同种反应性自然杀伤细胞对小鼠单倍体骨髓移植后T细胞重建的影响

目的探讨同种反应性自然杀伤(NK)细胞对小鼠单倍体骨髓移植(BMT)后T细胞重建的可能影响。方法以(C57BL/6×BALB/c)BCF1(H-2d/b)为供鼠,BALB/c(H-2d)为受鼠,鼠龄6～8周,体质量16～20 g。建立小鼠单倍体BMT模型。根据移植物不同将实验分为单纯BMT组、非同种反应性NK(non-alloNK)细胞组、同种反应性NK(allo-NK)细胞组,移植后不同时间点以外周血CD3e的表达、外周血血清白细胞介素4(IL-4)、干扰素(IFN-γ)浓度等指标评价同种反应性NK细胞对T细胞重建的可能影响。结果移植后+10 d受鼠外周血CD3e的表达allo-NK组较non-alloNK组显著增高,分别为(16.58±5.77)%、(8.64±3.60)%,差异具有统计学意义(P<0.05)。+30 d时allo-NK组IL-4的浓度显著低于单纯BMT组,分别为(9.73±2.08)pg/mL、(12.44±1.57)pg/mL,差异具有统计学意义(P<0.05)。non-alloNK组IFN-γ的浓度显著高于单纯BMT组,分别为(98.78±33.07)pg/mL、(52.15±18.87)pg/mL,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论同种反应性NK细胞用于单倍体BMT小鼠,可能促进T细胞的重建,体内诱导Th1免疫反应的偏移。

同种反应性自然杀伤细胞对小鼠单倍体相合骨髓移植后免疫重建的影响

本研究旨在探讨同种反应性自然杀伤(alloNK)细胞对小鼠单倍体相合骨髓移植(BMT)后免疫重建的影响。以(C57BL/6×BALB/c)BCF1(H-2d/b)为供鼠,BALB/c(H-2d)为受鼠,建立小鼠单倍体相合BMT模型,根据回输物不同将实验分为单纯BMT组、非同种反应性NK(non-alloNK)细胞组、alloNK细胞组。移植后2个月以胸腺组织病理、脾脏NK细胞比例、脾细胞增殖反应及脾细胞培养上清中细胞因子浓度等指标评价alloNK细胞对免疫重建的影响。结果显示,光学显微镜下各组小鼠胸腺组织病理学表现无明显差别;移植后2个月non-alloNK组小鼠脾脏NK细胞比例显著低于单纯BMT组(P<0.05);各组小鼠脾细胞体外增殖反应无明显差别;alloNK组小鼠脾细胞培养24和48 h时培养上清中干扰素-γ的浓度均显著低于其他2组(P<0.05),而各组之间白介素4水平无明显差别。结论:alloNK细胞用于单倍体BMT小鼠不损伤胸腺的结构,可能诱导Th2免疫反应的偏移。

体外诱导的同种反应性淋巴细胞输注对大鼠皮肤移植存活时间的影响

目的观察体外诱导的同种反应性淋巴细胞输注是否可以诱导大鼠皮肤移植免疫耐受,从而探索一条诱导器官移植耐受的新途径。方法以供者Lewis大鼠淋巴细胞作为刺激物,体外刺激受者BN大鼠淋巴细胞增殖,应用CFSE法检测增殖情况;以增殖后的BN大鼠淋巴细胞作为自身独特型疫苗,输注给同品系的BN大鼠,并行Lewis到BN的皮肤移植,观察皮肤移植物生存期。结果同种反应性淋巴细胞体外能够活跃增殖;同种反应性淋巴细胞输注可以显著延长皮肤移植物的存活时间(P<0.05)。结论体外诱导的同种反应性淋巴细胞输注有可能成为诱导抗原特异性免疫耐受的一种新途径。

