神经元素3与成对盒基因4促进胰腺十二指肠同源框蛋白1诱导间充质干细胞向胰腺分泌细胞分化

目的:探索神经元素3(neurogenin 3,NGN3)与成对盒基因4(paired box gene 4,PAX4)对胰腺十二指肠同源框蛋白1(pancreatic and duodenal homeobox factor1,PDX1)驱动间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)向胰腺β细胞分化过程中的作用。方法:构建PDX1基因及NGN3与PAX4双基因表达腺病毒,重组腺病毒Adxsi-CMV-PDX1感染诱导MSCs1周后,再行重组腺病毒Adxsi-CMV-NGN3/CMV-PAX4感染诱导MSCs;分别检测PDX1、PAX4、NGN3、NK转录因子相关的2.2(NK transcription factor related,gene family 2,locus2,NKX2.2)、v-maf muscu-loaponeurotic fibrosarcoma oncogene homolog B(MafB)、胰岛素(Insulin)、胰高血糖素(Glucagon)多种胰腺分泌细胞相关分子表达情况。结果:成功构建腺病毒Adxsi-CMV-PDX1与Adxsi-CMV-NGN3/CMV-PAX4;MSCs经Adxsi-CMV-PDX1与Adxsi-CMV-NGN3/CMV-PAX4分步诱导后,免疫细胞化学与间接荧光检测显示PDX1、NGN3与PAX4因子在细胞核内稳定表达;重组腺病毒稳定转染5 d后,细胞开始变圆并集聚成团,用双硫腙(dithizone,DTZ)染色细胞质呈亮红色;细胞经诱导1周后,用RT-PCR检测到神经源分化因子1(neurogenic differentiation 1,NruroD1)与NKX2.2表达,2周后可检测胰岛素/胰岛素原分子;间接荧光检测显示诱导后的细胞先后开始表达NKX2.2、MafB等转录因子与胰岛素/胰岛素原、胰高血糖等胰岛分泌细胞相关分子,但未能检测到v-maf musculoaponeurotic fibro-sarcoma oncogene homolog A(MafA)与C肽分子表达。结论:NGN3与PAX4对PDX1诱导间充质干细胞向胰腺分泌细胞分化具有促进作用。

同源盒蛋白1和叉头框蛋白C2在结肠癌中的表达及临床意义

目的探讨同源盒蛋白1(Six1)、叉头框蛋白C2(FOXC2)在结肠癌中的表达及其与结肠癌发生、发展和转移的关系。方法采用免疫组织化学法SP法检测70例结肠癌组织和30例癌旁正常组织中Six1、FOXC2的表达情况,分析两者在结肠癌发生发展中的相关性,及与肿瘤患者临床病理特征之间的关系。结果 Six1、FOXC2在结肠癌中的阳性表达率分别为82.9%和74.3%,均明显高于癌旁正常组织中的表达(16.7%,20.0%,P<0.05),且两者在结肠癌中的表达具有相关性(r=0.426,P<0.01)。Six1、FOXC2在结肠癌中的表达水平与肿瘤TNM分期、浸润深度、淋巴结转移密切相关(P<0.05),而与患者年龄、性别、肿瘤大小、分化状态无关(P>0.05)。结论 Six1、FOXC2高表达可能共同参与了结肠癌的发生发展过程并在结肠癌的侵袭转移过程中存在协同作用,故二者的表达可能与结肠癌的不良预后具有密切联系。

胰腺十二指肠同源基因1的结构、表达调控与功能

胰腺十二指肠同源基因1（PDX-1）是编码调节与胰腺发育和β细胞特异基因表达有关的一种特异性转录因子，是胰腺干细胞分化、成熟过程中的第一个分子标记。PDX-1基因的活化可促进胰岛素的释放及β细胞重要基因的表达，也是胰腺干细胞分化为胰岛β细胞的必要条件之一。细胞因子、胰高糖素样肽1（GLP-1）等多种信号转导物质协同调节PDX-1基因的表达。探讨PDX-1的基因表达及生理功能，有助于理解胰腺干细胞向胰岛β细胞诱导分化过程，进一步评估其在糖尿病发生中的可能作用。

