脱细胞同种异体神经移植物修复大鼠坐骨神经缺损的实验研究

目的 观察脱细胞处理的同种异体神经移植物修复大鼠坐骨神经缺损的作用。 方法 用组织工程学方法制备的大鼠同种异体神经移植物桥接大鼠坐骨神经缺损 ,并对再生神经进行电生理学功能测试 ,光镜、电镜观察移植物内的再生神经 ,并进行统计分析。 结果 术后 13周内 ,动物未见炎症及排斥反应。用脱细胞处理的同种异体神经移植物修复神经缺损 ,再生神经的传导功能、纤维数量、轴突直径、有髓纤维占有的面积与自体神经移植对照及计量学上统计分析均无显著性差异。 结论 脱细胞处理的同种异体神经移植物具有良好的组织相容性 ,它对缺损的坐骨神经再生有促进作用。

紫外线B照射低温冷冻同种异体神经移植的实验研究

目的:观察低温冷冻加紫外线B照射的大白鼠的异体神经与新鲜自体神经移植的差异,探讨神经移植的再生机制。方法:以30只健康雄性大白鼠为实验对象,随机分成A,B,C3组,每组后肢一侧移植冷冻加紫外线B照射的同种异体坐骨神经,另一侧移植新鲜自体坐骨神经。于术后2,4,6个月,进行肉眼观察、电生理学检查、腓肠肌和比目鱼肌湿质量测定、组织学观察。结果:在术后2个月时,实验侧、对照侧功能均逐渐恢复,肌肉的颜色、体积两侧差异无显著性意义。诱发肌电图在2个月时呈多相性、低振幅波形,4～6个月时多相性波形减少,振幅增大,肌肉收缩力增强,诱发动作电位峰值,实验侧与对照侧差异无显著性意义;运动神经的神经肌肉传导速度、腓肠肌和比鱼肌湿质量测定实验侧与对照侧也差异无显著性意义(P>0.05);组织学观察两侧神经再生状态基本相似。结论:低温冷冻加紫外线B照射可以充分降低异体神经的免疫原性,与新鲜自体神经移植的效果相似,是具有应用前景的神经移植材料。

同种异体神经修复面神经缺损的实验研究

目的:探索修复面神经缺损的新的有效替代材料。方法:20只大鼠随机分成实验组(化学萃取同种异体胫神经移植组,10只)和对照组(自体新鲜胫神经移植组,10只)。大鼠一侧面神经下颌支缺损6mm的模型,以上述两种移植物桥接修复。术后5个月,HRP逆行示踪观察神经通路,以及用苏木精-伊红染色、LuxolFastBlue染色和透射电镜等观察神经再生的组织学情况。结果:两组均在术侧面神经核发现被标记的神经元细胞,移植段内有大量的新生有髓神经纤维和新生血管等。两组结果相似。结论:化学萃取同种异体神经极有可能成为自体神经的替代材料,应用于面神经缺损的修复。

种植施万细胞的脱细胞同种异体神经移植物对大鼠坐骨神经缺损的修复作用

目的观察种植施万细胞的脱细胞同种异体神经移植物,桥接大鼠坐骨神经缺损后的神经再生。方法应用酶反复消化法与差速贴壁法体外分离培养乳鼠施万细胞;显微注射法将施万细胞种植到脱细胞同种异体神经移植物内;再应用种植施万细胞的脱细胞同种异体神经移植物桥接大鼠坐骨神经10 mm缺损。光镜、透射电镜和扫描电镜观察再生神经的形态结构、有髓神经纤维数量、平均髓鞘厚度并进行统计学分析。结果光、电镜观察到实验组(SCs+ARSN)的施万细胞在再生神经纤维中互相连结纵行排列成类似Büngner带样细胞链,对照组(ARSN)未见到施万细胞的链状排列。实验组再生有髓神经纤维的髓鞘厚度较对照组均匀且较厚,有髓神经纤维数量和平均髓鞘厚度明显多于对照组(P<0.05)。结论种植施万细胞的脱细胞同种异体神经移植物对缺损的坐骨神经再生有更加有效的促进作用。

