变形链球菌luxS基因同源重组克隆载体的构建实验

目的构建luxS基因的同源重组克隆载体以备将来进行luxS基因同源重组knockout突变株的研究。方法利用高保真的pfuDNA聚合酶,通过嵌套式PCR的方法,分别扩增出变形链球菌luxS基因的上下游片段(Xup,Xdn)以及大肠杆菌pH1+质粒的卡那霉素抗性基因片段(Kana),依次采用相应的双酶切反应将这些片段连接入噬菌体载体pBluescriptS(K+)Phagemids,以构建目的质粒Xukd-pbsk重组载体。结果经酶切鉴定目的质粒各片段插入无误,插入片段的测序报告也显示碱基无错配,含目的质粒的菌株可在含30mg/L卡那霉素的LB培养基内生长良好,证明插入的卡那霉素抗性基因体外表达良好。结论本研究构建的变形链球菌luxS基因同源重组克隆载体正确,可用于今后对于变形链球菌luxS基因突变株构建的研究。