丙酮酸脱氢酶激酶4和转录因子同源盒A1在胃癌组织及癌旁组织中的表达及其意义

【目的】探讨丙酮酸脱氢酶激酶4(PDK4)和转录因子同源盒A1(HOXA1)在胃癌组织及癌旁组织中的表达情况及其意义。【方法】选取2019年1月至2021年7月在本院确诊并接受手术治疗的123例胃癌患者,标本采集于胃部癌性病变部位组织(胃癌组)及毗邻癌性病变的癌旁组织(癌旁组)。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)测定胃癌及其癌旁组织中PDK4 mRNA、HOXA1 mRNA的表达水平,采用免疫组织化学法检测PDK4和转录因子HOXA1的表达情况,分析胃癌组织PDK4、HOXA1表达水平与胃癌患者的相关病理参数的关系;分析胃癌组织PDK4与HOXA1的相关性。所有患者随访3年,采用Kaplan-Meier法分析PDK4、HOXA1表达与胃癌患者预后不良的关系,采用COX回归分析影响胃癌患者预后不良的危险因素。【结果】在胃癌组织中PDK4 mRNA、HOXA1 mRNA表达水平以及蛋白阳性率明显高于癌旁组织(P<0.05);PDK4表达与患者浸润深度、TNM分期、分化程度、淋巴结转移有关(P<0.05),HOXA1表达与患者浸润深度、肿瘤大小、TNM分期、分化程度、淋巴结转移有关(P<0.05);胃癌组织中PDK4表达、HOXA1表达呈正相关(P<0.05),Kaplan-Meier结果显示PDK4、HOXA1阳性表达患者的生存率(26.0%、23.6%)低于阴性表达的生存率(63.4%、65.9%)。多因素COX分析显示,PDK4、HOXA1阳性是影响胃癌患者预后不良的危险因素(P<0.05)。【结论】PDK4、HOXA1表达可能与胃癌的发生及预后有关,二者在胃癌中的表达密切相关,对评估胃癌的预后具有重要意义。

同源结构域相互作用蛋白激酶2与肿瘤信号传导

同源结构域相互作用蛋白激酶2（HIPK2）是定位于细胞核内的丝/苏氨酸蛋白激酶家族成员之一,不仅与晚期胚胎发生、神经组织、视网膜及肌肉组织发育等密切相关,还参与调控肿瘤信号传导、下调癌基因表达、诱导肿瘤细胞凋亡和抑制肿瘤血管新生.HIPK2对肿瘤信号传导通路的调节主要与P53信号、Wnt/β-catenin通路及缺氧等密切相关.

结直肠癌组织中同源异型盒基因B7蛋白的表达及临床意义

目的探讨同源异型盒基因B7(HOXB7)蛋白在结直肠癌中的表达及其与患者临床病理因素和预后的关系。方法回顾性分析结直肠癌患者87例,采用RT-PCR法和免疫组织化学法分别检测结直肠癌组织中HOXB7 mRNA和HOXB7蛋白的表达,分析其表达与患者临床病理参数和预后的相关性。结果 HOXB7 mRNA在结直肠癌组织中的相对表达量为(42.4±16.3),显著高于癌旁正常组织的(19.4±7.6),差异有统计学意义(P<0.05);HOXB7蛋白在结直肠癌组织中表达的阳性率为73.9%,显著高于癌旁正常组织的10.3%(P<0.05);HOXB7蛋白表达与患者TNM分期、淋巴结转移和远处转移有显著相关性(P<0.05),且HOXB7蛋白阳性表达的患者具有更差的预后。结论 HOXB7蛋白在结直肠癌组织中表达上调,其高表达与结直肠癌患者的临床病理因素和预后相关。