输注体外诱导的同种反应性淋巴细胞诱导大鼠肝脏移植免疫耐受的研究

目的观察输注体外诱导的同种反应性淋巴细胞,是否可以延长大鼠移植肝脏的存活时间,从而探索一条诱导肝移植免疫耐受的新途径。方法以供者Lewis大鼠淋巴细胞作为刺激物,体外刺激受者BN大鼠淋巴细胞增殖,应用CFSE(羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯)标记法检测增殖情况;将增殖后的BN大鼠淋巴细胞经照射灭活后输注给同品系的BN大鼠,并行Lewis到BN的肝移植,观察肝移植后BN大鼠生存期。结果同种反应性淋巴细胞体外能够活跃增殖;采用同种反应性淋巴细胞输注可以显著延长肝移植大鼠的存活时间(P<0.05)。结论体外诱导的同种反应性淋巴细胞输注,有可能成为诱导抗原特异性免疫耐受的一种新途径。

NK细胞同种反应性对异基因造血干细胞移植的影响

NK细胞同种反应性主要由NK细胞上杀伤细胞免疫球蛋白样受体和其主要组织相容性抗原复合物类配体不合所引发,有望改善异基因造血干细胞移植预后,对其在异基因造血干细胞移植中的作用的深入研究有可能为供者选择标准的改进提供有益的参考。同种反应性NK细胞用于移植预处理及移植后过继免疫治疗具有良好的临床应用前景。

同种异体反应性淋巴细胞克隆疫苗回输诱导受体特异性免疫耐受研究

目的 探讨同种异体移植抗原特异性免疫耐受诱导的新途径。方法 以同种异体反应性淋巴细胞克隆在体外培养条件下大量增殖后作为自身独特性疫苗 ,体内注射免疫家兔 ,以混合淋巴细胞反应来观察免疫前和免疫后对供体淋巴细胞刺激指数 (SI)的变化。结果 同种异体反应性自身独特型淋巴细胞疫苗具有显著诱导特异性免疫应答抑制现象 ,SI值显著降低 (P <0 .0 0 5 ) ,而对卡介苗诱导的特异性免疫应答并未因独特型淋巴细胞疫苗的应用下降。结论 同种异体反应性自身独特型淋巴细胞疫苗有可能成为诱导抗原特异性免疫耐受的一种手段 。

同种异体反应性细胞与调节性T细胞在新生期诱导的小鼠移植耐受中的作用探讨

目的:初步探讨同种异体反应性T细胞克隆清除与调节性T细胞在小鼠移植耐受中的作用。方法:雌性BALB/c小鼠与雄性C57BL/6小鼠杂交一代获得F1小鼠,不同剂量的F1小鼠脾脏细胞经眶静脉输注给新生24 h C57BL/6小鼠体内诱导耐受,成年后移植F1小鼠来源的皮肤,建立不同耐受程度的小鼠移植耐受模型;耐受小鼠脾脏细胞经CFSE标记后注射到F1小鼠体内,分析耐受小鼠来源的T细胞在体内对F1抗原的增殖能力;流式细胞术、过继转移实验分析CD4+Foxp3+调节性T细胞在移植耐受和移植排斥过程中的表达。结果:C57BL/6小鼠在新生期输注F1小鼠脾脏细胞可诱导移植耐受,耐受程度与输注的脾脏细胞剂量有关,3×107个F1小鼠脾脏细胞可诱导C57BL/76小鼠长期皮肤移植耐受,1×107个细胞诱导可使移植皮肤生存时间显著延长,但在50 d内完全排斥;体内混合淋巴细胞反应实验证明,长期耐受小鼠体内的同种异体反应性T细胞被完全克隆清除,但低剂量组小鼠体内仍存在一定数量的反应性T细胞;流式细胞分析发现,高剂量和低剂量组小鼠体内的CD4+Foxp3+调节性T细胞表达与初始小鼠相比没有显著差异;同种异体反应性T细胞过继转移给耐受小鼠,移植耐受的皮肤发生排斥反应,小鼠体内的调节性T细胞表达升高。结论:小鼠的移植耐受程度与小鼠体内的同种异体反应性T细胞的克隆清除程度有关,与CD4+Foxp3+调节性T细胞的表达没有直接关系;调节细胞在移植排斥过程中表达升高,可能作为一种反馈机制参与耐受的形成。

