预存式自体输血联合同种异体自然杀伤细胞输注对胃癌手术后患者免疫功能的影响

目的探讨预存式自体输血联合同种异体自然杀伤细胞(natural killer cell,NK)输注对胃癌手术后患者免疫功能的影响。方法按照随机数字表法将120例胃癌患者分为对照组和观察组,各60例。对照组采用异体输血;观察组采用预存式自体输血联合同种异体NK细胞输注。两组均以治疗10d为1个疗程;治疗前后采用单向免疫扩散法测定补体C3、C4水平,速率散射比浊法测定血清免疫球蛋白IgG、IgA和IgM,酶联免疫吸附试验检测治疗前后白细胞介素-10(interleukin,IL-10)、白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平,采用流式细胞仪法测定T细胞亚群(CD4^+、CD3^+、CD8^+及CD4^+/CD8^+)。结果两组治疗后C3、C4、IL-2和IL-10水平升高,血清IgG、IgA、IgM和TNF-α水平均下降。观察组CD3^+、CD4^+、CD8^+及CD4^+/CD8^+细胞异常例数均少于对照组;IgG、IgA、IgM、C3及C4异常例数少于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。CD8、TNF-α水平低于对照组;C3、C4、IL-2、IL-10、CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论预存式自体输血联合同种异体自然杀伤细胞输注能促进T细胞亚群平衡,调节肿瘤手术患者体液免疫,有利于提高患者免疫力,调节炎性细胞因子水平。

同种异体半相合细胞因子诱导的杀伤细胞治疗晚期肝癌的疗效及安全性评估

目的探讨同种异体半相合细胞因子诱导的杀伤(CIK)细胞治疗晚期肝癌的疗效及安全性。方法采集21例晚期肝细胞癌(肝癌)患者健康一级直系亲属的外周血单个核细胞,在体外诱导成异体半相合CIK细胞后回输给患者,回输4个周期。评估治疗效果和安全性。结果随访半年,21例患者的存活率为81%(17/21),疾病稳定患者11例,疾病进展患者10例(含4例死亡病例)。6例患者治疗期间出现不同程度的发热,1例出现皮疹。与治疗前相比,患者治疗后第4周期的血小板数量降低,差异有统计学意义(P<0.05),而患者治疗后第1、4周期的白细胞、中性粒细胞、淋巴细胞、血红蛋白,肝、肾功能差异均无统计学意义(均为P>0.05)。结论同种异体半相合CIK细胞治疗晚期肝癌患者能够有效改善生活质量,不良反应大都在可耐受范围,是一种较安全的治疗方法。

骨髓间充质干细胞与同种异体骨复合修复犬下颌骨缺损:成骨能力检测

背景:同种异体骨与自体骨有相似解剖外形和生物学特性,是较佳的生物支架材料。自体骨髓来源的间充质干细胞具有多分化潜能,能向成骨、成软骨细胞分化,加速骨组织及软骨组织的形成。目的:探讨同种异体骨支架复合自体骨髓间充质干细胞促进犬下颌骨半侧缺损的新骨成骨能力。方法:拔出24只比格犬左侧下颌牙,伤口愈合后2个月,人为造成犬下颌骨缺损,对照组用单纯冻干同种异体骨修复,实验组用同种异体冻干骨加自体骨髓间充质干细胞修复。术后4,12,24周对下颌骨体部进行骨密度扫描以及Micro-CT检查。结果与结论:实验组移植后12周开始,下颌骨的骨密度显著高于对照组(P<0.05),随着时间推移,实验组和对照组骨密度均增高,但实验组增高明显高于对照组。随时间推移,实验组骨结构参数成阶梯式递增或递减,对照组虽也有递增或递减,但不明显。术后24周实验组感兴趣区骨小梁分离度大于对照组(P<0.05),骨体积分数、骨小梁数量、骨小梁厚度小于对照组(P<0.05)。结果表明骨髓间充质干细胞能加速同种异体骨的骨改建速度。

