同种带瓣大动脉的制备与低温保存技术的研究

本文介绍采用液氮（－１９６℃）超低温保存方法，对５０根同种带瓣大动脉（２５根主动脉，２５根肺动脉）处理后低温长期保存．并建立了一整套同种带瓣管道的处理方法，包括：取材、剥离、消毒、组织活力测试和冷藏．该材料已用于临床重建右室流出道和肺动脉纠治复杂性先心病１７例，效果良好．

不同处理方法对同种带瓣主动脉组织结构及机械抗张强度的影响

对同种带瓣主动脉的取材、处理、保存进行了研究，建立了梯度降温的计算机程序，通过组织学及超微结构观察，组织机械抗张强度测试，证实抗生素灭菌，深低温保存方法可以较好地保持同种移植物的生理特性，保持纤维组织及成纤维细胞的结构完整，保持组织机械抗张强度。

同种带瓣大动脉的取材、灭菌及保存

目的 报告 5 0个同种带瓣大动脉的取材、灭菌及液氮保存方法。 方法 供者为年龄 2 0～ 39岁的脑死亡患者 ,均在死亡后 2小时取材。修剪后 48个同种带瓣大动脉用抗生素灭菌 2 4小时放入含 8%二甲基亚砜的 RPMI16 40液中液氮保存。 结果 抗生素灭菌后 48个同种带瓣大动脉细菌和霉菌培养均为阴性。解冻 11个有 10个用于临床 ,解冻后的同种带瓣大动脉可基本保持正常功能 ,其细菌和霉菌培养均为阴性。 结论 无菌取材加抗生素灭菌效果可靠 ,经液氮保存的同种带瓣大动脉解冻后可满足临床应用的要求。

同种带瓣主动脉片修补心内分流合并重度肺动脉高压

目的 探讨同种带瓣主动脉补片在治疗先天性心脏病重度肺动脉高压中对右心功能的保护作用。方法 自 1998年 5月至 2 0 0 1年 5月应用同种带瓣主动脉补片修补先天性心脏病重度肺动脉高压患者心内缺损 10例。平均肺动脉压 5 5～ 98mm Hg( 1k Pa=7.5 mm Hg) ,平均 72 .4 6± 12 .4 1mm Hg。动脉血氧饱和度 0 .87～ 0 .95 ,平均 0 .91± 0 .0 3。 结果 术后 4 8小时内均顺利脱机 ,无死亡。随访 3～ 2 8个月 ,平均 10 .3± 4 .2个月 ,活瓣均已关闭 ;平均肺动脉压2 0～ 4 8mm Hg,平均 3 6.3 7± 9.66mm Hg;动脉血氧饱和度 0 .95～ 0 .98,平均 0 .97± 0 .0 1;临床症状明显改善。

同种带瓣主动脉用于矫正型大动脉转位合并肺动脉狭窄手术治疗

目的将同种带瓣主动脉经过适宜处理后，用以治疗１８例合并肺动脉狭窄的矫正型大动脉转位（ＣＴＧＡ）患者，其中内脏正位（ＳＬＬ）型１４例，内脏反位（ＩＤＤ）型４例，均合并室间隔缺损（ＶＳＤ）。方法手术缝闭肺动脉瓣口，修复ＶＳＤ，用经过冷冻处理的同种带瓣主动脉管道连接功能右心室和肺动脉。结果术后测压：右心室收缩压为３．３～６．４ｋＰａ（２５～４８ｍｍＨｇ），右心室－肺动脉压差０．６６～３．０ｋＰａ（５～２２ｍｍＨｇ），右心室／左心室压比值０．３～０．６。结论采用同种带瓣主动脉能使患者术后血流动力学指标更接近于人体正常生理状态。

