔颌面部畸形是口腔颌面外科常见疾病,根据畸形发生的部位可分为牙齿发育畸形、颌骨发育畸形。无远端同源盒(distal-less homeobox,DLX)基因参与调控细胞周期与凋亡、器官形态发育等过程,DLX2基因作为DLX基因家族中的一员,其表达变化或功能调节机制的紊乱都将导致牙齿发育畸形、颌骨发育畸形等口腔颌面部畸形的发生。DLX2基因导致口腔颌面部畸形的作用机制与DLX2基因参与成骨细胞分化和细胞周期的调控有关,可影响颌面部骨骼及牙齿的形态和功能;DLX2基因还可通过调控下游基因的效应表达,影响相关细胞因子的相互作用从而影响软骨生成,导致口腔颌面部畸形。