新生动物同种主动脉带瓣管道移植物α-actin和PCNA的免疫组织化学研究

目的 应用免疫组织化学方法观察新生动物的同种主动脉带瓣管道 (VAHC)移植后平滑肌肌动蛋白 (α- actin)和增殖细胞核抗原 (PCNA)表达的变化 .方法 体质量 15 0～2 0 0 g的新西兰兔 2 4只作为 VAHC的供体 ,0 .9～ 1.2及2 .1～ 2 .9kg的幼兔和成年兔各 12只为受体 .建立新生兔的VAHC移植模型 ,术后 1和 6 mo分别取材作组织学检查和免疫组织化学染色 ,观察 VAHC的组织结构、α- actin及 PCNA阳性表达情况并作计算机图像分析 .结果 组织学检查显示VAHC血管壁三层结构存在 ,内膜及中层均增厚 ,管壁有少量单核细胞及淋巴细胞浸润 ,植入成年兔体内 6 mo的变化最为明显 .免疫组化染色 α- actin在各组 VAHC血管壁中层均呈阳性表达 .与对照组相比 , ～ 组血管壁中层 SMC, , 组内膜及瓣膜内皮细胞 (EC) PCNA阳性指数明显增高 (P<0 .0 5 ) , 组尤为显著 (P<0 .0 1) .图像分析结果表明 , , 组 α- actin的灰度值明显低于对照组 (P<0 .0 5 ) , ～ 组血管壁及瓣膜 PCNA阳性细胞的灰度值低于对照组 (P <0 .0 5 ) .结论 新生兔 VAHC植入幼兔及成年兔体内后的变化呈较明显的慢性排异反应征象 .

新生动物同种主动脉带瓣管道移植的组织形态学观察

目的 :观察新生动物同种主动脉带瓣管道 (VAHC)移植后的组织形态学变化。方法 :新生兔为供体 ,其VAHC抗生素灭菌后经腹膜外植入幼兔及成年兔的腹主动脉 ,术后 1个月和 6个月取材作组织形态学观察。结果 :移植的VAHC搏动良好 ,内膜光滑 ,无血栓。瓣膜无皱缩 ,交界无粘连。光镜下血管壁内膜和中层有不同程度的增厚 ,可见炎性细胞浸润。电镜下的超微结构均有所改变 ,以植入成年兔体内 6个月的VAHC最为明显 ,主要表现为血管壁平滑肌细胞增生 ,胞内细胞器少 ,内质网明显扩张 ,甚至呈空泡样改变 ,可见淋巴细胞和单核细胞浸润及钙化斑。瓣膜胶原纤维排列散乱 ,部分成纤维细胞内质网扩张 ,胞浆内有脂褐素沉积。结论 :本实验表明 ,新生动物的VAHC移植后的组织形态呈较明显的慢性排异反应征象。

新生兔同种主动脉带瓣管道移植的形态学研究

目的 :观察新生动物的同种主动脉带瓣管道 (VAHC)移植后的形态学变化。方法 :以体重 15 0～ 2 0 0 g的新西兰兔 2 4只作为 VAHC的供体 ,0 .9～ 1.2 kg的幼兔和 2 .1～ 2 .9kg的成年兔各 12只为受体 ,建立新生兔的 VAHC移植模型。术后 1个月和 6个月分别取材作大体形态测量及组织学观察。结果 :发现植入的 VAHC内膜光滑 ,无血栓 ;与植入时相比 ,各组 VAHC血管壁厚度及植入幼兔体内 6个月 VAHC长度和管径明显增加 (P<0 .0 5 ) ;与未植入的新生兔 VAHC相比 ,植入幼兔体内 6个月的 VAHC瓣叶高度、游离缘长度均增加 (P<0 .0 5 )。组织学检查显示 VAHC血管壁存在三层结构 ,内膜及中层轻度增厚 ,管壁有少量单核细胞及淋巴细胞浸润 ,植入成年兔体内 6个月的变化最为明显。结论 :新生兔的 VAHC植入幼兔体内后其血管的直径和长度、瓣叶的高度和游离缘长度可随幼兔的发育而增加 ,提示在临床上应用小的 VAHC是可行的。

两种细胞洗涤剂制备脱细胞同种生物带瓣管道支架的研究

目的 比较去氧胆酸钠(deoxycholic acid,DOA)和十二烷基硫酸钠(sodium dodecylsulphate,SDS)两种细胞洗涤剂制备脱细胞的同种生物带瓣管道(homograft bioprosthetic tube valved,HBTV)支架的效果,为体外构建组织工程瓣(tissue- engineering heart valve,TEHV)提供同种生物瓣支架材料。 方法 对同种带瓣主动脉管道和带瓣肺动脉管道,分别用含0 .5 % DOA或0 .0 3% SDS的Tris低渗缓冲液共同孵育4 8h,脱去经液氮保存、具有活性的HBTV表面的内皮细胞,固定剂固定后分别进行HE、胶原纤维和弹力纤维染色的光镜观察,以及扫描电镜观察,摄片。 结果 两种洗涤剂均完全地脱去了HBTV表面的内皮细胞,中心部位的成纤维细胞有部分存留;细胞外基质,如胶原纤维和弹力纤维等均较完整地保留下来,其形态结构与脱细胞前无明显改变。 结论 0 .0 3%～0 .1% SDS或0 .5 % DOA的低渗缓冲液对制备HBTV脱内皮细胞支架效果均较佳,有利于HBTV再内皮化时种植细胞的黏附和扩增,可进一步应用于体外构建TEHV的研究。对于脱主动脉壁的细胞,SDS浓度应增至0 .1%为佳。