深低温保存同种活性带瓣主动脉临床应用长期效果

目的观察改良法深低温保存的同种带瓣主动脉临床使用的长期效果并对该保存方法进行评价。方法30例法洛四联症病人分为两组，A组病人肺动脉功能发育良好，B组病人肺动脉发育不良。使用1989～1997年采用改良两步法深低温保存的同种活性带瓣主动脉标本（平均保存时间289d），行右室流出道重建术，临床使用6～12年后，应用心脏超声观察其反流、狭窄和钙化的情况。结果A组15例病人中肺动脉反流1例，肺动脉狭窄1例；B组15例病人中肺动脉反流3例，肺动脉狭窄1例，三尖瓣反流1例。30例病人超声检查显示同种血管及瓣膜均无钙化，活动良好。结论改良两步法保存的带瓣主动脉临床应用具有良好的远期效果。

同种异体带瓣主动脉行主动脉根部置换的临床效果

目的 :探讨应用低温保存的同种异体带瓣主动脉行主动脉根部重建手术的临床效果。方法 :85例主动脉瓣膜病变患者行同种主动脉根部置换手术 ,术后随访观察临床结果。结果 :随访 39± 13(1.5～ 91)个月。早期手术死亡率 1% (1/ 85 ) ,远期手术死亡率 6 % (5 / 85 ) ;与术前比较心功能明显改善 (P<0 .0 5 ) ;术后随访心内膜炎发生率占2 % (2 / 85 ) ;生存者中瓣膜无或有轻度返流 84 % (6 6 / 79) ,中度返流 16 % (13/ 79)。结论 :同种异体带瓣主动脉根部重建手术效果可靠 ,且并发症少。

大剂量^(60)Co γ照射加深低温保存对大鼠同种带瓣主动脉活性的影响

目的 研究大鼠同种带瓣主动脉内皮细胞活性与60 Coγ照射剂量之间的关系。方法 分别采用 30 0、6 0 0、90 0和 12 0 0Gy四种剂量对大鼠同种带瓣主动脉进行照射及在液氮中深低温保存三个月 ,观察不同剂量照射后同种带瓣主动脉的病理变化和内皮细胞活性。结果 大鼠同种带瓣主动脉内皮细胞活动度与照射剂量有关。在接受 30 0和6 0 0Gy照射时内皮细胞活动度分别为 (85 .6 7± 2 .5 8) %和 (83.5 5± 2 .75 ) % ,但它们与对照组相比无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ;在接受 90 0和 12 0 0Gy照射时内皮细胞活动度分别为 (72 .2 9± 1.96 ) %和 (32 .5 7± 3.4 8) % ,它们与对照组相比有显著性差异 (P <0 .0 1)。结论 大鼠同种带瓣主动脉内皮细胞活动度与60 Coγ照射剂量有关 ,6 0 0Gy可作为参考剂量用于降低同种带瓣主动脉免疫原性的研究。

同种带瓣大动脉灭菌实验研究

目的探讨不同抗生素水浴灭菌方法对同种带瓣大动脉组织活性的影响。方法取带瓣大动脉30只,随机分为A、B、C实验组,每组10只,并从中随机选择10只剪取部分内膜组织作为对照组(D组),实验组用不同抗生素水浴灭菌方法处理并做细菌培养。各组测定葡萄糖代谢率和台盼蓝拒染率。结果实验组细菌培养无阳性且葡萄糖代谢率和台盼蓝拒染率均低于对照组(P<0.05),B、C两组葡萄糖代谢率和台盼蓝拒染率均高于A组(P<0.05),而B、C两组间葡萄糖代谢率和台盼蓝据染率差别无显著性(P>0.05)。结论同种带瓣大动脉在抗生素溶液中37℃水浴6h可达到满意的灭菌效果且对组织细胞活性损伤较轻。

同种带瓣大动脉在复杂先心患儿中的应用

取意外死亡的健康成人带瓣大动脉，经修剪后以抗生素溶液浸泡灭菌，液氮保存。对年龄３～１５岁，体重１０．５～４５ｋｇ的１０例重症法乐四联症和３例右室双出口患儿，行右室流出道跨瓣环补片加宽术无１例死亡。出院时超声心动图提示４例肺动脉瓣轻度返流；临床听诊无肺动脉返流性杂音。对１１例患儿随访６～８个月，心功能Ⅰ级８例，Ⅱ级３例。

