miR-92a-3p靶向同源盒蛋白13对高糖诱导的肾小球系膜细胞损伤的影响

目的探讨miR-92a-3p靶向同源盒蛋白13(Homeobox protein 13,HOXA13)对高糖诱导的肾小球系膜细胞损伤的影响及其作用机制。方法实验分组:对照组、高糖组、anti-miR-NC+高糖组、antimiR-92a-3p+高糖组、pcDNA+高糖组、pcDNA-HOXA13+高糖组、anti-miR-92a-3p+si-NC+高糖组、anti-miR-92a-3p+si-HOXA13+高糖组;qRT-PCR法与Western blot法分别检测miR-92a-3p、HOXA13的表达量;流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验检测miR-92a-3p与HOXA13的靶向关系;Western blot法检测Cleaved-caspase-3、Cleaved-caspase-12蛋白表达量。结果与对照组比较,高糖组miR-92a-3p的表达量升高(P<0.05),HOXA13 mRNA及蛋白水平降低(P<0.05),细胞凋亡率和Cleaved-caspase-3、Cleaved-caspase-12蛋白水平升高(P<0.05);转染anti-miR-92a-3p或转染pcDNA-HOXA13后,细胞凋亡率和Cleaved-caspase-3、Cleaved-caspase-12蛋白水平降低(P<0.05);HOXA13是miR-92a-3p的靶基因;共转染anti-miR-92a-3p和si-HOXA13可减弱anti-miR-92a-3p对高糖诱导的肾小球系膜细胞凋亡的抑制作用(P<0.05)。结论敲低miR-92a-3p可通过靶向调控HOXA13表达抑制细胞凋亡从而减轻高糖诱导的肾小球系膜细胞损伤。

同源盒基因A13降低胃癌细胞对5-氟尿嘧啶的敏感性及其机制研究

目的探讨同源盒基因A13(HOXA13)表达水平对胃癌细胞5-氟尿嘧啶(5-FU)敏感性的影响及其可能的机制。方法以HOXA13过表达与敲减稳转胃癌细胞株为研究工具,通过药物敏感实验检测HOXA13表达水平改变后,胃癌细胞对5-FU的敏感性有无改变。CCK-8、EdU实验检测HOXA13表达改变后对5-FU细胞增殖抑制作用的影响;流式细胞术检测HOXA13表达下调后对5-FU诱导胃癌细胞凋亡的影响;二代测序探讨HOXA13介导胃癌5-FU耐药的潜在机制。结果HOXA13表达上调后,胃癌细胞5-FU的IC25和IC50升高;下调HOXA13表达能够促进5-FU对胃癌细胞增殖的抑制作用,并促进5-FU诱导的细胞凋亡。ABC转运蛋白通路的激活可能是HOXA13引起胃癌细胞5-FU耐药的潜在机制。结论HOXA13表达异常升高后能够削弱5-FU对胃癌细胞增殖的抑制作用,引起胃癌细胞对5-FU耐药,ABC转运蛋白可能作为重要下游效应分子参与该过程。