基因转染骨髓间充质干细胞复合同种异体骨修复绵羊极限骨缺损

背景:多项体内外实验表明外源性植入碱性成纤维细胞生长因子能明显促进骨形成过程,但外源性碱性成纤维细胞生长因子在体内易降解,影响疗效。目的:利用分子生物学技术将碱性成纤维细胞生长因子转染至骨髓间充质干细胞中,观察同种异体骨复合基因转染骨髓间充质干细胞修复绵羊极限骨缺损的效果。方法:将同种异体骨复合碱性成纤维细胞生长因子转染骨髓间充质干细胞组织工程骨、骨髓间充质干细胞复合同种异体支架骨材料、同种异体支架骨材料、β-磷酸三钙材料分别植入羊髂骨极限缺损处,植入后4,8,12周行组织学、免疫组织化学染色观察。结果与结论:同种异体骨复合碱性成纤维细胞生长因子转染骨髓间充质干细胞组织工程骨植入后12周,手术结合区成软骨样结构较多,术区中央可见大量成骨样细胞,整个术区的支架材料降解较其他组多,支架材料孔洞内爬满纤维结缔组织,材料周围常见破骨样细胞;骨涎蛋白与Ⅰ型胶原呈强阳性表达。其他3组手术结合区虽有成软骨样结构及成骨样细胞出现,但中央区为死骨结构,且骨涎蛋白与Ⅰ型胶原呈弱表达。表明碱性成纤维细胞生长因子转染的骨髓间充质干细胞复合同种异体骨可基本修复绵羊极限骨缺损。

间充质干细胞诱导糖尿病小型猪同种异体胰岛移植的免疫耐受

背景:胰岛移植为有望根治糖尿病的一种方法,而移植排斥问题阻碍了移植的开展,诱导受体对供体移植物的免疫耐受是解决同种异体移植排斥反应的关键。目的:观察骨髓间充质干细胞输注对糖尿病小型猪同种异体胰岛移植物存活时间的影响。方法:无菌条件下抽取动物骨髓,离心弃上清。取单核细胞层,洗涤后加入L-DMEM培养基,调整细胞浓度为1×109L-1。培养48h后换液去除未贴壁的细胞,依据贴壁培养法分离和扩增间充质干细胞。取第5代细胞作为移植供源,调整细胞浓度为1×1010L-1。四氧嘧啶制备糖尿病小型猪模型,随机分为骨髓细胞组和干细胞+骨髓细胞组,经肝门静脉分别植入胰岛细胞、骨髓细胞,胰岛细胞、骨髓细胞和骨髓间充质干细胞。结果与结论:骨髓间充质干细胞联合骨髓细胞输注较单纯骨髓细胞输注能显著延长同种异体小型猪胰岛移植物存活时间(P<0.05),同时受体血清胰岛素能较长时间维持较高水平。提示骨髓间充质干细胞输注能显著延长猪胰岛移植物存活时间,并促进胰岛移植物正常功能的发挥。

同种异体与自体血清对骨髓基质干细胞的增殖效应

背景:传统的细胞培养方法大多采用胎牛血清作为营养支持,其存在传播疾病的风险和免疫排斥反应。寻找胎牛血清替代物并建立规范、安全、高效的成人骨髓基质干细胞体外培养体系刚刚起步,有待进一步研究。目的:探讨AB血清、自体血清替代胎牛血清体外培养人骨髓基质干细胞的效果。方法:从成人骨髓穿刺液中分离人骨髓基质干细胞,分别用含体积分数10%AB血清、自体血清和胎牛血清的基础培养基培养人骨髓基质干细胞,取第3代细胞进行相关指标检测。结果与结论:相差显微镜下见AB血清组细胞最先达到汇合;流式细胞仪检测细胞表面抗原,各组均符合骨髓干细胞表型,纯化程度良好;Alamar Blue法显示AB血清组平均荧光强度最高,促增殖效率最高;Annexin V-FITC法显示各组细胞凋亡率均在5%以下,生长状态良好;碱性磷酸酶染色、钙结节和油红O染色结果显示,各组细胞均保持了成骨、成脂分化能力。AB血清对人骨髓基质干细胞的增殖作用较胎牛血清、自体血清明显增强。AB血清有望替代胎牛血清建立符合骨组织工程临床应用要求的体外成人骨髓基质干细胞培养体系。