活性同种带瓣主动脉补片在法乐氏四联症右室流出道矫形中的应用

①目的评价同种带瓣主动脉（ＶＨＡ）用于法乐氏四联症（ＴＯＦ）右室流出道（ＲＶＯＴ）矫形的临床效果。②方法以保留无冠瓣及二尖瓣大瓣的ＶＨＡ行右室漏斗部、肺动脉瓣环和肺动脉干矫形２５例。关胸前测定各心腔压力并行彩色Ｄｏｐｐｌｅｒ心脏超声随访。③结果关胸前测压：ＶＨＡ组与对照组的右室与左室收缩压比值分别为０．５０±０．１６和０．６２±０．１４（ｔ＝２．５８０，Ｐ＜０．０２）；右室收缩压分别为６．５８±１．６９ｋＰａ和７．８９±２．４５ｋＰａ（ｔ＝２．１０３，Ｐ＜０．０５）；右室－肺动脉压力阶差为０．４３±０．３２ｋＰａ和３．３１±１．９５ｋＰａ（ｔ＝７．３１５，Ｐ＜０．００１）。ＶＨＡ组血液动力学效果明显优于对照组。ＶＨＡ组死亡１例（４％），余２４例随访０．６７～４．６７年，无远期死亡，心功能恢复优良，Ｄｏｐｐｌｅｒ超声随访显示术后肺动脉反流轻微，ＶＨＡ无失功及钙化。④结论本研究资料显示以带瓣ＶＨＡ行ＴＯＦ的ＲＶＯＴ重建，术后血液动力学效果优良，可以最大限度加宽ＲＶＯＴ，最大限度减轻肺动脉反流。

同种(带瓣)主动脉治疗复杂性先天性心脏病

本组应用同种带瓣主动脉及其制备的血管补片或带单瓣血管补片治疗40例复杂性先天性心脏病。方法:取血管补片对6例行心房内侧隧道、行全腔静脉—肺动脉连接术;用同种带瓣主动脉对28例行功能右心室与肺动脉连接;用带单瓣血管补片对6例法乐氏四联症,行跨肺动脉瓣环的右室流出道加宽。结果:死亡5例,均与同种带瓣主动脉无关。结果表明深低温技术保存同种带瓣主动脉,应用前景十分乐观。

瓣下心肌可增强大鼠同种带瓣主动脉移植物免疫原性

对大鼠同种带瓣主动脉 (AVH)不同组织 (瓣下心肌、瓣叶、大动脉壁 )免疫原性进行比较 ,观察AVH移植后机体免疫排斥反应。采用大鼠AVH腹主动脉异位移植模型。实验分 3组 ,分别接受带瓣下心肌的AVH (A组 ,n =12 )、去除瓣下心肌的AVH(B组 ,n =12 )和单纯主动脉壁 (C组 ,n =12 )移植 ,以术前为对照。术后 2、4、8、12周测定血ICAM 1、TCR αβ、移植标本CD4 0 /CD4 0L的表达 ,并行组织病理学观察。 3组术后ICAM 1、TCR αβ和CD4 0 /CD4 0L的表达均比对照组明显增高 (P <0 0 5 )。A组术后 2～ 4周ICAM 1分别为 (9 0 32± 2 5 82 ) %和 (17 0 6±2 6 4 6 ) % ,明显高于B、C 2组 (P <0 0 1) ;术后 2周TCR αβ为 (4 1 5 9± 5 96 5 ) % ,亦明显高于B、C 2组 (P <0 0 5 ) ;术后 2周CD4 0表达为 4 333± 0 5 77,与C组相比差异明显 (P <0 0 5 )。病理学观察 3组均呈不同程度的免疫排斥反应表现 ,B、C 2组改变相似 ,A组病理改变比B、C 2组出现早、程度重。大鼠AVH移植诱发了机体免疫排斥反应 ,与瓣叶和动脉壁相比 。