miR-214-5p调控HOXA13抑制高糖诱导的肾小球系膜细胞炎症反应及纤维化

目的探讨miR-214-5p通过调节同源盒蛋白(HOXA)13表达抑制高糖诱导的HMC细胞炎症反应和纤维化的作用机制。方法采用RT-qPCR检测高糖干预的HMC细胞中miR-214-5p、细胞间黏附分子(ICAM)-1、骨形态发生蛋白(BMP)-7和纤维连接蛋白(FN)表达。将miR-214-5p抑制剂(inhibitors)转染至HMC细胞后以30 mmol/L D-葡萄糖处理细胞,Western印迹检测细胞中ICAM-1、BMP-7和FN蛋白表达。采用Targetscan在线预测、双荧光素酶报告基因实验和Western印迹实验验证miR-214-5p与HOXA13的靶向关系。Western印迹检测过表达HOXA13对HMC细胞中ICAM-1、BMP-7和FN蛋白表达的影响。共转染miR-214-5p inhibitors和HOXA13 siRNA,检测细胞中TGF-β1蛋白表达。结果与5 mmol/L D-葡萄糖干预的HMC细胞相比,高糖诱导的细胞中miR-214-5p mRNA、ICAM-1和FN蛋白表达上调、BMP-7蛋白表达下调。在HMC细胞中抑制miR-214-5p或过表达HOXA13细胞中miR-214-5p mRNA、ICAM-1和FN蛋白表达水平降低而BMP-7蛋白表达水平升高。Targetscan在线预测、双荧光素酶报告基因实验和Western印迹实验结果显示,miR-214-5p能够靶向调控HOXA13蛋白表达。在高糖诱导的HMC细胞中抑制HOXA13表达可逆转miR-214-5p对TGF-β1蛋白表达的抑制作用。结论miR-214-5p能够通过靶向HOXA13调节相关蛋白表达,抑制高糖诱导的HMC细胞炎症反应和纤维化。

同源盒基因 A13在清蛋白超载所致肾小管上皮细胞间充质转分化中的作用

目的：探讨核转录因子同源盒基因 A13（HOXA13）基因在清蛋白（HSA）诱导的肾小管上皮细胞（HKC）间充质转分化中的作用。方法采用 Western blot 印迹分析检测不同水平 HSA（0 g/ L、1 g/ L、5 g/ L、10 g/ L、20 g/ L、30 g/ L）刺激 HKC 48 h，以及20 g/ L HSA 刺激 HKC 不同时间（0 h、12 h、24 h、48 h、72 h）后， HKC 细胞角蛋白（CK）、波形蛋白（Vimentin）和 HOXA13蛋白的表达情况。采用脂质体转染技术上调 HKC 细胞 HOXA13表达后，观察 HSA 刺激后 CK、Vimentin 表达水平的变化。结果1. HSA 以质量浓度和时间依赖方式下调 CK 表达，同时上调 Vimentin 表达。2. HSA 以质量浓度和时间依赖方式下调 HOXA13表达，HSA 水平为5 g/ L、10 g/ L、20 g/ L、30 g/ L 时，HOXA13水平分别为未刺激前的58.24％（ P ＝0.005）、44.73％（ P ＝0.003）、38.40％（P ＝0.033）和24.83％（P ＝0.011）；作用24 h、48 h、72 h 时，HOXA13水平分别为未刺激前的52.00％（P ＝0.023）、46.83％（P ＝0.008）、35.10％（P ＝0.034）。3. HOXA13蛋白表达与 CK 蛋白表达呈正相关（r ＝0.86，P ＝0.005），与 Vimentin 蛋白表达呈负相关（r ＝-0.94，P ＝0.002）。4.基因转染上调 HKC 细胞HOXA13表达后，HSA 下调 CK 表达和上调 Vimentin 表达作用受到明显抑制，抑制程度分别为360.00％（P ＝0.005）和35.34％（P ＝0.005）。结论 HSA 超载所致 HKC 间充质转分化可能通过 HOXA13途径起作用。

同源盒基因A13转染对肾小管上皮细胞间充质转化和骨形成蛋白7表达的影响

目的探讨转染同源盒基因A13(HOXA13)对人血清白蛋白(HSA)诱导的人肾小管上皮细胞(HKC)间充质转化(EMT)和骨形成蛋白7(BMP-7)表达的影响。方法体外培养的HKC细胞株经人血清白蛋白(20 mg/m L)作用48 h后,采用免疫印迹法检测HKC细胞角蛋白(CK)、波形蛋白(vimentin)和HOXA13蛋白的表达。应用脂质体转染技术上调HKC细胞HOXA13表达,观察HOXA13不同表达水平对人血清白蛋白超载诱导CK、vimentin、BMP-7表达改变的影响。结果 20 mg/m L HSA刺激HKC细胞48 h后,HKC细胞出现EMT样改变:CK表达下降(P<0.01)、vimentin表达增高(P<0.01);HSA超载同时使HKC细胞内HOXA13、BMP-7表达下降。HOXA13转染上调HKC细胞内HOXA13表达后,显著抑制了HSA超载诱导的EMT发生(P<0.05)和BMP-7表达的下降(P<0.05)。结论转染HOXA13可拮抗白蛋白超载诱导HKC细胞发生EMT的作用,这种作用可能与HOXA13上调BMP-7表达有关。