set基因在人结直肠腺癌中表达的研究

目的探究set基因在人类结直肠腺癌组织中的表达情况及其表达水平与临床病理特征之间的关系。方法 通过半定量PCR检测set基因在39例结直肠腺癌组织与自身对照的正常结直肠组织中的mRNA表达,免疫组织化学检测SET蛋白在9例结直肠腺癌患者癌组织及其自身对照的正常结直肠组织中的表达。结果 (1)set基因在26例结直肠腺癌组织中的mRNA表达水平高于其自身对照正常结直肠组织,占总数的66.7%的,其中6例患者set基因在结直肠腺癌组织中的表达水平是其在正常癌旁组织中表达水平的2倍以上,最高达22倍(P<0.05)。(2)免疫组织化学显示,SET蛋白在结肠腺癌和癌旁组织细胞核中均表达,其中8例患者的癌组织SET蛋白表达水平明显高于癌旁组织(P<0.05)。结论 set基因在结肠癌中的表达上调,可能与结直肠腺癌发病有关。

视锥-视杆同源盒基因对斑马鱼光感受器细胞发育的影响

目的 观察斑马鱼受精卵CRX基因表达下调后，视网膜光感受器细胞外节盘的发育和视蛋白的表达。方法 实验研究。斑马鱼受精卵内显微注射CRX-寡核苷酸，使CRX基因的表达下降。通过眼球的组织学切片、电镜标本和视蛋白RNA探针的原位杂交观察光感受器细胞以及外节盘的发育和视蛋白的表达。结果 视网膜组织学观察，CRX组与对照组、空白组比较，视网膜和光感受器细胞的发育都没有明显差别。电镜观察，对照组和空白组光感受器细胞都有外节盘形成，但是CRX组未发现明显的外节盘结构。对照组和空白组斑马鱼均可在鼻侧视网膜区域观察到视紫红质（rhodopsin，Rho），视锥细胞蓝色视蛋白（SWS1）和紫外线视蛋白（SWS2）3种视蛋白的表达，CRX组3种视蛋白的表达明显减少。结论 CRX基因影响斑马鱼光感受器细胞外节盘的发育和视蛋白的表达。

HOXA10及其下游基因Emx2、整合素β3与子宫内膜容受性

同源框基因HOXA10是多基因家族的转录调节基因之一,在决定子宫内膜容受性方面起主导作用,主要参与胚胎着床控制及内膜蜕膜化。研究发现,该机制可能与内皮素A型受体、锌指转录因子9、γ-氨基丁酸pi受体、3-磷酸甘油酸酯脱氢酶、钙蛋白酶5、香烟烟雾提取物、p300/CBP相关因子、色氨酸2和3-双加氧酶调控有关。整合素β3及Emx2是HOXA10调控的下游基因,在月经周期分泌期,HOXA10上调,抑制子宫内膜细胞Emx2表达,而激活整合素β3表达,在胚胎着床及基质细胞蜕膜化过程中发挥重要作用。HOXA10调控紊乱可导致不孕。

配对相关同源框-1蛋白在胆囊癌组织中的表达及意义

目的:探讨配对相关同源框-1蛋白(Prrx-1)在胆囊癌组织中的表达及意义。方法:用免疫组化方法测定Prrx-1在45例胆囊癌及35例胆囊良性病变组织中的表达情况,并分析Prrx-1和胆囊癌临床病理特征之间的关系。结果:Prrx-1在胆囊癌组织中表达率为55.6%(25/45),而在胆囊良性病变组织中的表达率5.7%(2/35),两者差异有统计学意义(χ2=21.87,P<0.05)。统计分析显示,Prrx-1表达与胆囊癌的组织分化程度、临床分期有关(P<0.05),而与胆囊癌患者的年龄、性别及胆囊癌的组织学类型无关(均P>0.05)。结论:Prrx-1在胆囊癌组织中表达增高,其表达可能在胆囊癌的发生、发展中起重要作用。

双酚A作用机制的研究进展

双酚A(bisphenol A,BPA)是一种化工原料,对人体内分泌有一定干扰作用。研究表明,长期暴露于BPA可能对人体产生不良影响。目前对BPA作用机制的研究主要集中于受体[雌激素受体(ER)、雌激素受体相关受体(ERR)、雄激素受体(AR)、糖皮质激素受体(GR)、甲状腺激素受体(TR)]、基因[同源盒基因(HOXA10、HSP70)]、细胞因子[白细胞介素(IL-4、IL-10)、干扰素γ(IFN-γ)等]和信号通路(Fas/FasL信号通路、线粒体信号通路)对生殖系统的影响等。最近研究发现,BPA可与其他一些物质产生相互作用,如BPA与维生素C联合应用的肾脏氧化损伤,应加强对BPA与其他物质相互作用的研究。