同种CTL识别表位的抗原肽非依赖性现象

目的初步探讨细胞毒T细胞(CTL)对同种抗原的识别机制。方法用负载特定肽的T2细胞与HLA-A2阴性个体的外周血淋巴细胞(peripheral blood lymphocytes,PBL)共培养,激活同种反应性CTL,通过乳酸脱氢酶(LDH)释放法观察同种反应性CTL对不同载肽T2细胞的杀伤活性。结果用负载特定抗原肽的T2细胞诱导所获得的同种反应性CTL对负载不同抗原肽的T2细胞及空载T2细胞具有同等杀伤效应。结论同种反应性CTL对同种MHC分子的识别不依赖抗原肽。

杀伤性人工抗原提呈细胞治疗小鼠皮肤移植排斥及其对治疗鼠整体免疫功能的影响

目的:研究杀伤性人工抗原提呈细胞(Ka APC)治疗小鼠皮肤移植排斥的效果及其对治疗鼠整体免疫功能的影响。方法:利用可生物降解的聚乳酸-羟基乙酸共聚物微米球做载体,共价吸附H-2Kb抗原和anti-Fas等负性调节分子,制备针对同种反应性T细胞的特异性Ka APC,治疗以C57BL/6和BALB/c为供受对的小鼠皮肤移植排斥,并利用混合淋巴细胞培养观察治疗鼠对第三方供体的同种反应能力以及通过载瘤实验观察治疗鼠的抗肿瘤能力等,以论证Ka APC治疗对机体整体免疫功能的影响,帮助筛选有效治疗方案。结果:成功制备Ka APC,FACS验证其有正确的表型;Ka APC输注使皮肤移植物的存活时间明显延长,P<0.000 1,但并未显著损伤治疗鼠T细胞对第三方供体鼠脾细胞的同种增殖能力,也并未显著损伤治疗鼠的抗肿瘤能力。结论:Ka APC可以抑制小鼠皮肤移植排斥并对治疗鼠的整体免疫功能无明显损伤。

通过Fas-FasL途径体外清除小鼠同种异体反应性T细胞

目的 通过Fas Fas配体 (FasL)途径清除小鼠同种异体反应性T细胞 (ARTC) ,为减轻异基因骨髓移植 (allo BMT)后的移植物抗宿主病探索新的手段。方法 用磁性细胞分离系统分离BALB c小鼠 (H 2 d)Sca 1+早期造血细胞 (HC) ,然后借助逆转录病毒基因转移技术对其转染外源小鼠FasL(mFasL)cDNA基因 ;扩增 1周后与异基因BAC小鼠 (H 2 d ×b)脾细胞进行单向混合淋巴细胞培养(OWMLC) 6d ,观察处理后的BAC小鼠脾细胞对Na251 CrO4标记的BALB c小鼠脾细胞的杀伤作用。结果 成功分离出BALB c小鼠Sca 1+HC ,纯度为 (89.0± 6 .1) %。BAC小鼠脾细胞与转染外源mFasL的BALB cHC以 1∶5比例共培养 6d后 ,对BALB c源脾细胞杀伤率在不同效、靶比例时均呈显著降低 (P<0 .0 1)。结论 体外反应中 ,转染外源mFasLcDNA并高表达的早期HC可清除针对自身MHC抗原的ARTC。