结直肠癌组织中同源异形盒基因B13与c-myc的表达及意义

目的:探讨同源异形盒基因B13(HOXB13)和c-myc在结直肠癌中表达的变化及意义。方法:用RT-PCR法和Western blot法检测54例结直肠癌患者癌组织及相应癌旁组织中HOXB13与c-myc的表达,并分析两者表达与结直肠癌的临床病理特征的关系。结果:结直肠癌组织中的HOXB13 m RNA和蛋白的表达明显低于癌旁正常结直肠组织,而c-myc m RNA和蛋白的表达明显高于癌旁正常结直肠组织(均P<0.05);两者的表达均与淋巴转移以及TNM分期有关(均P<0.05);结直肠组织中HOXB13蛋白与c-myc蛋白的表达呈负相关(r=-0.572,P<0.001)。结论:HOXB13的表达降低可能促进了原癌基因c-myc的表达,从而促进结直肠癌的发生、发展和转移。

同源盒基因家族在胃癌中差异表达的研究

目的观察在胃癌中同源盒（HOX）基因家族表达，探讨两者的相关性。方法采用AffymetrixU133plus2．0人类全基因组表达谱芯片分析在胃癌及其对应正常黏膜中HOX基因家族的差异表达，并行统计学分析。结果HOXA基因家族中HOXA10、HOXA13在胃癌组织中表达明显升高，高表达率均为91．7％（11／12），其TvsNSignal LogRatio值分别为0．4、5．4、4．2、6．1、7．1、5．2、3．4、1．9、1．6、3．0、3．5、3．3和1、4．8、0．3、6．9、4．9、3．5、4．2、4．3、5．4、4．1、2．2、2．8。I司时HOX基因家族中还有多个基因表达上调，其中HOXA家族中HOXAl、HOXA4在胃癌表达升高，表达率均为66．7％（8／12）；HOXB家族中HOXB7在胃癌中表达升高，表达率为75．0％（9／12）；HOXC家族中HOXCl0也表达升高，表达率为58．3％（7／12）；而HOXC5和HOXC8则在肿瘤中呈现低表达，表达率分别为66．7％（8／12）和58．3％（7／12）。结论HOX家族中多个基因在胃癌中差异表达，提示该基因家族与胃癌发生发展密切相关。

FTO调控HOXB13的m6A甲基化修饰促进黑色素瘤侵袭与增殖

目的探讨脂肪肥胖相关蛋白(obesity-associated protein,FTO)和人同源盒蛋白HOXB13(homeobox B13,HOXB13)在皮肤黑色素瘤(cutaneous malignant melanoma,CMM)侵袭和增殖中的作用。方法自2019年1月至2020年12月,辽宁省人民医院皮肤科通过RT-PCR检测CMM细胞FTO和HOXB13表达,TCGA分析FTO和HOXB13表达及相关性,免疫沉淀检测HOXB13的6-甲基腺嘌呤(n6-methyladenosine,m6A)表达变化,CCK-8和Transwell分析FTO和HOXB13在CMM细胞增殖和侵袭中的生物学作用。结果与正常人表皮黑色素细胞相比,CMM细胞中FTO和HOXB13的表达水平均明显升高(P<0.05);FTO调控HOXB13的m6A甲基化水平。CMM中细胞敲降FTO后细胞增殖和侵袭能力明显减弱(P<0.05),而过表达HOXB13后增殖和侵袭能力明显恢复(P<0.05);FTO对CMM恶性表型的影响是通过HOXB13实现的。结论FTO可通过去除HOXB13的m6A甲基化修饰,上调HOXB13的表达促进CMM细胞的增殖和侵袭。