ZHX3基因沉默对BMSCs中成骨相关因子表达的影响

目的探讨锌指蛋白和同源框3(ZHX3)基因沉默对骨髓间充质干细胞(BMSCs)中smad3、smad4、RUNX2表达的影响。方法构建ZHX3低表达慢病毒载体并转染大鼠BMSCs(ZHX3沉默组),同时设空载病毒转染BMSCs(载体对照组)及不做任何处理的BMSCs(空白对照组)。荧光显微镜下测定细胞转染率并采用免疫印迹技术鉴定转染是否成功;采用免疫荧光化学和免疫印迹技术定性定量检测ZHX3沉默时smad3、smad4、RUNX2表达情况。结果(1)复苏培养的细胞具有BMSCs表型。(2)转染后,ZHX3沉默组和载体对照组均表达绿色荧光,空白对照组不表达荧光,且沉默组ZHX3基因表达显著低于载体对照组。(3)免疫荧光结果显示,smad3、smad4的阳性表达位于细胞核和细胞质,RUNX2的阳性表达主要定位于细胞核。3组细胞均可见阳性表达细胞,且空白对照组与载体对照组之间荧光强度未见显著差异,但ZHX3基因沉默组的荧光强度显著低于2个对照组。(4)免疫印迹检测smad3、smad4、RUNX2的条带于空白对照组和载体对照组中无显著差异,但均显著高于ZHX3沉默组(P<0.05)。结论ZHX3基因沉默后BMSCs体外成骨能力延迟,可能通过下调smad3、smad4、RUNX2来发挥作用。

Capicua在肿瘤中的研究进展

Capicua(CIC)是一种在生物进化过程中高度保守的高迁移率族蛋白(high mobility group-box,HMG-box)转录因子,可特异性识别T(G/C)AATG(A/G)A序列,并抑制靶基因的表达。作为受体酪氨酸激酶(RTK)信号通路的下游效应因子,CIC可参与多种发育决定。CIC突变以及染色体易位相关的CIC基因融合可造成多种人类疾病,且与肿瘤关系尤为密切,如少突胶质瘤、肺癌和尤文肉瘤等。本课题组现就CIC在肿瘤的最新研究进展作一综述,揭示其在信号传导、肿瘤发生及新型治疗中的重要作用。

circRNA-ZNF532、circRNA-HIPK3与糖尿病视网膜病变的相关性研究

目的探讨环状RNA(circRNA)-锌指蛋白532(ZNF532)、circRNA-同源域相互作用蛋白激酶3(HIPK3)与糖尿病视网膜病变(DR)的相关性。方法纳入109例DR患者(DR组)、110例单纯糖尿病患者(DM组)和65例健康体检志愿者(对照组)。实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测血清circRNA-ZNF532、circRNA-HIPK3表达,酶联免疫吸附试验检测血清血管内皮生长因子(VEGF)、白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-6水平。Pearson分析DR患者血清circRNA-ZNF532、circRNA-HIPK3表达与血清VEGF、IL-1β、TNF-α、IL-6水平相关性。单因素和多因素Logistic回归分析DR危险因素,受试者工作特征(ROC)曲线分析circRNA-ZNF532、circRNA-HIPK3诊断DR的价值。结果DR组血清circRNA-ZNF532、circRNA-HIPK3表达以及VEGF、IL-1β、TNF-α、IL-6水平高于DM组和对照组(P<0.05)。DR组血清circRNA-ZNF532、circRNA-HIPK3表达与VEGF、IL-1β、TNF-α、IL-6水平均呈正相关(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示高水平circRNA-ZNF532、circRNA-HIPK3及VEGF是糖尿病患者发生DR的独立危险因素(P<0.05)。三者诊断糖尿病患者发生DR的曲线下面积分别为0.736、0.740和0.864,联合诊断高于单独诊断(P<0.05)。结论糖尿病患者血清中circRNA-ZNF532、circRNA-HIPK3表达上调与DR发生有关,两者可以作为DR辅助诊断的潜在指标。