同种异体反应性淋巴细胞克隆疫苗回输诱导受体特异性免疫耐受的研究

目的 探讨同种异体移植抗原特异性免疫耐受诱导的新途径 ,以达到心肺移植长期存活的目的。方法 以同种异体反应性淋巴细胞克隆在体外培养条件下大量增殖后 ,作为自身独特性疫苗 ,体内注射免疫家兔 ,以混合淋巴细胞反应来观察免疫前和免疫后对供体淋巴细胞刺激指数 (SI)的变化。结果 同种异体反应性自身独特型淋巴细胞疫苗具有显著诱导特异性免疫应答移植现象 ,SI值显著降低 (P <0 .0 5) ,而对卡介苗诱导的特异性免疫应答并未因独特型淋巴细胞疫苗的应用而下降。结论 同种异体反应性自身独特型淋巴细胞疫苗有可能成为诱导抗原特异性免疫耐受的一种手段。

自身肽结合于HLA-A2分子上能够在体外诱导抗原肽特异性的同种T细胞

在同种反应性T细胞(同种T细胞)识别的配体中,抗原肽的作用是免疫学长期争论的问题,即同种T细胞识别是否具有抗原肽特异性.为了证实通过长期混合淋巴细胞培养(LTMLC)方法能够诱生抗原肽/MHC复合物(pMHC)特异性的同种T细胞,本研究利用仅表达HLA-A2,TAP缺陷的T2细胞,将酪氨酸激酶来源的自身抗原肽(Tyr369-377)和EB病毒来源的病毒抗原肽(LMP2A426-434)分别加载到T2细胞上,使T2细胞提呈单一的T细胞抗原识别表位,并且选择4个HLA-A2阳性(HLA-A2+ve)与4个HLA-A2阴性(HLA-A2-ve)个体的PBL样本,与加载上述抗原肽的T2细胞混合培养.在此实验系统中,HLA-A2+ve PBL与加载病毒抗原肽的T2细胞(T2/LMP)混合培养代表T细胞对普通抗原的反应,而HLA-A2-ve PBL与加载自身抗原肽的T2细胞(T2/Tyr)混合培养则为T细胞对同种抗原的反应.利用特异性pMHC四聚体染色与特异性细胞毒试验检测LTMLC诱生CTL的特异性,其中利用HIV抗原肽(Gag77-85)作为对照.结果显示:(ⅰ)T2/LMP与HLA-A2+ve个体的PBL混合培养产生CTL(CTL-T2/LMP),CTL-T2/LMP对T2/LMP的杀伤显著高于对照T2/HIV的杀伤(26.52%±3.72%vs7.01%±0.87%,P<0.001);LMP四聚体对CTL-T2/LMP染色的阳性细胞数显著高于对照HIV四聚体(0.98%±0.33%vs0.05%±0.01%,P=0.0014);(ⅱ)加载自身抗原肽的T2细胞(T2/Tyr)可诱导HLA-A2-ve个体的PBL产生CTL(CTL-T2/Tyr),CTL-T2/Tyr对T2/Tyr的杀伤显著高于对T2/HIV的杀伤(28.07%±2.58%vs6.87±1.01%,P<0.001);Tyr四聚体对CTL-T2/Tyr染色的阳性细胞数显著高于HIV四聚体(0.88%±0.3%vs0.06±0.03%,P=0.0018).结果说明:结合于自身MHC分子上的病毒抗原肽与结合于同种MHC分子上的自身抗原肽都能诱导产生抗原肽特异性的CTL;在LTMLC诱生的同种CTL中,有相当数量的CTL具有pMHC特异性,这些同种CTL的识别机制与普通抗原反应性CTL一样,识别的对象也是特异性的pMHC.支持了同种抗原的pMHC种类繁多造成同种T细胞反应强度极高的假说.利用LTMLC诱生抗原肽特异性同种T细胞方法对于T细胞过继治疗具有潜在的应用价值.