BDNF在脱细胞同种异体神经移植物修复神经缺损后不同组织中的表达

目的探讨脱细胞同种异体神经移植物(ANA)修复大鼠坐骨神经缺损后促神经再生的分子作用机制。方法将36只Wistar大鼠随机分成6组:正常对照组,自体移植组,桥接2,4,8,12周组,每组6只,分别观测患侧L4脊髓及胫前肌内脑源性神经营养因子(BDNF)蛋白及mRNA表达。结果ANA桥接大鼠坐骨神经缺损后2周患侧脊髓内BDNF表达增高,4周时达高峰,持续到8周,然后逐渐降低,12周时仍显著高于正常对照组,与自体移植组相比无差异。而患侧胫前肌最初4周内逐渐降低,然后逐渐升高,12周时达到正常水平,与自体移植组相比无差异。BDNF mRNA的表达基本与蛋白表达一致。结论ANA具有良好的组织相容性,也许可替代自体神经修复大鼠坐骨神经长距离缺损,此作用可能与上调脊髓BDNF蛋白及mRNA表达有关。

脱细胞同种异体神经移植物桥接大鼠坐骨神经缺损的形态学观察

目的: 研究脱细胞处理的同种异体神经移植物桥接大鼠坐骨神经缺损后, 再生神经的形态学变化。方法: 光镜、电镜观察移植物内再生神经的超微结构变化, 免疫组织化学技术观察再生神经中S-100蛋白表达,并对再生神经的纤维数量、髓鞘厚度等进行统计学分析。结果: 实验组和自体神经移植对照组的移植段内见有由束膜和外膜包被的大量再生神经纤维, 两组比较再生神经的纤维数量、髓鞘厚度、有髓纤维占有的面积均无显著性差异; 两组移植段神经中的S-100阳性施万细胞数、形态和排列等方面也无明显差异。结论: 脱细胞同种异体神经同自体神经一样,对缺损的坐骨神经再生具有促进作用。

脱细胞同种异体神经移植物的制备及成分分析

目的 探讨脱细胞同种异体神经移植的制备方法及其含有的成分。方法 采用组织工程化低渗脱细胞方法制备神经异体移植物 ,光电镜观察其结构特征 ;用免疫组织化学法和聚丙烯酰胺凝胶电泳法分析神经异体移植物的成分。结果 正常的 (天然的 )周围神经经脱细胞处理后 ,清除了雪旺细胞、神经外膜和束膜的细胞 ,以及神经纤维的髓鞘和轴突 ,保存了由雪旺细胞基底膜管以及神经外膜和束膜的细胞外基质构成的三维支架结构。成分分析结果显示 ,含有LN、FN以及生长相关蛋白GAP 4 3和 6 5kDa蛋白等促进和诱导受体损伤神经再生的重要成分。结论 脱细胞异体神经移植物含有诱导和促进神经再生的相关蛋白 ,有利于受损神经的再生。

化学去细胞同种异体神经移植物储存方法的初步研究

目的 :探索犬去细胞神经的最佳储存方法。方法 :采用真空封装辐照灭菌法深低温储存犬去细胞坐骨神经12个月 ,进行细菌学检查、一般组织学观察、免疫组化染色、透射电镜观察。结果 :储存过程中不会发生细菌污染 ,储存去细胞神经的延展性及神经外膜的韧弹性保持良好 ;其基本结构、神经基底膜及许旺细胞基底板层被保留 ;仍然保持为没有细胞髓鞘及其碎片的空的神经基质管。结论 :真空封装辐照灭菌法可有效储存去细胞神经 1年。