蔓荆子黄素调控miR-378/PRRX1轴对胃癌生物学行为的影响

目的探究蔓荆子黄素(Cas)对胃癌(GC)SGC-7901细胞增殖、侵袭、迁移及微小RNA-378(miR-378)/配对相关同源框1(PRRX1)轴的影响。方法不同浓度Cas(0、5、10、20、40、80μmol/L)处理SGC-7901细胞48 h。将对数生长期的SGC-7901细胞分为:对照组、Cas低浓度组(10μmol/L)、Cas中浓度组(20μmol/L)、Cas高浓度组(40μmol/L)、Cas高浓度+miR-378小干扰RNA(siRNA)组(40μmol/L Cas+miR-378 siRNA)、Cas高浓度+PRRX1组(40μmol/L Cas+PRRX1过表达质粒)、Cas高浓度+miR-378 siRNA+PRRX1组(40μmol/L Cas+miR-378 siRNA+PRRX1过表达质粒)。MTT法、集落形成实验、流式细胞术、Transwell小室、划痕实验分别测定各组SGC-7901细胞活力、集落形成数量、凋亡率、侵袭及迁移能力;qPCR、蛋白印迹实验分别检测SGC-7901细胞miR-378、PRRX1蛋白表达水平;双萤光素酶实验验证miR-378和PRRX1靶向关系;体内异种移植SGC-7901细胞建立裸鼠移植瘤模型,验证Cas的抗癌活性及对miR-378表达的影响。结果Cas 10、20、40、80μmol/L组SGC-7901细胞活力呈浓度依赖性降低(P<0.05),选取10、20、40μmol/L的Cas作为后续研究浓度。与对照组相比,Cas低、中、高浓度组SGC-7901细胞活力、集落形成数量、侵袭细胞数量、划痕愈合率、PRRX1蛋白表达水平依次降低(P<0.05),细胞凋亡率和miR-378表达水平依次升高(P<0.05);与Cas高浓度组相比,Cas高浓度+miR-378 siRNA组和Cas高浓度+PRRX1组SGC-7901细胞活力、集落形成数量、侵袭细胞数量、划痕愈合率、PRRX1蛋白表达水平升高,细胞凋亡率降低(P<0.05),Cas高浓度+miR-378 siRNA组SGC-7901细胞miR-378表达水平降低(P<0.05);与Cas高浓度+miR-378 siRNA组相比,Cas高浓度+PRRX1组SGC-7901细胞miR-378表达水平升高(P<0.05);与Cas高浓度+miR-378 siRNA组、Cas高浓度+PRRX1组相比,Cas高浓度+miR-378 siRNA+PRRX1组SGC-7901细胞活力、集落形成数量、侵袭细胞数量、划痕愈合率、PRRX1蛋白表达水平升高(P<0.05),细胞凋亡率降低(P<0.05)。在SGC-7901细胞中,miR-378可靶向调控PRRX1表达;Cas可抑制体内裸鼠移植瘤生长并促进miR-378表达(P<0.05)。结论Cas可能通过调控miR-378/PRRX1轴抑制SGC-7901细胞增殖、侵袭和迁移。