NK细胞与造血干细胞移植

造血干细胞移植能重建机体造血和免疫功能,治疗白血病和再生障碍性贫血等某些恶性血液病。现认为,在决定移植术预后的诸因素中,除供、受者间组织相容性抗原的吻合度外,NK细胞表面免疫球蛋白样受体(KIR)介导的NK细胞同种反应性在清除白血病细胞(GVLR)、减弱移植物抗宿主反应(GVHR)和延长移植物存活时间中均起着重要的作用,可作为筛选供、受者的有力依据。本文拟对这一领域的研究进展作一综述。

NK细胞对异基因骨髓移植中移植排斥和造血及免疫重建的影响

本研究探讨自然杀伤(NK)细胞在小鼠异基因骨髓移植(allo-BMT)中对移植排斥、造血及免疫重建的影响。以C57BL/6(H-2b)小鼠为供鼠、BALB/c(H-2d)小鼠为受鼠,分别在致死剂量和非致死剂量(≤7.0Gy)全身照射(TBI)的预处理条件下进行allo-BMT,移植同时输注供鼠外周T细胞和(或)NK细胞,移植后不同时间检测受鼠外周血白细胞、骨髓CD34+细胞数和外周血淋巴细胞中CD3+细胞、CD19+细胞及供鼠来源的H-2Kb+细胞表达的百分率,并对不同移植组的存活率、植入与排斥、造血及免疫重建进行比较。结果表明:在致死剂量TBI预处理的移植中,输注NK细胞与不输注NK细胞的移植组比较,存活率显著增高(60天存活率为70%vs0.0%);白细胞数、CD19+细胞表达及骨髓CD34+细胞数恢复快;H-2Kb+细胞的表达水平高[(86.68±4.45)%vs(4·68±0·32)%]。移植后28天输注NK细胞组CD3+细胞表达水平明显低于不输注NK细胞组[(33.69±3.36)%vs(50.40±5·06)%,p<0.01],移植后60天两组比较差异无显著性(p>0.05)。在非致死剂量TBI预处理的移植中,移植后30天,异基因骨髓移植组H-2Kb+细胞表达率明显下降,移植后60天已下降至移植前水平;而输注高浓度和低浓度NK细胞的两组在移植后60天仍能检测到80%以上的H-2b+细胞表达。结论:在小鼠allo-BMT中,同种异基因反应性NK细胞可以抑制移植排斥,提高造血干细胞的植入水平,促进造血及免疫重建并增加移植受鼠的生存率。

NK细胞在小鼠异基因骨髓移植中的作用

目的研究自然杀伤(NK)细胞在异基因骨髓移植中对移植物抗宿主病(GVHD)、移植排斥、骨髓植入及造血重建的影响。方法以近交系小鼠C57/6j(H-2b)为供鼠、BALB/c(H-2d)为受鼠,在移植物中增加供者的外周T细胞和/或NK细胞进行异基因骨髓移植,用流式细胞仪检测受鼠的CD34+细胞计数和H-2Kb+细胞表达水平,血细胞自动分析仪检测外周血白细胞计数,并结合临床表现和病理检查,比较不同移植组的存活率、GVHD、植入水平及造血重建等。结果增加NK细胞组的小鼠存活率显著大于不增加NK细胞组,小鼠出现GVHD的数量少、程度轻,外周血白细胞及骨髓CD34+细胞恢复快、H-2Kb+细胞表达水平高。结论NK细胞抑制小鼠异基因骨髓移植中的GVHD和移植排斥,促进骨髓植入及造血重建。

记忆T细胞在器官移植背景中的作用研究进展

免疫记忆是高等动物获得性免疫的一个重要特征。自然状态下．人类很少遇到同种抗原或移植抗原．然而体内却或多或少存在一定数量同种反应性的记忆性T细胞。

自然杀伤细胞对异基因骨髓移植中移植排斥和造血及免疫重建的影响(英文)