同种异体神经复合体修复兔周围神经缺损

背景:应用种植许旺细胞的去细胞同种异体神经复合体修复周围神经缺损,探索其对神经再生及功能恢复有更好的促进作用,并且免疫原性非常小。目的:用种植胎兔许旺细胞的去细胞同种异体神经复合体修复兔缺损的坐骨神经,观察移植神经周围免疫细胞的变化及功能恢复。方法:48只新西兰白兔随机分成实验组和对照组。两组动物均切除一段坐骨神经,造成2.0cm长的缺损,实验组用种植胎兔许旺细胞的同种异体神经复合体修复坐骨神经;对照组仅用去细胞同种异体神经修复。移植后1,4,8周光镜观察移植段坐骨神经周围肌肉组织中免疫细胞的浸润情况,计数每个高倍视野免疫细胞的数量。移植后4,8,16周大体观察兔的足部溃疡形成及愈合情况,大体观察神经愈合情况;肌电图检查桥接段坐骨神经的传导速度。结果与结论:手术区局部均未出现明显的排斥反应,实验组足部溃疡愈合情况优于对照组。移植后1周移植段坐骨神经周围肌肉组织中有大量淋巴细胞及巨噬细胞浸润,实验组明显多于对照组(P<0.05);移植后4周,浸润的免疫细胞两组均较1周后明显减少,实验组减少更明显。移植后8周,浸润的免疫细胞更加减少,但两组间比较差异无显著性意义(P>0.05)。移植后4周时,两组均未见明显的神经传导,8,16周神经传导速度实验组均优于对照组(P<0.05)。提示,种植许旺细胞的去细胞同种异体神经复合体免疫原性非常小,对神经再生及功能恢复有更好的促进作用。

甘油处理的同种异体神经在临床的应用

目的 寻找一种制作简便 ,保存方便同时又无明显抗原性 ,具备完整神经内膜结构 ,并能长期保留的神经移植物。方法 将无菌条件下取得的同种异体神经在 3 7℃条件下 ,依次在5 0 %、70 %、85 %的甘油中各浸泡 3h ,再分装在盛有 85 %甘油容器中密封 ,置于 5℃保存 6周后备用。结果 10例患者 ,行甘油处理后的同种异体神经移植 14条 ,长度为 2 .5～ 18cm ,术后经过 5～42个月的随访观察 ,获得满意效果。结论 同种异体神经通过甘油处理贮存 6周后 ,用于桥接周围神经缺损 ,有明显效果 ,是一种值得进一步研究应用的神经移植材料。

同种异体神经干细胞移植治疗大鼠脑内出血的研究

目的 探讨神经干细胞移植对实验性大鼠脑内血肿的治疗作用。方法 脑内注血制作脑出血模型;乳鼠脑组织分离培养神经干细胞;细胞免疫组化鉴定细胞;血肿周围多点注射法移植神经干细胞;神经系统评分、正电子发射计算机断层扫描测脑组织代谢等方法衡量神经干细胞移植后治疗效果。结果 移植组与对照组相比神经系统评分无显著差异(P>0.05),移植组血肿周围脑组织代谢显著高于对照组相应脑区(P<0.01)。结论 移植的神经干细胞在大鼠脑内血肿周围能够成活,但不能改善神经功能缺失的症状。

冻融联合优化化学法制备粗大去细胞同种异体神经

背景:异体神经移植修复神经缺损需要面对和解决的是宿主免疫排斥反应问题。因此,如何避免、减轻免疫排斥反应是同种异体神经移植获得成功的关键因素。目的:探索新的异体神经预处理方法,清除犬周围神经中的许旺细胞和髓鞘,保留完整的基底膜,建立粗大异体神经移植物的预处理方法,获得去细胞异体神经移植物。方法:取健康成年杂种犬游离双侧坐骨神经,以冻融联合优化化学法对神经进行预处理,光、电镜观察其结构特征,组织学染色及Western blot分析其成分。结果与结论:预处理后的去细胞神经的延展性和神经外膜的弹韧性良好,许旺细胞和髓鞘被彻底清除,基底膜保留完整,去细胞神经为一没有细胞、髓鞘及其碎片的空的神经基膜管。结果表明该方法有效的清除了周围神经中主要抗原成分许旺细胞及髓鞘,并且保留了促神经再生的重要成分基底膜,可作为制备组织工程化神经较理想的方法。