异体NK细胞、LAK细胞对新鲜急性粒细胞白血病的杀伤作用

异体ＮＫ细胞、ＬＡＫ细胞对新鲜急性粒细胞白血病的杀伤作用浙江医科大学附属第一医院（３１０００３）陈湖光在血液肿瘤领域，自然杀伤（ｎａｔｕｒａｌｋｉｌｌｅｒ，ＮＫ）细胞被认为与一些白血病的发生、发展及转归有关。有人观察到，白血病（包括急性粒细胞白血病ａ...

自然杀伤细胞对异基因骨髓移植中移植排斥和造血及免疫重建的影响(英文)

背景:近几年,自然杀伤细胞与异基因骨髓移植的关系备受关注。目的:探讨自然杀伤细胞在小鼠异基因骨髓移植中对移植排斥、造血及免疫重建的影响。方法:以C57BL/6(H-2b)小鼠为供鼠、BALB/c(H-2d)小鼠为受鼠,分别在致死剂量和非致死剂量(≤7.0Gy)全身照射的预处理条件下进行异基因骨髓移植,移植同时输注供鼠外周T细胞和(或)自然杀伤细胞。结果与结论:在致死剂量全身照射的移植中,输注自然杀伤细胞与不输注自然杀伤细胞的移植组比较,存活率显著增高;白细胞计数、CD19+细胞表达及骨髓CD34+细胞计数恢复快;H-2Kb+细胞的表达水平高。移植后28d,输注自然杀伤细胞组CD3+细胞表达水平明显低于不输注自然杀伤细胞组,60d两组比较差异无显著性意义(P>0.05)。在非致死剂量全身照射的移植中,移植30d,异基因骨髓组H-2Kb+细胞表达百分率明显下降,60d已下降至移植前水平;而输注高浓度和低浓度自然杀伤细胞的两组在移植后60d仍能检测到80%以上的H-2Kb+细胞表达。提示,在小鼠异基因骨髓移植中,同种异基因反应性自然杀伤细胞可以抑制移植排斥,提高造血干细胞的植入水平,促进造血及免疫重建并增加移植受鼠的生存率。

异基因造血干细胞移植中同种异体NK细胞的临床应用及研究进展

杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)识别并与靶细胞表面人类白细胞抗原(HLA)Ⅰ类分子结合后转导活化性或抑制性信号,从而调节自然杀伤(NK)细胞活性。在异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)中,当KIR识别的HLA配体缺失时,NK细胞的同种异体反应性被激活,并特异性杀伤靶细胞。NK细胞KIR分子与靶细胞HLA分子特异性识别机制参与移植物抗白血病(GvL)效应和移植物抗宿主病(GvHD)。同种异体NK细胞介导的GvL效应和降低的GvHD发生率使其适合移植。现就allo-HSCT中同种异体NK细胞的临床应用及研究进展予以综述。