背景:近几年,自然杀伤细胞与异基因骨髓移植的关系备受关注。目的:探讨自然杀伤细胞在小鼠异基因骨髓移植中对移植排斥、造血及免疫重建的影响。方法:以C57BL/6(H-2b)小鼠为供鼠、BALB/c(H-2d)小鼠为受鼠,分别在致死剂量和非致死剂量(≤7.0Gy)全身照射的预处理条件下进行异基因骨髓移植,移植同时输注供鼠外周T细胞和(或)自然杀伤细胞。结果与结论:在致死剂量全身照射的移植中,输注自然杀伤细胞与不输注自然杀伤细胞的移植组比较,存活率显著增高;白细胞计数、CD19+细胞表达及骨髓CD34+细胞计数恢复快;H-2Kb+细胞的表达水平高。移植后28d,输注自然杀伤细胞组CD3+细胞表达水平明显低于不输注自然杀伤细胞组,60d两组比较差异无显著性意义(P>0.05)。在非致死剂量全身照射的移植中,移植30d,异基因骨髓组H-2Kb+细胞表达百分率明显下降,60d已下降至移植前水平;而输注高浓度和低浓度自然杀伤细胞的两组在移植后60d仍能检测到80%以上的H-2Kb+细胞表达。提示,在小鼠异基因骨髓移植中,同种异基因反应性自然杀伤细胞可以抑制移植排斥,提高造血干细胞的植入水平,促进造血及免疫重建并增加移植受鼠的生存率。

同种T细胞前体频率与MHC-抗原肽种类呈正相关

目的用种类数目不同的肽段加载T2(表达空载HLA-A2分子)细胞与HLA-A2阴性个体的PBL混合培养,探讨同种反应性CTL前体的频率与同种抗原表位种类多少的关系。方法通过人工合成HLA-A2限制性单一病毒抗原肽、10种细胞正常成分的肽段以及冻融酸处理法制备细胞混合肽,加载T2细胞,经丝裂霉素灭活后作为刺激细胞,与PKH67预染HLA-A2阴性个体PBL进行混合淋巴细胞培养,PKH67荧光强度随细胞增殖而递减,通过流式细胞仪增殖软件(ModFit)分析同种T细胞前体频率。结果单独PBL增殖不明显;空载T2细胞刺激同种反应性CTL前体的频率为0．052 819;加载单一表位肽的T2细胞刺激时,前体的频率为0．030 429;10种HLA-A2自身限制性的混合抗原肽负载时,前体的频率为0．144 942;混合多肽负载时,前体的频率为0．203 649。结论本研究结果显示了同种T细胞前体的频率随着同种抗原表位种类的增多而增高,与同种抗原的密度不相关;支持了强烈的同种反应的主要原因是同种细胞表面表达极其繁多的T细胞识别表位(即pMHC)。

KIR配体不合在主要组织相容性复合物不合造血干细胞移植中的作用

自然杀伤（NK）细胞功能受细胞表面杀伤细胞免疫球蛋白样受体（KIR）和靶细胞上主要组织相容性复合物（MHC）Ⅰ类分子相互作用的调节。在MHC不合造血干细胞移植（HSCT）中，当供者NK细胞上KIR和受者细胞上抑制性MHCI类配体不合时，有可能产生供者对受者（GVH）方向NK细胞同种反应性，对受者异基因靶细胞产生同种反应性杀伤。本研究拟通过比较KIR配体不合／相合组在造血重建、急慢性移植物抗宿主病（GVHD）、无病生存（DFS）及移植相关死亡（TRM）等方面的差异，探讨GVH方向KIR配体不合对MHC不合HSCT预后的影响。

利用脾细胞培养抗原特异性CD4＋CD25＋T细胞的研究

调节性T淋巴细胞（CIM＋CD25＋Treg，Treg）对同种反应性T淋巴细胞具有强烈的抑制作用，抗原特异性Treg对特定抗原的免疫抑制作用明显加强。本研究旨在研究利用小鼠脾细胞培养抗原特异性Treg细胞。