新生动物同种主动脉带瓣管道移植的组织形态学观察

目的 :观察新生动物同种主动脉带瓣管道 (VAHC)移植后的组织形态学变化。方法 :新生兔为供体 ,其VAHC抗生素灭菌后经腹膜外植入幼兔及成年兔的腹主动脉 ,术后 1个月和 6个月取材作组织形态学观察。结果 :移植的VAHC搏动良好 ,内膜光滑 ,无血栓。瓣膜无皱缩 ,交界无粘连。光镜下血管壁内膜和中层有不同程度的增厚 ,可见炎性细胞浸润。电镜下的超微结构均有所改变 ,以植入成年兔体内 6个月的VAHC最为明显 ,主要表现为血管壁平滑肌细胞增生 ,胞内细胞器少 ,内质网明显扩张 ,甚至呈空泡样改变 ,可见淋巴细胞和单核细胞浸润及钙化斑。瓣膜胶原纤维排列散乱 ,部分成纤维细胞内质网扩张 ,胞浆内有脂褐素沉积。结论 :本实验表明 ,新生动物的VAHC移植后的组织形态呈较明显的慢性排异反应征象。

新生动物同种主动脉带瓣管道移植物α-actin和PCNA的免疫组织化学研究

目的 应用免疫组织化学方法观察新生动物的同种主动脉带瓣管道 (VAHC)移植后平滑肌肌动蛋白 (α- actin)和增殖细胞核抗原 (PCNA)表达的变化 .方法 体质量 15 0～2 0 0 g的新西兰兔 2 4只作为 VAHC的供体 ,0 .9～ 1.2及2 .1～ 2 .9kg的幼兔和成年兔各 12只为受体 .建立新生兔的VAHC移植模型 ,术后 1和 6 mo分别取材作组织学检查和免疫组织化学染色 ,观察 VAHC的组织结构、α- actin及 PCNA阳性表达情况并作计算机图像分析 .结果 组织学检查显示VAHC血管壁三层结构存在 ,内膜及中层均增厚 ,管壁有少量单核细胞及淋巴细胞浸润 ,植入成年兔体内 6 mo的变化最为明显 .免疫组化染色 α- actin在各组 VAHC血管壁中层均呈阳性表达 .与对照组相比 , ～ 组血管壁中层 SMC, , 组内膜及瓣膜内皮细胞 (EC) PCNA阳性指数明显增高 (P<0 .0 5 ) , 组尤为显著 (P<0 .0 1) .图像分析结果表明 , , 组 α- actin的灰度值明显低于对照组 (P<0 .0 5 ) , ～ 组血管壁及瓣膜 PCNA阳性细胞的灰度值低于对照组 (P <0 .0 5 ) .结论 新生兔 VAHC植入幼兔及成年兔体内后的变化呈较明显的慢性排异反应征象 .

^(60)Co γ照射加深低温保存对大鼠同种带瓣主肺动脉免疫原性的作用

目的本实验应用60Coγ射线照射加液氮深低温保存大鼠同种带瓣主肺动脉(Valved pulmonary homograftcon-duit,VPHC),并建立大鼠VPHC颈总动脉移植模型,观察不同照射剂量对同种带瓣主肺动脉免疫原性的作用,寻找合适照射剂量,为进一步基础研究及临床应用提供理论依据。方法1月龄雌性Wistar大鼠50只,作为供体,成年雄性SD大鼠50只,作为受体,随机分为实验对照组(单纯深低温保存组)、300Gy照射组、600Gy照射组、900Gy照射组和1200Gy照射组,另取10只SD大鼠行颈总动脉切断吻合术,作为空白对照组。应用流式细胞术对VPHC移植术后1周、2周、3周受体鼠外周血行CD4+T细胞及CD8+T细胞检测。结果600Gy照射组VPHC移植术后1周、2周、3周CD4+T细胞、CD8+T细胞百分率及CD4+/CD8+与空白对照组相比无显著性差异(P>0.05),与实验对照组相比差异显著(P<0.01)。结论应用600Gy60Coγ射线对VPHC进行照射在保持VPHC活性的同时明显降低了其免疫原性。