同种异体幼年软骨微粒移植修复关节软骨缺损:问题及前景

背景:同种异体幼年软骨微粒制备简单、容易获取,体外培养证实软骨细胞能够迁移、增殖。在美国,同种异体幼年软骨微粒移植技术已经应用于髋、膝、肘、踝关节软骨缺损的修复。目的:对目前应用同种异体幼年软骨微粒移植修复关节软骨缺损的研究现状、应用以及价值进行综述。方法:计算机检索CNKI数据库、PubMed数据库以及Elsevier数据库的相关文献,检索词为"Allogeneic juvenile cartilage particles;cartilage tissue engineering;articular cartilage defects;repair"。查阅1983年10月至2017年6月期间收录的同种异体幼年软骨微粒修复关节软骨缺损的相关文章,包括综述、基础研究以及临床研究。通过阅读文题和摘要进行初步筛选,排除与文章主题不相关的文献,根据纳入标准和排除标准,最终纳入48篇文献进行结果分析。结果与结论:①临床上治疗软骨缺损的方法很多,在短期的随访中有较好的临床效果,能够改善患者的运动功能和缓解疼痛,但最终会导致关节软骨的进行性退变和骨性关节炎的发生;②同种异体幼年软骨微粒不同于传统的异体骨软骨移植术,其具有较强的软骨细胞增殖能力和体外形成组织工程软骨的能力,且抗原性弱,体内移植不会引起强烈的排斥反应。此外,同种异体幼年软骨微粒修复在关节镜下发现软骨缺损后即可行一期手术治疗;③同种异体幼年软骨微粒移植得良好修复效果不仅在基础研究中获得证实,同时在美国临床已经取得重要进展,其潜在的优越性能已逐渐被医生及患者接受;④然而同种异体幼年软骨微粒也存在移植物加工过程污染、疾病传播的风险。虽然该技术在美国临床已经较为广泛应用,但术后追踪随访的资料却很少,尚不能对其长期有效性进行客观评估,未来还需进行长期随访,以期可在临床广泛推广。

T淋巴细胞亚群在妊娠与复发性自然流产中作用及治疗研究进展

胚胎携带父方的MHC单元型,相对于母体犹如同种异体移植,母胎免疫耐受是妊娠建立与维持的前提,机体免疫系统在其中发挥着复杂而精细的调控作用。T淋巴细胞是机体免疫调节的主体,主要包括辅助性T淋巴细胞（Th cell）及调节性T淋巴细胞（Treg）,在抵御外界病原体感染、

结肠癌LS174细胞培养上清对树突状细胞诱导CTL杀伤效应的影响

目的:观察结肠癌细胞对人单个核细胞源树突状细胞(DC)诱导的CTL杀伤效应的影响,探讨其在人体的免疫逃避机制.方法:人外周血分离单个核细胞以GM-CSF和IL-4培养DC,用结肠癌LS174细胞的提取物诱导DC,并激活T淋巴细胞抗肿瘤效应,在此不同过程中,体系中加入人结肠癌细胞系LS174的培养上清液.以正常培养体系为对照,通过计算细胞毒杀伤率检测不同条件下DC激活同种异体T淋巴细胞杀伤肿瘤细胞的能力.结果:LS174细胞培养上清液作为条件培养的DC,在DC培养的早期阶段对DC激活过程有明显的影响(在DC培养的第1d加入肿瘤培养上清组,第3d加入肿瘤培养上清组vs正常培养的DC组,DC培养第5d加入肿瘤培养上清组,DC激活T淋巴细胞过程加入肿瘤培养上清组,P<0.05).结论:肿瘤细胞分泌的某些物质可在DC培养的早期阶段影响肿瘤的免疫,这可能是肿瘤细胞逃避机体免疫监视的机制之一.

复发性流产患者淋巴细胞主动免疫治疗效果观察

复发性自然流产（RSA）目前认为可能与同种异体免疫调节机制失衡有关。笔者对封闭抗体（BA）缺乏的RSA患者进行淋巴细胞主动免疫治疗，诱导母体对胚胎的免疫耐受，取得了较为满意的效果。