辐照含银同种异体神经移植的实验研究

目的观察辐照含银处理同种异体神经的体外抑菌效果及移植效果。方法①将同种异体神经分别行辐照含银、单纯辐照和低温冷冻处理,并对它们进行含银量测定、细菌培养及体外抑菌实验。②18只健康成年家兔,随机分为3组,分别移植辐照含银同种异体神经(A组)、新鲜异体神经(B组)和自体神经(C组)。通过观察移植后宿主的免疫排斥反应、组织形态学和光镜下组织结构变化来判断移植效果。结果①辐照含银处理神经含Ag+(193.2±10.3)μg/g;辐照含银神经组具有明显抑菌作用,与其他各处理组相比差别显著(P<0.01);②细胞毒实验显示A组淋巴细胞死亡率与C组无明显差异(P>0.05);术后12周,A组与C组腓肠肌萎缩好转,针刺可见回缩反应;光镜下可见雪旺细胞增生,新生轴索出现,轴索数量增加,B组移植神经溶解。结论辐照含银同种异体神经能解决降低抗原性、组织保存、神经再生效果和机能恢复、术后感染等问题,是较理想的神经移植材料。

同种异体神经复合体桥接修复兔坐骨神经缺损与神经-肌结构重建及功能恢复

背景:课题组在前期研究中分别探讨了神经生长因子对胎兔许旺细胞培养的影响以及去细胞神经移植体的制备,并在体外成功制备出重新细胞化的神经移植复合体。目的:探讨种植许旺细胞的去细胞同种异体神经移植对神经-肌结构重建和功能恢复的作用。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2006-03/2007-06在河北医科大学第三医院中心实验室完成。材料:健康成年新西兰白兔37只,1只用于制备去细胞神经桥接体,剩余36只随机分为实验组、对照组,18只/组。方法:切取兔双侧坐骨神经,剥除周围组织,剪成约每段3cm,放入TritonX-100水溶液中静置12h,蒸馏水漂洗,以使溶于水的TritonX-100膜蛋白体复合物充分脱离神经干,如此反复,TritonX-100作用时间共为96h,萃取好的去细胞神经桥接体在Hank's液中4℃保存。调整第2代许旺细胞浓度至1×1011L-1,用100μL微量注射器注入去细胞神经桥接体内,然后将神经段置于DMEM培养液中,即为同种异体神经复合体。实验组兔于膝关节上方造成20mm长缺损,将种植许旺细胞的同种异体神经复合体缝接于坐骨神经两断端;对照组兔左侧坐骨神经造成20mm长缺损后,用单纯的去细胞同种异体神经桥接物缝接神经两断端。主要观察指标:分别于术后4,8,16周大体观察兔足部溃疡形成及愈合情况,通过肌电图、光镜、电镜等方法检测远端腓神经的轴突、髓鞘及胫骨前肌、运动终板的恢复情况。结果:术后4,8,16周两组动物术区局部均未出现明显的排斥反应,实验组足部溃疡愈合情况、神经纤维数目、髓鞘及再生神经的超微结构、运动终板的形态及靶肌肉结构的恢复均优于对照组。术后4周两组均未见明显的神经传导,术后8,16周实验组胫骨前肌湿质量、神经传导速度均优于对照组(P<0.05)。结论:种植许旺细胞的去细胞同种异体神经复合体不仅能够为再生神经提供良好的支架作用,还能诱导和促进神经轴突和髓鞘的再生,对坐骨神经缺损后的神经-肌结构重建与功能恢复具有显著的促进作用。

电生理检测在同种异体神经移植处植入bFGF复合降解膜研究中的应用

周围神经损伤造成神经缺损是临床常见的外伤,自体神经移植已成为一种主要的解决方法,但是由于神经再生不全影响功能恢复,特别是移植的自体神经来源有限,供区局部会引起神经疼痛、麻木、瘢痕等并发症.