新生兔同种主动脉带瓣管道移植的形态学研究

目的 :观察新生动物的同种主动脉带瓣管道 (VAHC)移植后的形态学变化。方法 :以体重 15 0～ 2 0 0 g的新西兰兔 2 4只作为 VAHC的供体 ,0 .9～ 1.2 kg的幼兔和 2 .1～ 2 .9kg的成年兔各 12只为受体 ,建立新生兔的 VAHC移植模型。术后 1个月和 6个月分别取材作大体形态测量及组织学观察。结果 :发现植入的 VAHC内膜光滑 ,无血栓 ;与植入时相比 ,各组 VAHC血管壁厚度及植入幼兔体内 6个月 VAHC长度和管径明显增加 (P<0 .0 5 ) ;与未植入的新生兔 VAHC相比 ,植入幼兔体内 6个月的 VAHC瓣叶高度、游离缘长度均增加 (P<0 .0 5 )。组织学检查显示 VAHC血管壁存在三层结构 ,内膜及中层轻度增厚 ,管壁有少量单核细胞及淋巴细胞浸润 ,植入成年兔体内 6个月的变化最为明显。结论 :新生兔的 VAHC植入幼兔体内后其血管的直径和长度、瓣叶的高度和游离缘长度可随幼兔的发育而增加 ,提示在临床上应用小的 VAHC是可行的。

树突细胞单抗对同种带瓣主动脉移植影响

目的探讨树突细胞单抗(DCmAb)对同种带瓣主动脉(AVH)免疫原性的影响及在改善AVH移植远期疗效中的作用。方法选成年Wistar大鼠(200～250g)为供体,SD大鼠(200～250g)为受体,采用大鼠AVH腹主动脉移植模型。实验分3组。A组(n=12)供体接受1∶10稀释DCmAb处理;B组(n=12)供体接受1∶20稀释DCmAb处理;C组(n=12)为对照,接受新鲜AVH移植。术后2、4、8、12周测定血ICAM1、TCRαβ的表达,移植标本组织病理学观察。结果A组术后2～4周ICAM1分别为(7.603±1.665)%和(13.963±0.376)%,明显低于C组的(9.023±2.582)%和(17.060±2.6465)%(P<0.05,P<0.01);术后两周,A、B两组TCRαβ分别为(30.91±2.099)%和(34.893±2.303)%,与C组相比均明显降低(P<0.01),A组降低幅度大于B组(P<0.05)。病理观察显示:C组变化成典型排斥反应改变。A组各时期病理损害明显较C组减轻,出现时间延迟,B组处于A、C而组之间。结论DCmAb可减少AVH的免疫原性,减轻移植术后病理损害。其作用呈一定的量效关系。

同种带瓣主动脉移植治疗矫正性大动脉转位的术后护理

总结应用同种带瓣主动脉移植治疗 2 4例矫正性大动脉转位的护理经验。本组病人均合并有其它心内畸形 ,传导束走行具有特殊性。术后应加强对心律变化的观察及起搏导线的护理 ;因植入带瓣主动脉 ,易发生感染和排斥反应 ,基础护理十分重要 ;要熟悉矫正性大动脉转位的解剖特点 ,让病人保持平卧或适宜体位 ,防止移植的主动脉扭曲、受压 ;指导病人正确抗凝 ;如发现移植的主动脉退化要及时处理 。

同种带瓣大动脉超低温保存及病理学研究

目的:探讨同种带瓣大动脉管道液氮保存前、保存后不同时期病理改变。方法:将13例同种带瓣大动脉分为3组:A组保存前、B组保存时间半年内、C组保存半年至1年,进行糖代谢测定、病理切片检查,病理采用HE、PAS、VG、Actin(SM)、Wright?s弹力纤维、Foot网状纤维染色、吖啶橙内膜荧光染色等方法(保存液:抗菌素RPMI1640小牛血清组织培养液)。结果:1同种带瓣大动脉保存前后糖代谢率比较,A组6.35±1.59、B组6104±1109、C组6181±2129,P>0.05;2组织学检查:保存前后内皮细胞均有不同程度剥脱,单位长度内膜内皮细胞剥脱(um?cm),A组369±134.36、B组701±417120、C组350114±298109,P>0.05。结论:1液氮保存能很好保存同种带瓣大动脉细胞活性;2HE、PAS、VG、Actin(SM)、Weigert’s弹力纤维、Foot网状纤维染色、吖啶橙荧光染色等组织学检查及糖代谢检测是评价细胞活性及保存效果的有效方法之一。