硼替佐米诱导ABCG_2^(High)耐药鼻咽癌细胞高表达NKG2D配体的实验研究

目的探讨硼替佐米诱导高表达ABCG2耐药鼻咽癌细胞对Allo-NK细胞杀伤敏感性的机制。方法利用免疫磁珠技术分离ABCG2HighCNE2/DDP细胞及Allo-NK细胞,流式细胞技术检测分离后细胞纯度及经硼替佐米处理前后靶细胞NKG2D配体表达率,LDH释放测定法检测经硼替佐米处理前后ABCG2HighCNE2/DDP细胞对Allo-NK细胞的杀伤敏感性。结果ABCG2HighCNE2/DDP细胞分离后ABCG2表达率为(91.40±2.32)%,分选后NK细胞CD3-CD16+CD56+细胞的纯度达90%以上。经硼替佐米处理之后靶细胞MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3表达率,由药物处理之前的(2.92±0.33)%、(4.27±0.33)%、(5.80±0.62)%、(11.10±3.15)%、(7.75±1.14)%分别上升到(17.52±2.04)%、(12.53±3.68)%、(15.24±2.91)%、(62.02±6.85)%、(35.69±3.23)%。在效靶比为10∶1、20∶1、Allo-NK细胞对硼替佐米处理前后ABCG2HighCNE2/DDP细胞的杀伤率分别为(15.32±13.86)%、(27.26±6.81)%及(35.06±5.10)%、(52.34±4.78)%。处理前后杀伤率差异有统计学意义(F=26.03,P=0.000)。结论硼替佐米通过诱导肿瘤细胞高表达NKG2D配体(MICA/B、ULBP1-3),使肿瘤细胞对Allo-NK细胞的杀伤敏感性增强。

与自身免疫T1D相关的控制iNKT细胞发育的基因

iNKT细胞（invariant Natural killer T cells,iNKT cells）,半恒定自然杀伤T细胞,是一群能够调控机体抗病毒、细菌、真菌、寄生虫、肿瘤、同种异体移植物以及自身组织免疫反应的免疫调节性T细胞[1,2]。与传统T细胞相比,iNKT细胞不仅具有CD1d限制性,而且可以同时表达NK细胞表面标志CD161（人类）（鼠类NK1.1）以及恒定的Vα24-Jα18/Vβ11 T细胞受体（TCR）（人类）（鼠类Vα14-Jα18/Vβ8.2、7、2 TCR）。

ALLO－LAK细胞输注治疗慢性乙型肝炎的临床观察报告

我们应用同种异体ＬＡＫ细胞（简称ＡＬＬＯ－ＬＡＫ细胞）输注治疗３０例慢性乙型肝炎病人，每周输注２次，１２次为一疗程。结果为ｅ抗原转阴率治疗组为（１１／３０）３６．７％，对照组为（５／３０）１６．７％，肝功（ＡＬＴ）复常率治疗组为（２１／３０）７０％，对照组为（１２／３０）４０％。全部观察病例未发生严重不良反应，其治疗原理和扩大临床应用有待进一步研究。

大鼠同种肝移植免疫耐受机制的研究

目的:探讨与大鼠肝移植免疫耐受相关的细胞学改变。方法:分析从肝移植物分离出的移植物浸润细胞(GIC)的表现型和功能,同时比较长期生存的BN→LEW模型和急性排斥反应的DA→LEW模型。结果:通过流式细胞仪计数确定DA→LEW受体的T细胞和激活的T细胞相对比例高于BN→LEW受体;移植后第7、14和30天,GIC表现型证实所有T细胞、OX8阳性细胞(细胞毒T细胞和NK细胞)和OX39阳性细胞(IL-2受体)的相对比例在移植后第7天最高,移植后30d下降;移植后第7天急性排斥反应时GIC细胞毒T细胞活性高于长期生存者。结论:移植后第7天免疫抑制机制已存在;在长期生存的肝移植物中细胞毒T细胞的激活和浸润均受到抑制。

细胞毒性T淋巴细胞抗病毒感染作用机制的研究进展

人类及其他动物细胞经常受到病毒感染的威胁，故能够有效的发现并清除受感染的细胞对维持器官及组织的正常功能非常重要。虽然自然杀伤细胞和活化的巨噬细胞有杀伤靶细胞的作用，但破坏病毒感染的靶细胞主要靠细胞毒性T淋巴细胞（CTL），CTL是执行细胞免疫、排斥同种异体移植物、杀伤病毒感染细胞和肿瘤细胞的效应细胞。CTL是一类具有CD^8＋表面标志、受主要组织相容性抗原I（MHCI）类分子限制的具有杀伤功能的T细胞。CTL介导的靶细胞杀伤的特点是：杀伤受T细胞受体（TCR）以及MHCI类分子的严格限制，且对靶细胞的杀伤具有特异性、程序性和快速性。本文对CTL抗病毒感染作用机制方面的研究作一综述。