p38丝裂原活化蛋白激酶信号转导通路在诱导Barrett食管发生中的作用

目的探讨脱氧胆酸在Barrett食管发生中的作用。方法用无血清的角朊细胞培养基体外培养人正常食管黏膜上皮细胞，应用不同浓度的脱氧胆酸及p38丝裂原活化蛋白激酶特异抑制剂SB203580干预细胞培养，用Western印迹法检测总p38、磷酸化p38和同源异型框转录因子（CDX2）蛋白的表达变化，评估磷酸化p38和CDX2表达变化的相关性。多组均数比较采用单因素方差分析，两两比较采用LSD法。结果Western印迹分析显示，培养24h后与对照组（磷酸化p38为13．7％±1.0％、CDX2蛋白为0）相比，随着脱氧胆酸浓度的逐渐增高，磷酸化p38的水平和CDX2蛋白的表达量逐渐增多，在500umol／L时均达最高水平（分别为44．0％±1．7％和8．59±1．25），差异有统计学意义（P〈0．05）。应用SB203580预处理2h后，再用含500umol／L脱氧胆酸的培养基培养24h，磷酸化p38的水平（28．3％±2．2％）和CDX2蛋白的表达量（0．94±0．13）较脱氧胆酸组（分别为50．5％±9．5％和2．31±0．41）均下降。结论脱氧胆酸可以诱导人正常食管黏膜上皮细胞CDX2表达，且与p38的活化有关，p38的磷酸化激活可能参与了Barrett食管的发生。

微小RNA对子宫内膜容受性影响的研究现状

子宫内膜容受性(ER)是子宫内膜可接受胚胎着床的综合状态,也是胚胎成功着床的关键。微小RNA(miRNA)作为一种非编码RNA,在转录后水平发挥对mRNA及下游蛋白的调节作用。ER缺陷患者的miRNA及靶基因表达,与健康育龄女性存在差异,提示miRNA在ER调节方面发挥一定作用。既往研究结果提示,miRNA可以成为ER评估指标及潜在治疗靶点。笔者拟就miRNA参与子宫内膜蜕膜化及其影响胚胎植入的子宫内膜信号通路,影响ER其他相关分子等的最新研究现状进行阐述,旨在为miRNA评估ER的潜力提供参考。

HOXA10基因在子宫内膜异位症患者在位及异位子宫内膜组织中的表达及其意义

目的探讨HOXAl0基因在子宫内膜异位症（内异症）患者在位及异位内膜组织中的表达水平及其临床意义。方法选取2009年1月至2010年8月于佛山市妇幼保健院因内异症行腹腔镜手术治疗的患者30例，留取宫腔内膜组织（内异症在位内膜组）和异位内膜组织（内异症异位内膜组）；同期因卵巢囊肿及输卵管因素不孕行腹腔镜手术治疗患者30例为对照组，留取宫腔内正常内膜组织。分别采用实时荧光定量PCR技术、免疫组化法和蛋白印迹法检测各组内膜组织中HOXAl0mRNA及蛋白表达水平。结果内异症在位内膜组HOXAl0mRNA及蛋白表达水平分别为0．614-0．07和0．47±0．05，内异症异位内膜组分别为0．644-0．06和0．504-0．05，对照组分别为1．224-0．14和1．424-0．14；内异症在位和异位内膜HOXAl0mRNA及蛋白表达水平明显低于正常内膜中的表达水平，差异均有统计学意义（P均〈0．01）；内异症在位和异位内膜组的HOXAl0mRNA及蛋白表达水平比较，差异则无统计学意义（P〉0．05）。免疫组化法检测内异症在位和异位内膜组织的问质和腺细胞中HOXAl0表达均降低。结论HOXAl0基因在内异症在位及异位内膜组织中均呈低表达状态，可能与内异症的发病和不孕有关。

PROX-1与Ki-67在胆管癌中的表达及意义

目的:探讨PROX-1及Ki-67在胆管癌中表达及意义。方法:用免疫组化法检测46例肝门部胆管癌患者(伴淋巴结转移29例,无淋巴结转移17例)癌组织与23例胆管良性病变患者胆管组织中PROX-1及Ki-67的表达,分析PROX-1及Ki-67的表达与胆管癌淋巴转移及其他临床病理因素的关系。结果:PROX-1与Ki-67两者的阳性表达率在良性病变胆管组织、无淋巴结转移胆管癌组织、伴淋巴结转移胆管组织中依次增高,差异均有统计学意义(均P<0.05);两者的阳性表达率均与胆管癌的分化程度有关(均P<0.05),而与患者的性别、年龄无关(P>0.05);胆管癌组织中PROX-1与Ki-67表达正相关(r=0.831,P<0.05)。结论:PROX-1与Ki-67的高表达与胆管癌的恶性生物学行为密切相关,且两者表达量之间存在关联性。